Биореактивы

ATT 550 — желтый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. ATT 550 является структурным аналогом ATTO® 550. ATT 550 — катионный краситель. После связывания с субстратом краситель несет суммарный электрический заряд +1. АТТ 550 карбоновая кислота представляет собой нереактивную форму красителя АТТ 550, которую можно использовать в качестве эталонного стандарта в экспериментах с конъюгатами АТТ 550. Кроме того, карбоксильная группа может реагировать с гидразинами, гидроксиламинами и аминами с использованием карбодиимидов, таких как EDAC.

BCN-ПЭГ4-Cyanine3 линкер содержит функциональную группу, бициклононин, связанную с флуорофором Cyanine3. Бицикло[6.1.0]нонин (BCN) — это циклооктин, обладающий значительной реакционной способностью среди циклоалкинов в реакциях стерически промотируемого алкин-азидного циклоприсоединения (SPAAC). Конъюгирование циклооктинов посредством безмедной клик-химии используется для мечения с высокой конверсией моноклональных антител, содержащих аминокислоту, модифицированную азидо-группой [1].

ПЭГ3-дикарбоновая кислота - гомобифункциональный линкер с двумя карбоксигруппами, с линкером PEG3. Линкер отличается высокой гидрофильностью, пригоден для конъюгации и иммобилизации белков, пептидов и других биомолекул. Карбоксильную группу можно активировать карбодиимидами.

Азид-ПЭГ6-ОН (азидо-ПЭГ6-спирт) — водорастворимый гетеробифункциональный сшивающий агент с первичной гидроксильной группой, азидной группой и гидрофильным линкером ПЭГ6 между ними. Азидная группа вступает в клик-реакции с алкинами, BCN или DBCO с образованием стабильной триазольной связи. Гидроксильная группа позволяет производить дополнительную ее дериватизацию или замену альтернативными реакционноспособными функциональными группами.

DREADD агонист 21 (Соединение 21, C21) представляет собой синтетическое соединение для селективной активации hM3Dq (возбуждающих) и hM4Di (ингибирующих) DREADD (Designer Receptor Exclusively Activated by Designer Drugs) рецепторов, полученных из мускаринового ацетилхолинового рецептора M3 (hM3) человека. DREADD агонист 21 не вызывает активацию самих hM3-рецепторов и проявляет крайне слабое сродство к гистаминовым H1, серотониновым 5-HT2A, 5-HT2C рецепторам и α1A-адренорецепторам (Ki = 6, 66, 170 и 280 нМ соответственно) [1]. DREADD агонист 21 обычно используется в качестве хемогенетического инструмента для удаленного управления активностью нейронов. Он демонстрирует хорошую проницаемость в мозг и способен in vivo активировать нейроны, экспрессирующие hM3Dq DREADD-рецепторы, и подавлять активность нейронов, экспрессирующих hM4Di DREADD-рецепторы [2]. Данный продукт представлен в виде дигидрохлорида, водорастворимой версии DREADD агониста 21.

Реакционноспособное производное красителя Cyanine5.5, активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир. Применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках и олигонуклеотидах. Cyanine5.5 излучает в дальней красной - ближней ИК области. Такая флуоресценция хорошо подходит для тех случаев, когда важно минимизировать влияние фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для неинвазивного имэджинга животных в ближнем ИК-излучении. Реагент может использоваться вместо NHS-производных Cy5.5®, DyLight 680.

Алкиновое производное инфракрасного флуорофора Cyanine7.5. Этот алкин вступает в медь-катализируемую клик-реакцию с азидами. Флуорофор хорошо подходит для неинвазивного имиджинга in vivo. Его фотофизические свойства похожи на ICG (indocyanine green), но квантовый выход флуоресценции выше.

Биотин цистамин является отщепляемым биотинилирующим агентом. Снятие биотиновой метки проводят путем восстановления дисульфидных связей линкера соответствующими стандартными агентами, такими как меркаптоэтанол (BME), дитиотреитол (ДТТ), трис (2-карбоксиэтил) фосфин (TCEP). Биотин цистамин гидрохлорид — стабильная форма реагента для биотинилирования биомолекул с использованием функциональной аминогруппы.

Стандартный флуоресцеиновый фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 5-изомер (5-FAM). Реагент совместим с различными олигонуклеотидными синтезаторами.

Тирамидная амплификация (TSA) — самый универсальный и эффективный способ усиления интенсивности флуоресцентного сигнала, применяемый в иммуногистохимии (ИГХ, IHC), иммуноцитохимии (ICC) и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Метод TSA основан на способности пероксидазы хрена (HRP) в присутствии низких концентраций пероксида водорода превращать меченый тираминсодержащий субстрат в окисленный, высокореактивный свободный радикал, который ковалентно связывается с остатками тирозина белковых молекул, расположенных рядом с ним. По сравнению с обычными процедурами, метод TSA увеличивает чувствительность иммунофлуоресцентного обнаружения целевых молекул более чем в 100 раз, благодаря чему он особенно подходит для обнаружения мишеней с низкой концентрацией. В применениях, где не требуется повышение чувствительности обнаружения, TSA позволяет значительно снижать концентрации антител или зондов без потери интенсивности сигнала, и тем самым уменьшать фоновое окрашивание, возникающее из-за перекрестной реактивности или неспецифического связывания антител. Поскольку связывание тирамидной метки является ковалентным, тирамиды разных красителей можно использовать в нескольких последовательных раундах TSA-окрашивания, для обнаружения нескольких мишеней в одном и том же образце. Данный тирамид — конъюгат водорастворимого зеленого флуоресцентного красителя AF 488. AF 488 тирамид является компонентом многих наборов для тирамидной амплификации сигнала. Этот реагент можно использовать с любым антителом или другими молекулами (стрептавидин и др.), конъюгированными с HRP, для окрашивания клеток и тканей методами иммунофлуоресценции.

DusQ 1 — тушитель флуоресценции, наиболее эффективное поглощение находится в диапазоне 480–580 нм, максимум поглощения на 522 нм. Для полного аналога данного тушителя показано [1-2] как динамическое (FRET), так и статическое тушение флуоресценции, по этой причине DusQ1 может использоваться в гибридизационных зондах типа TaqMan, Molecular Beacon, Scorpion для тушения флуоресценции широкого спектра флуорофоров (включая FAM, JOE, VIC, R6G, HEX, TET). Использование нефлуоресцирующих тушителей в качестве акцептора FRET-пары обладает рядом преимуществ по сравнению с использованием в качестве тушителей флуорофоров. В составе зонда хромофор DusQ 1 более эффективно поглощает флуоресценцию донора FRET-пары, что позволяет значительно снизить фоновую флуоресценцию зонда и, таким образом, увеличить отношение сигнал/шум и увеличить динамический диапазон сигнала. Зонды на основе DusQ 1 удобно применять в мультиплексном анализе, поскольку данный тушитель, в отличие от флуоресцентных FRET-акцепторов, не обладает собственной флуоресценцией и не «занимает» доступные для исследователя детектирующие каналы.

Амино-11-ddUTP - терминирующий трифосфат для ферментативного мечения 3'-конца ДНК аминогруппой. Нуклеотид включается в ДНК Taq-полимеразой, секвеназой, фрагментом Кленова. ДНК с аминогруппой может быть помечена активированными эфирами, в том числе флуоресцентных красителей.