Поиск

Фьюжн ДНК-полимераза является рекомбинантным полипептидом, состоящим из слитых термостабильной ДНК-полимеразы Pyrococcus furiosus (Pfu) и ДНК- связывающего белка термофильных архей вида Sulfolobus solfataricus (Sso7d). Белок Sso7d связывается с малой бороздкой двухцепочечной ДНК и дополнительно стабилизирует комплекс полимеразы с матрицей. Благодаря этому Фьюжн ДНК-полимераза, обладает повышенной процессивностью, точностью синтеза, скоростью амплификации фрагментов и повышенной устойчивостью к ингибиторам ПЦР по сравнению с нативной Pfu ДНК- полимеразой [1]. Фьюжн ДНК-полимераза обладает 5’→3’ полимеразной активностью, 3’→5’ экзонуклеазной активностью и синтезирует продукты с тупыми концами. Фьюжн ДНК-полимераза является хорошим выбором для рутинного клонирования и может использоваться для получения методом ПЦР длинных или сложных ампликонов. Примеры использования Фьюжн ДНК-полимеразы представлены в конце описания. Фьюжн ДНК-полимераза выделена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным фрагментом ДНК, состоящим из слитых генов термостабильной ДНК-полимеразы Pyrococcus furiosus (Pfu) и ДНК-связывающего белка Sulfolobus solfataricus (Sso7d). Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 74°С.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген I фага T7. Описание: Катализирует синтез РНК, используя в качестве матрицы ДНК, содержащую промотор фага Т7. T7 РНК полимераза используется для приготовления меченого РНК зонда и для проведения транскрипции in vitro. Определение единицы активности: За одну единицу активности T7 РНК полимеразы принимали количество фермента необходимое для включения 1 нмоля NTP в кислотонерастворимую фракцию за 60 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Т7 РНК полимераза Условия хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 1 mM EDTA; 20 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°C.

Антитела кролика к иммуноглобулинам собаки идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины собаки 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

Обратная транскриптаза (ревертаза) Magnus предназначена для синтеза первой цепи комплементарной ДНК с одноцепочечной матрицы РНК. Обратная транскриптаза Magnus — модифицированная ревертаза MMLV. Особенностью Magnus является повышенная термостойкость и отсутствие активности РНКазы H, что позволяет: – Увеличить температуру обратной транскрипции для повышения специфичности реакции. – Проводить синтез кДНК на GC-богатых областях и на матрицах со сложной вторичной структурой. – Получать кДНК длиной до 12 000 п.о. Область применения: • Синтез первой цепи кДНК с дальнейшей возможностью амплификации, клонирования и экспрессии. • Синтез первой цепи кДНК с последующим анализом с помощью ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ). Частные случаи применения: синтез первой цепи кДНК-копии РНКвирусов для последующей качественной или количественной оценки.

Тест-система для выявления РНК вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота методом одностадийной ОТ-ПЦР.

Ненуклеозидный фосфорамидит, предназначенный для введения в олигонуклеотиды остатка флуоресцеина по 5’-положению. Бесцветная твердая пена. Хорошо растворим в ацетонитриле и дихлорметане.

Антитела мыши к иммуноглобулину IgM человека: пероксидаза идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgM человека 100 % IgA человека <1% IgG человека <1% Молекула IgM представляет пентамерный комплекс, образованный из пяти мономеров-иммуноглобулинов классического строения, соединенных Fc-фрагментами с помощью дисульфидных связей и J-цепи. Такой комплекс имеет большую молекулярную массу (970 кДа), поэтому он плохо проникает в ткани. В процессе иммунного ответа первыми вырабатываются IgM антитела. IgM, связавшись с антигеном, претерпевает конформационные изменения, после чего приобретает наибольшую способность связывать и активировать белки системы комплемента. Основная физиологическая функция IgM - нейтрализация патогенов в кровяном русле. Помимо пентамера, IgM в мономерной форме присутствует на мембране B-лимфоцитов, выполняя роль антигенраспознающего рецептора.

10-кратный буфер для реакции лигирования, совместимый с Т4 ДНК-лигазой.

Di-4-ANEPPS представляет собой потенциал-чувствительный краситель семейства амино-нафтил-этенил-пиридиния (Amino-Naphthyl-Ethenyl-Pyridinium, ANEP), который широко используется в качестве быстрореагирующего индикатора мембранного потенциала. Краситель не флуоресцирует в несвязанном с мембранами состоянии и отвечает только на колебания электрического потенциала в окружающей его среде. Скорость оптического ответа Di-4-ANEPPS достаточна для обнаружения миллисекундных колебаний мембранного потенциала в возбудимых клетках, таких как отдельные нейроны и клетки сердца, а также для имиджинга интактного мозга. Величина потенциал-зависимого изменения флуоресценции красителя составляет около 2-10% на 100 мВ. Краситель также демонстрирует потенциал-зависимый сдвиг в спектре возбуждения, что позволяет количественно оценивать колебания мембранного потенциала с использованием ратиометрических подходов. Di-4-ANEPPS относительно быстро интернализуется клетками, поэтому его преимущественно используют для краткосрочных экспериментов. Мы также предлагаем краситель Di-8-ANEPPS, который обладает более липофильными свойствами и лучше удерживается во внешнем слое клеточной мембраны. Поскольку Di-4-ANEPPS связывается с клеточной мембраной, он может быть также использован в качестве маркера плазматических мембран и эндоцитоза. Максимумы возбуждения/эмиссии Di-4-ANEPPS в метаноле составляют 496/705 нм соответственно. В липидах и клеточных мембранах спектры возбуждения и излучения красителя обычно смещены в синий цвет по сравнению с органическими растворителями. Di-4-ANEPPS можно вводить в клетки прямым добавлением стокового раствора в культуральную среду, с использованием мягкого детергента Pluronic® F-127 или методом ретроградного мечения. В качестве отправной точки используйте рабочую концентрацию 5-10 мкМ. Точную концентрацию красителя следует определять экспериментально.

Источник: Выделена из бактериофага Т7 который получен из инфицированого штамма E.coli с неактивными системами метилирования Dam, Dcm Описание: Двухцепочечная линейная ДНК длиной 39936 пар оснований. Молекулярный вес 26х106 дальтон. Условия хранения: 10 mM Tris-HCl; (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С.

Использование в клинике: Ревматоидный фактор (РФ) представляет собой аутоантитела к собственным иммуноглобулинам класса G человека. Присутствие высоких концентраций РФ в сыворотке крови характерно для больных аутоиммунными заболеваниями, в том числе болезнью Лима, остеоартритом, моно- и полиартритом, ревматоидным артритом и др. Определение уровня РФ необходимо для повышения надежности диагностики ревматоидных заболеваний. Нормой для здорового донора является уровень РФ не более 25 МЕ/мл. Принцип метода: Метод основан на иммунологической реакции между иммобилизоваными на поверхности частиц латекса иммуноглобулинами класса G человека и ревматоидным фактором, присутствующим в образце. Образующийся в зоне эквивалентности иммунный комплекс вызывает видимую агглютинацию частиц латекса. Уровень РФ выше, чем 20 МЕ/мл выявляется появлением агглютинации латексных частиц в течение 2 минут. Для предотвращения ложно-положительной реакции для разведения проб используется входящий в состав набора буфер для разведения.