Биореактивы

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCGCC GG↑CGCC CCGCGG CCGC↓GG Источник: Micrococcus lylae 113 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 25 10 10 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Антитела кролика к коллагену I, III крысы, аффинно-очищенные, идеально подходят для использования в методах вестерн-блота и иммуногистохимии (парафиновые срезы тканей), так как они связываются как с нативным, так и с термически денатурированным коллагеном I, III типа.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWWGG C↑CWWGG GGWWCC GGWWC↓C Источник: Bacillus stearothermophilus T1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер 2K Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 25 75 10 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 60°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2K Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Тест-система для выявления ДНК генетически модифицированной сои линии DAS 44406 в продуктах питания и кормах для животных методом ПЦР.

Стандартный флуоресцеиновый фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер флуоресцеина (6-FAM). Реагент совместим с различными олигонуклеотидными синтезаторами.

Реагенты серии GenJect™ (GenJector-U, GenJect-39 и GenJect-40) являются оригинальной разработкой “Молекта” и эффективны для трансфекции плазмидной ДНК (включая CRISPR плазмиды), а также линейных коротких и длинноцепочечных молекул ДНК и РНК (siRNA, mRNA) в присутствии сыворотки крови в широкий спектр эукариотических клеточных линий, включая суспензионные и адгезионные HeLa, HEK293T, CHO-K1, SH-SY5Y, Neuro2A и др., стволовые клетки и первичные клеточные культуры

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCRYGG C↑CRYGG GGYRCC GGYRC↓C Источник: Bacillus stearothermophilus DS Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Термолабильная щелочная фосфатаза удаляет фосфаты с 5`- и 3`-концов ДНК, РНК и ДНТФ. Может быть использована вместо антарктической фосфатазы Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген щелочной фосфатазы из Alteromonas undina P2 Описание: Термолабильная щелочная фосфатаза (англ. TAP) катализирует дефосфорилирование 5`- и 3`-концов ДНК и РНК. Также гидролизует рибо- и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты. Определение единицы активности: За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфат (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 16°C. Реакционная смесь содержала 1Х SE-буфер W, 10 mM пара-нитрофенилфосфат. Оптимальный буфер: SE-буфер W Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°:C); 0.1 mM ZnCl2; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Термолабильную щелочную фосфатазу не рекомендуется разбавлять ввиду возможной потери активности. Функциональный тест: В результате обработки 1 мкг ДНК плазмиды pUC19/HindIII в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1Х SE -буфер W и 1 мкл препарата фермента, в течение 30 мин при 16°C и последующей сшивки с помощью Т4 ДНК лигазы и трансформации клеток E.coli,получали >10-кратное уменьшение числа выросших колоний по сравнению с использованием необработанной ДНК pUC19/Hind III. Протокол дефосфорилирования 5′-концов ДНК с помощью ТАР после гидролиза эндонуклеазой рестрикции (ЭР): На 20 мкл реакционной смеси: 10Х SE буфер ЭР (или буфер “W”) – 2 мкл, ДНК – 0,5-1мкг, деионизованная вода – до 20 мкл. Добавить 1 мкл эндонуклеазы рестрикции, перемешать пипетированием. Инкубировать в течении 0,5-1 часа при оптимальной температуре. Охладить реакционную смесь во льду в течение 1-2 мин!!! Добавить 1 мкл (5 ед.) щелочной фосфатазы (Е365/Е366), перемешать пипетированием. Инкубировать в течение 0,5-1 часа при 16°C(при 25°C активность фермента составляет 75-100%). Прогреть реакционную смесь при 65°C в течение 20 мин. Можно использовать обработанную ДНК для дальнейших экспериментов. Если требуется, очистить ДНК гель-фильтрацией, на спин-колонках или высадить 96%-ным этанолом.

Наборы Mint kit-2 предназначены для приготовления двухцепочечной амплифицированной кДНК, обогащенной полноразмерными последовательностями, на основе тотальной или полиА+ РНК. Mint kit-2 содержит дополнительные адаптеры, позволяющие приготовить кДНК, оптимальную для последующего секвенирования на платформах Roche/454, ABI/SOLiD или Illumina/Solexa и для направленного клонирования библиотек кДНК.

Ламинины являются семейством гликопротеинов, которые секретируются во внеклеточный матрикс в виде α-β-γ гетеродимеров, каждый из которых имеет пять, четыре и три генетически различные формы соответственно. Ламинин - основной не коллагеновый компонент базальной мембраны, обладающий множеством функций, чаще всего связаными с клеточными функциями (адгезия, дифференцировка, миграция, поддержка фенотипа и защита от апоптоза). Данный продукт B Lam-C был получен из плаценты человека без ферментной обработки и очищен методами ион-обменной хроматографии и гель-фильтрации.

MD ДНК эндонуклеаза Pcs I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: (5mC)GNNNNNNN(5mC)G (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G G(5mC)NNNNNNNG(5mC) G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC) Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК. Субстрат для определения активности: Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5′-A(5mC)GT-3′) и последовательность ДНК 5′-GACGTATAAAACGTT-3′ 3′-CTGCATATTTTGCAA-5′ В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI: 5′-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3′ 3′-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5′ Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50-75 50-75 0 10-25 50-75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.Лигирование: Неспецифический гидролиз: Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер PcsI.