Биореактивы

3,5-бис-[(E)-2-фенилэтенил]-BDP — это соединение симметричного строения из ряда бис(гетеро)арилэтенил-замещённых дифторидов дипиррометенбора. В молекуле присутствуют в транс-конфигурации относительно двойных связей две фенилэтенильные группы, что делает данное производное красителя BDP в значительной степени липофильным. Это нефункционализированное производное BDP может использоваться в микроскопии для проникновения внутрь клетки и окрашивания липидов. Производные флуорофора BDP обладают высокими квантовым выходом и фотохимической стабильностью, и могут применяться в качестве флуорогенных зондов для индикации липидных капель. Для производных с расширенной π-электронной системой благодаря введению ароматических, алкенильных или алкинильных заместителей в 3- и 5-положении дипирринового остова характерен сдвиг эмиссионного спектра в красную область по сравнению с большинством маркеров липидных капель из ряда классических красителей семейства бордипиррометена.

Eva488 - краситель для ПЦР реального времени, не ингибирующий реакцию и характеризующийся ярким разгоранием. Это аналог Eva Green, димерный акридин, флуоресцирующий при связывании с двухцепочечной ДНК. Флуоресценция красителя Eva488 попадает в канал флуоресцеина. Краситель поставляется в виде раствора в воде концентрации 20×.

Краситель dsGreen обладает высокой чувствительностью и селективностью в отношении двухцепочечной ДНК. dsGreen применяется для связывания с ДНК и прокраски гелей. Данный продукт представлен в виде твердой формы и может быть использован для приготовления растворов согласно протоколам проводимых исследований. Lumiprobe также производит dsGreen в форме раствора, специально оптимизированного для метода ПЦР реального времени.

Алкиновое производное инфракрасного флуорофора Cyanine7.5. Этот алкин вступает в медь-катализируемую клик-реакцию с азидами. Флуорофор хорошо подходит для неинвазивного имиджинга in vivo. Его фотофизические свойства похожи на ICG (indocyanine green), но квантовый выход флуоресценции выше.

5-Этинилуридин (EU) — широко используемый в молекулярной биологии реагент для изучения и оценки синтеза РНК. EU свободно проникает в клетки и фосфорилируется киназами в рамках дополнительного пути синтеза пиримидиновых нуклеотидов. Образовавшийся 5-этинилуридин-5’-трифосфат с помощью РНК-полимераз I, II, III встраивается в образующуюся de novo РНК вместо уридина, при этом не встраиваясь в ДНК. Клеточная РНК, содержащая модифицированный уридин, может быть достаточно быстро и с высокой чувствительностью детектирована с использованием клик-реакции и последующей флуоресцентной визуализации. Так, алкинильная группа в пятом положении уридина в структуре образовавшейся РНК реагирует с азидами флуоресцентных красителей или биотина по реакции медь-катализируемого циклоприсоединения (CuAAC). Меченая РНК может быть детектирована различными методами, например с использованием флуоресцентной микроскопии или проточной цитометрии, что позволяет оценить уровни транскрипции в клетке. Кроме этого, в экспериментах in vivo 5-этинилуридин имеет преимущество перед своим аналогом, 5-бромоуридином, поскольку азиды флуоресцентных красителей обладают гораздо лучшей проникающей способностью в ткани по сравнению с антителами, которые используются для детекции 5-бромоуридина. Это позволяет использовать для анализа крупные образцы тканей и органов и окрашивать их целиком.

CDr20 (Cell Designation red 20) — высокоспецифичный флуорогенный химический зонд для мечения микроглии как в клеточных культурах, так и в мозге живых животных. CDr20 является субстратом специфичной для микроглии UDP-глюкуронозил-трансферазы Ugt1a7c. Глюкуронирование CDr20 с помощью Ugt1a7c вызывает ярко-красную флуоресценцию красителя в микроглии, совпадающую с экспрессией маркеров P2ry12, Csf1r, Cx3cr1 и Iba-1 [1]. CDr20 может быть новым инструментом для идентификации и визуализации микроглии в исследованиях нервных расстройств как in vitro, так и in vivo, а также для сортировки флуоресцентно-активированных клеток микроглии (FACS) после их мечения CDr20.

KeepRNA — нетоксичный водный раствор, быстро проникающий в клетки и ткани, и защищающий РНК от деградации. Раствор является полным аналогом RNAlater™. KeepRNA используется для быстрой стабилизации и хранения клеточной РНК в тканях и клеточных культурах. Раствор позволяет хранить и транспортировать образцы до 7 дней при комнатной температуре, или около 1 месяца при 4°C, не прибегая к трудоемким процедурам быстрого выделения РНК или предварительному замораживанию ткани. Клетки и ткани после хранения в KeepRNA можно использовать для дальнейшего выделения из них мРНК и тотальной РНК, а также для гистологических и иммунохимических методик. РНК, выделенная из фрагментов ткани после хранения в KeepRNA, сохраняет свой качественный и количественный состав и может быть использована в дальнейшем для любых молекулярно-биологических задач. При хранении реагента возможно образование осадка, в таком случае необходимо инкубировать его при 37°C, перемешивая до полного растворения осадка.

Окрашивание по Нисслю — широко используемый гистологический метод визуализации морфологии нервной ткани. Метод основан на взаимодействии основных красителей с нуклеиновыми кислотами клеток. Из-за интенсивного синтеза белка, перикарион нейронов имеет высокое содержание рибосомальной РНК в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме (т.н. «вещество Ниссля»), и в следствие этого, окрашивание нейронов основными красителями в цитоплазме более выражено, чем в ядрах. На этом основании окрашенные по Нисслю нейроны можно отличить от глиальных клеток, а данный метод считается специфичным для обнаружения нейронов. Deep-Red Fluorescent Nissl Stain — непроникающий в живые клетки краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с РНК и ДНК. Длинноволновая флуоресценция Deep-Red Fluorescent Nissl Stain сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

H2DCFDA (2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетат) — широко используемый реагент для изучения продукции активных форм кислорода в живых клетках. H2DCFDA представляет собой нефлуоресцирующее производное флуоресцеина — его восстановленную ацетилированную форму. Реагент начинает флуоресцировать только после отщепления ацетильных групп и окисления внутри клетки, превращаясь в 2′,7′-дихлорофлуоресцеин. Он характеризуется яркой флуоресценцией в зеленой области спектра (максимум поглощения при 511 нм, максимум флуоресценции при 533 нм). Данный реагент подходит для исследования живых клеток и не совместим с фиксацией образцов. Ацетильные группы в структуре H2DCFDA повышают его липофильность и улучшают проникающую способность реагента через клеточную мембрану. Попадая внутрь клетки, он деацетилируется клеточными эстеразами, из-за чего приобретает заряд и лучше удерживается внутри клетки. Окисление активными формами кислорода приводит к образованию флуоресцирующего продукта — 2′,7′-дихлорофлуоресцеина и может быть детектировано различными способами, например с помощью проточного цитометра, планшетного ридера или флуоресцентного микроскопа.

LumiTracker Mito Red FM — катионный красный флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. Краситель пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них, поэтому часто используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий. Флуоресценция LumiTracker Mito Red FM исчезает после фиксации альдегидами, поэтому данный краситель подходит только для работы с живыми клетками.

BDP R6G - яркий и фотостабильный краситель, спектры поглощения и эмиссии которого соответствуют красителю R6G (родамину 6G). В отличие от ксантенового красителя R6G, BDP R6G - бордипиррометеновый флуорофор. Это производное - терминальный алкин для медь-катализируемой реакции алкин-азидного циклоприсоединения.

Вакуолин-1 — низкомолекулярное соединение на основе триазина, специфический ингибитор Са2+–зависимого лизосомального экзоцитоза. Ингибитор проникает внутрь клетки, где блокирует слияние лизосом с плазматической мембраной. Вакуолин-1 не оказывает влияния на другие органеллы, а также эндоцитарный и секреторный трафик. Ингибитор активно используется в исследованиях по высвобождению лизосомального содержимого и модуляции аутофагии.