Биореактивы

Условия хранения: Хранить при -20°C Последовательность: GTTTTCCCAGTCACGAC Примечание: Поставляются в сухом виде.

Водорастворимый краситель с аминогруппой для мечения с помощью ферментативного трансаминирования и конъюгации с электрофилами. Cyanine5 - популярный цианиновый краситель, совместимый с различным оборудованием для детекции флуоресценции. Производные sulfo-Cyanine5 обладают хорошей растворимостью в воде.

DOTA (dodecane tetraacetic acid, додекантетрауксусная кислота, также известная как тетраксетан) — комплексообразователь для ионов лантанидов. DOTA-ПЭГ4-азид представляет собой бифункциональный линкер, содержащий хелатирующую группу и азид для конъюгации с алкин-содержащими биомолекулами. Данное производное также содержит длинный гидрофильный ПЭГ4-линкер, который позволяет разделять в пространстве DOTA и связываемую с ним биомолекулу. Линкер также увеличивает растворимость вещества в воде, что упрощает его конъюгацию. DOTA-ПЭГ4-азид может быть использован для мечения радиотерапевтических агентов или визуализирующих зондов и обнаружения меченых опухолей методами ПЭТ, ОФЭКТ и КТ.

MD ДНК эндонуклеаза Mal I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(mA)TC G(mA)↑TC CT(mA)G CT↓(mA)G Источник: Из штамма E.Coli, несущего клонированный ген Mal из Marinococus albus I. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК pBR322 (dam-метилированной) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: pBR322 ДНК (dam-methylated) Оптимальный буфер: SE-буфер MalI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 50 75 50 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер MalI.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду. Описание: РНК зависимая ДНК полимераза. Катализирует матричный синтез ДНК используя в качестве матрицы РНК или одноцепочечную ДНК. Необходим праймер. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для включения 1 нмоля dТTP в кислотонерастворимую фракцию, образуемую на матрице поли (rA) с олиго (dT)-праймера за 10 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Обратная транскриптаза M-MuLV Условия хранения: 10 mM Калия фосфат (pH 7.5); 0,1 mM EDTA; 200 mM NaCl; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Высокая концентрация фермента может привести к ингибированию ОТ-ПЦР. В этом случае следует разбавить препарат фермента в 5, 10 или 20 раз буфером для разбавления M-MuLV ревертазы (прилагается).

Реакционная смесь 5X qPCRmix-HS SYBR+HighROX оптимизирована для постановки ПЦР с SYBR Green I в присутствии референсного красителя ROX, и позволяет получать результаты со значительным превышением уровня сигнала над фоновой флуоресценцией и низким порогом насыщения реакции (cycle threshold, Ct). В состав 5X qPCRmix-HS SYBR+HighROX входят все необходимые компоненты для ПЦР: HS Taq ДНК полимераза, интеркалирующий краситель SYBR Green I, референсный краситель ROX, смесь dNTP, Mg2+, ПЦР буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, ДНК и воду. 5X qPCRmix-HS SYBR+HighROX подходит для Real-Time амплификаторов, требующих высокой концентрации красителя ROX в реакции (например, StepOne, StepOne Plus).

MD ДНК эндонуклеаза Bls I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(5mC)NGC G(5mC)N↑GC (5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G Источник: Bacillus simplex 23 Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза, как минимум, одного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Субстрат для определения активности: Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три канонических сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2, 3]. Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 10 50 100 75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: Неспецифический гидролиз: Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 5 ед фермента Bls I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.

MD ДНК эндонуклеаза Pkr I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(5mC)NG(5mC) G(5mC)N↑G(5mC) (5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G Источник: Planomicrobium koreense 78k Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4). Субстрат для определения активности: Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2]. Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 10 25 100 100 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: Неспецифический гидролиз: Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCCNNNNNGGCC GGCCNNNN↑NGGCC CCGGNNNNNCCGG CCGGN↓NNNNCCGG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sfi I из Streptomyces fimbriatus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 25 25 75 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 50°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCWGGNNNGGCC.Не блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCNNNNNNGGCCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: При 37°C активность 75%-100% от максимальной. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCCGGCC GGCCGG↑CC CCGGCCGG CC↓GGCCGG Источник: Rhizobium yangligense Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК Аденовируса-2 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК Аденовируса-2 Оптимальный буфер: SE-буфер RigI + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 50 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl;0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 mkg/ml BSA, 50% глицерин. При -20ºC хранить не более 7 дней. При более длительном сроке хранения рекомендуется -70°С.Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов Ad2 ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг Ad2 ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.Чувствительность к метилированию: Блокируется mCG и GmC метилированием: 5`-GGC(m5C)GGCC-3`/3`-CCGG(m5C)CGG-5` и 5`-GG(m5C)CGG(m5C)C-3`/3`-C(m5C)GGC(m5C)GG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер RigI, BSA(10 мг/мл). Примечания: Для достижения 100% активности в реакционную смесь следует добавить BSA до концентрации 100 мкг/мл.

Алкин-ПЭГ2-NHS-эфир — бифункциональная молекула, содержащая терминальную алкиновую группу и фрагмент активированного NHS-эфира. Активированные эфиры используются для мечения аминогрупп, например, лизина и концевой NH2-группы в белках и пептидах. Терминальная алкинильная группа вступает в реакцию медь-катализируемого циклоприсоединения с азидами (CuAAC) и реакцию Соногаширы. ПЭГ2 — гидрофильный линкер, обеспечивающий хорошее пространственное разделение компонентов конъюгата.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином, который на ранних стадиях апоптоза перемещается со внутренней стороны клеточной мембраны во внешнюю. Данный аннексин V представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 647 — ярким, фотостабильным, гидрофильным дальне-красным флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с Cyanine5 (максимум поглощения — 655 нм, максимум эмиссии — 680 нм). Красители с максимумом флуоресценции в дальнем красном диапазоне (более 650 нм) широко используются в различных методах визуализации благодаря низкому уровню фоновой флуоресценции в данной области спектра. Окрашивание на аннексин V-AF 647 не позволяет разделять популяции апоптотических и некротических клеток. Для этого требуется дополнительное окрашивание клеток непроникающими в живые клетки ядерными красителями — йодистым пропидием или YODi-3. Для этого также можно использовать готовый набор для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF 647.