Биореактивы

Краситель QuDye dsDNA HS, 200× — реагент для количественного анализа, высокоселективен в отношении дцДНК по сравнению с оцДНК и РНК. Для приготовления рабочего раствора концентрированный реагент QuDye dsDNA HS необходимо развести в соотношении 1:200. Использование реагента QuDye dsDNA HS является более чувствительным методом по сравнению с другими традиционными методами количественного анализа ДНК и предназначен для использования со всеми моделями флуорометров. Концентрированный раствор 200× также является компонентом набора QuDye dsDNA HS для измерения количества двухцепочечной ДНК.

sulfo-Cyanine5 — флуоресцентный краситель дальней красной области спектра, широко используемый для мечения биомолекул. Максимумы поглощения и эмиссии sulfo-Cyanine5 находятся на 646 и 662 нм, соответственно. Красители с максимумом флуоресценции в дальнем красном диапазоне (более 650 нм) широко используются в различных методах визуализации благодаря низкому уровню фоновой флуоресценции в данной области спектра. Кроме этого, они используются в мультиплексной детекции вместе с красителями ближнего красного, оранжевого, зеленого и синего диапазонов. Биотин, или водорастворимый витамин Н, играет важнейшую роль в реакциях клеточного метаболизма. Он с высокой аффинностью и некооперативно связывает авидин, гликопротеин белка куриного яйца, а также стрептавидин (бактериальный аналог авидина) и нейтравидин (дегликозилированный авидин). Таким образом, конъюгат sulfo-Cyanine5 с биотином может использоваться для качественной и количественной оценки сайтов связывания авидина в биологических образцах различного происхождения. Реагент хорошо растворим в воде, его флуоресценция не зависит от рН в диапазоне от pH 4 до pH 10. Гибкий ПЭГ3-линкер между биотином и sulfo-Cyanine5 предотвращает стерические затруднения при связывании конъюгата с авидином. Конъюгат sulfo-Cyanine5-биотин может использоваться в различных методах для визуализации целевых молекул (например, для мечения первичных и вторичных антител для Вестерн-блоттинга, иммуноанализа, цито- и гистохимии, проточной цитофлуориметрии), измерения констант связывания и диссоциации, биосенсоров на основе стрептавидина и т. д.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGGAC(N)10 GGGAC(N)10↑ CCCTG(N)14 CCCTG(N)14↓ Источник: Bacillus stearothermophilus Fl Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA Примечание: Высокая концентрация фермента в реакционной смеси приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. В присутствии SAM фермент проявляет ДНК-метилтрансферазную активность, максимальную при 48°С. При наличии в в реакционной смеси 10мМ MgCl2 рестриктазная и метилтрансферазная активности проявляются одновременно и ДНК гидролизуется специфически и полностью. При отсутствии MgCl2 ДНК только метилируется и впоследствии устойчива к гидролизу BslFI. Фермент также расщепляет ДНК в положении 11/15 от сайта узнавания. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

LumiMount Plus — готовая к использованию среда на водной основе для заключения и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. LumiMount Plus имеет вязкую консистенцию, благодаря чему среда легко наносится и равномерно распределяется по препарату, а также меньше склонна к образованию пузырей. Благодаря своему особому составу, LumiMount Plus ингибирует быстрое фотовыгорание флуоресцентных белков и красителей, что продлевает возможное время визуализации. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.43, но данный показатель увеличивается до 1.52 после испарения воды и затвердевания среды. LumiMount Plus обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от 2° до 8°C. Поскольку LumiMount Plus растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. LumiMount Plus несовместим с интеркалирующими красителями типа Hoechst, DAPI и др.

Pluronic® F-127 представляет собой неионогенный детергент, широко используемый для солюбилизации и облегчения загрузки в клетки гидрофобных молекул, таких как AM-эфиры кальциевых индикаторов Fluo-4, Fluorica-8 или потенциометрических индикаторов Di-4-ANEPS, Di-8-ANEPS. Мы предлагаем Pluronic® F-127 в виде готового к использованию 10% раствора в H2O.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGTACT AGT↑ACT TCATGA TCA↓TGA Источник: Zoogloea ramigera SCA Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: SE-буфер ROSE+ – это модифицированный универсальный буфер ROSE (Reaction Original SibEnzyme), специально разработанный для эндонуклеаз рестрикции, требующих добавления BSA для достижения 100% активности. Концентрация BSA в 1X SE-буфере ROSE+ составляет 100 мкг/мл. Подавляющее большинство эндонуклеаз рестрикции проявляют в нем 50-100% активности. Может применяться для Turbo эндонуклеаз рестрикции и реакции с двумя ферментами одновременно (double digestion). Не рекомендуется использовать данный буфер для длительной инкубации (16 ч) с ферментами, обладающими звёздчатой активностью. Состав: Условия хранения: Хранить при -20°C. Допускается хранение буфера при 4-10°C в течение 3 месяцев. Примечание: Буфер поставляется в концентрации 10Х. В нем присутствует концентрированный BSA, поэтому этот буфер требует бережной разморозки. Мы рекомендуем размораживать SE-буфер ROSE+ (10Х) при комнатной температуре и аккуратно перемешать его перед использованием. В случае нагревания концентрированного буфера до температуры, превышающей 37°C, может образовываться осадок вследствие частичной денатурации BSA.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

«ALZYME RT» – вы­со­ко­очи­щен­ный ре­ком­би­нант­ный фер­мент, пред­наз­на­чен­ный для про­ве­де­ния об­рат­ной транс­крип­ции. Фер­мент яв­ляет­ся аль­тер­на­ти­вой MMLV ре­вер­та­зы с ря­дом преи­муществ: об­ла­дает по­вы­шен­ной тер­мо­ста­биль­ностью и про­цес­сив­ностью. Поз­во­ляет син­те­зи­ро­вать фраг­менты кДНК дли­ной до 12 000 п.н. Оп­ти­маль­ная тем­пе­ра­ту­ра ра­бо­ты – 50 ℃. Ус­ло­вия для инак­ти­ва­ции: 80 ℃ (10 ми­нут). Время ин­ку­ба­ции (син­те­за) за­ви­сит от мат­ри­цы и варьи­рует в пре­де­лах от 10 се­кунд до 60 ми­нут. По свойст­вам об­рат­ная транс­крип­та­за «ALZYME RT» схо­жа с FeLV, ко­то­рая по своей при­ро­де точ­нее, чем MMLV-RT. Об­рат­ная транс­крип­та­за «ALZYME RT» со­дер­жит му­та­ции, ко­то­рые до­пол­ни­тель­но по­вы­шают тер­мо­ста­биль­ность и точ­ность. Буфер реак­цион­ный «ALZYME RT B» обес­пе­чи­вает оп­ти­маль­ные ус­ло­вия для ра­бо­ты обрат­ной транс­крип­та­зы «ALZYME RT». Обрат­ная транс­крип­та­за «ALZYME RT» под­хо­дит для про­ве­де­ния ОТ-ПЦР «в одной про­бир­ке» с ис­поль­зо­ва­нием «ALZYME Taq».

Neuro-DiO представляет собой зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель с максимумом возбуждения при 497 нм и максимумом эмиссии при 514 нм. Neuro-DiO является аналогом DiO, широко используемого антероградного и ретроградного нейротрейсера и мембранного красителя для живых и фиксированных тканей и клеток. В отличие от DiO, Neuro-DiO обладает лучшей растворимостью в мембранах и менее склонен к образованию нефлуоресцентных агрегатов, снижающих скорость диффузии красителя. Neuro-DiO равномерно метит нейроны посредством диффузии в плазматической мембране. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако, такой перенос может наблюдаться при повреждении мембран, например, после секционирования ткани. Neuro-DiO можно использовать совместно с другими липофильными трейсерами (DiI, DiD, DiR и т. д.) в задачах двухцветного и многоцветного имиджинга.

Готовый набор для мечения антител красителем AF 488, эквивалентом Alexa Fluor 488®. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель, который, благодаря своей гидрофильности, хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. AF 488 представляет собой сульфированное производное красителя родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-, обладающими практически идентичными фотофизическими свойствами, но требующими их разделения, поскольку использование смеси изомеров приводит к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Тетрафторфениловые (TFP) эфиры принадлежат к группе активированных сложных эфиров, которые широко используются для конъюгации флуорофоров с первичными и вторичными аминами биомолекул. Как и гидроксисукцинимидные (NHS) эфиры, они образуют прочную амидную связь между красителем и соединением, которое подвергается модификации, однако, TFP сложные эфиры более стабильны при основных значениях pH, характерных для реакций с аминами, а также менее подвержены спонтанному гидролизу.