Биореактивы

Тиазоловый Оранжевый представляет собой асимметричный цианиновый краситель, флуоресценция которого сильно зависит от его ближнего окружения. Тиазоловый Оранжевый практически не светится в растворе, однако тысячекратно усиливает свою флуоресценцию при его введении в двухцепочечные ДНК и РНК. Максимум поглощения Тиазолового Оранжевого в комплексе с ДНК — 509 нм, максимум излучения — 532 нм. Раствор Тиазолового Оранжевого широко используется для определения процентного содержания ретикулоцитов в периферической крови человека с помощью микроскопии и проточной цитометрии. Мы также предлагаем готовый к использованию раствор Тиазолового Оранжевого LumiCell Reticulocyte Stain для этих целей.

Краситель Cyanine7.5 - флуорофор для ближней инфракрасной области. Данное производное содержит азидогруппу для конъюгации с биомолекулами с помощью клик-реакции. Cyanine7.5 по своим фотофизическим свойствам напоминает краситель ICG (indocyanine green), но имеет более высокий квантовый выход флуоресценции. Конъюгаты с Cyanine7.5 можно использовать для неинвазивного имиджинга in vivo, поскольку спектры поглощения и эмиссии флуорофора находятся в инфракрасном окне прозрачности биологических тканей. Этот флуорофор можно использовать и в тех случаях, когда необходимо избежать высокого уровня фоновой флуоресценции от биологических объектов. Азид поставляется в виде раствора в DMSO и в сухом виде. Раствор пригоден для конъюгации в соответствии с нашим рекомендуемым протоколом.

Некатализируемая (безмедная) клик-реакция протекает между циклоалкинами (циклооктинами) и азидами. Это реакция очень быстрая и надежная; ее можно использовать флуоресцентного мечения. Этот реагент — производное водорастворимого красителя sulfo-Cyanine5, обладающего эмиссией в красной области спектра. Он хорошо подходит для мечения биомолекул в водной среде.

dСпейсер фосфорамидит (Abasic CE-Phosphoramidite) применяется для синтеза олигонуклеотидов, содержащих мономер без азотистого основания, абазический сайт. (Abasic phosphoramidite) dCпейсер фосфорамидит может быть использован при изучении повреждений и репарации ДНК. Вставка спейсера в ходе синтеза позволяет смоделировать потерю нуклеотидом способности к спариванию оснований, например, вследствие спонтанной депуринации или депиримидинирования. dCпейсер является модификацией 1’,2’-дидезоксирибозы, содержит диметокситритильную защиту гидроксиметильной группы и демонстрирует стабильность в ходе синтеза и очистки олигонуклеотидов в стандартных условиях с использованием AMA (водный аммиак / 40% метиламин, 1:1).

DDTT представляет собой сульфирующий реагент, который используется для создания фосфоротиоатных межнуклеотидных связей, повышающих стабильность и устойчивость нуклеиновых кислот, особенно РНК, к нуклеазам. Реагент подходит для автоматизированного крупномасштабного синтеза олигонуклеотидов с применением стандартных фосфорамидитов. DDTT отличается более быстрой кинетикой и более высокой стабильностью в растворе по сравнению с другими сульфирующими реагентами, такими как тетраэтилтиурамдисульфид (TETD) и реагент Бекаже соответственно. DDTT, как правило, применяется в виде 0,05 или 0,1 М раствора в смеси пиридин—ацетонитрил, период полужизни которого составляет до 6 месяцев.

JOE фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер (6-JOE). Флуоресцентный краситель JOE — производное флуоресцеина, содержащее два атома хлора и две метоксигруппы. Максимумы поглощения и испускания находятся на 503 нм и 525 нм соответственно. По спектральным свойствам JOE занимает промежуточное положение между FAM и TAMRA/ROX, и по этой причине этот флуорофор часто используется для мультиплексной детекции, в том числе при секвенировании ДНК. В нашем каталоге также представлен JOE фосфорамидит, 5-изомер. Выполненное нами сравнение кПЦР зондов, содержащих разные изомеры JOE (5-JOE и 6-JOE), не выявило между ними каких-либо существенных различий.

Алкин-ПЭГ4-активированный эфир — бифункциональная молекула, содержащая терминальную алкиновую группу и фрагмент активированного NHS-эфира. Активированные эфиры используются для мечения аминогрупп, например, лизина и концевой NH2-группы в белках и пептидах. Терминальная алкиновая группа вступает в реакцию медь-катализируемого циклоприсоединения с азидами (CuAAC) и реакцию Соногаширы. ПЭГ4 — гидрофильный линкер, обеспечивающий хорошее пространственное разделение компонентов конъюгата.

BTTAA — водорастворимый лиганд новейшего поколения, применяемый в реакции катализируемого медью (I) азид-алкинового циклоприсоединения (CuААЦ). BTTAA поддерживает степень окисления Cu (I) в катализаторе и защищает биомолекулы от окислительного повреждения во время мечения. BTTAA обеспечивает большее увеличение скорости химической реакции, чем лиганды предыдущего поколения (например, THPTA или TBTA), а также уменьшает клеточную цитотоксичность клик-реакции за счет снижения содержания меди в составе катализатора. Исходный раствор можно приготовить в ddH2O и хранить при −20°C. Избегайте циклов замораживания-оттаивания.

Гидразид биотина, содержащий остаток 6-аминогексановой кислоты в качестве спейсера, для биотинилирования реакционноспособных карбонилов макромолекул. Биотин-Х-гидразид селективно связывается в кислой среде с альдегидами, и кислотными остатками, способными окисляться до альдегидов. Он используется для получения меченых биотином гликопротеинов, гликолипидов, антител, путём связывания карбоксильных групп методом карбодиимидной сшивки. Гидразид биотина можно встретить в исследованиях окислительной модификации белков. Спейсерная группа на основе 6-аминогексановой кислоты снижает стерические затруднения при связывании со стрептавидином и авидинами.

3-Малеимидпропионовой кислоты NHS-эфир представляет собой проникающий сквозь мембраны, нерасщепляемый бифункциональный сшивающий агент. Он содержит гидроксисукцинимидную (NHS) для реакции с аминами, и малеимидную группы для реакции с тиоловыми группами. Благодаря NHS-группе линкер может быть присоединен практически к любой первичной или вторичной аминной группе белков, пептидов или низкомолекулярных аминов. Малеимидный фрагмент обеспечивает легкое присоединение к белкам и пептидам через SH-остатки цистеина, а также к другим тиолированным молекулам, таким как тиолсодержащие олигонуклеотиды. Реагент также используется для синтеза in situ химически нестабильного азида-ПЭГ4-малеимида.

Сульфотетрафторфениловый эфир дибензоциклооктина (STP-эфир ДБЦО) — это растворимый в воде реагент, который используется для модификации пептидов, антител, белков и других биомолекул, содержащих -NH2 группу. STP-эфиры гораздо медленнее гидролизуются по сравнению с NHS-эфирами, что позволяет более эффективно проводить модификацию биомолекул в водной среде. Дибензоциклооктиновый фрагмент (ДБЦО, DBCO), также известный как ADIBO или DIBAC, является наиболее часто используемым субстратом для безмедных клик-реакций, которые промотируются напряжением цикла. В такой реакции производные DBCO в отсутствие Cu (I) катализатора реагируют с биомолекулами, функционализированными азидной группой, приводя к образованию стабильных триазолов.

Транс-циклооктен (ТЦО, TCO) амидит применяется для введения фрагмента ТСО в субстраты, содержащие первичную или вторичную гидроксильные группы, в особенноcти используется для получения ТСО-модифицированных олигонуклеотидов. Транс-циклооктен легко реагирует с тетразинами по реакции Дильса-Альдера (inverse electron-demand Diels-Alder cycloaddition, IEDDA). Тетразин-транс-циклооктеновое лигирование обладает сверхбыстрой кинетикой, селективностью и длительной устойчивостью в водных средах, что важно для применений с участием низкоконцентрированных систем, например таких как белок-белковые конъюгаты и т. д.