Биореактивы

Реагенты серии GenJect™ (GenJector-U, GenJect-39 и GenJect-40) являются оригинальной разработкой “Молекта” и эффективны для трансфекции плазмидной ДНК (включая CRISPR плазмиды), а также линейных коротких и длинноцепочечных молекул ДНК и РНК (siRNA, mRNA) в присутствии сыворотки крови в широкий спектр эукариотических клеточных линий, включая суспензионные и адгезионные HeLa, HEK293T, CHO-K1, SH-SY5Y, Neuro2A и др., стволовые клетки и первичные клеточные культуры

Стрептавидин: пероксидаза (P-S Avs) избирательно связывается с белками, модифицированными биотином. Белки плазмы или сыворотки крови не влияют на результаты связывания. P-S Avs предназначен для детекции биотинилированных белков при иммунохимических исследованиях, проводимых методами ИФА, иммуно- и дот-блоттинга, при иммуногистохимическом исследовании срезов тканей, а также при иммунолокализации клеточных антигенов в культуре.

Набор "Trimmer-2" предназначен для нормализации двухцепочечной кДНК, приготовленной с помощью наборов "Mint" или "Mint-2" . После нормализации образцы кДНК имеют выравненные концентрации транскриптов, по разному представленных в исходном образце, и готовы для приготовления библиотек кДНК или секвенирования, в том числе на платформах Roche/454, ABI/SOLiD и Illumina/Solexa. Нормализованная кДНК может также быть использована для псевдо-Нозерн блота. - Быстрый и удобный метод удаления повторяющихся траскриптов кДНК - Получение полноразмерных библиотек кДНК с выровненными концентрациями траскриптов - Простая и легковоспроизводимая процедура - Повышение эффективности анализа транскриптома - Полная совместимость с протоколами NGS Illumina/Solexa, ABI/SOLiD и Roche/454

LumiTracker Mito Green FM — катионный зеленый флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. Краситель пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них, поэтому часто используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий. Флуоресценция LumiTracker Mito Green FM исчезает после фиксации альдегидами, поэтому данный краситель подходит только для работы с живыми клетками.

Стрептавидин представляет собой тетрамерный биотин-связывающий белок, выделенный из бактерии Streptomyces avidinii. Стрептавидин способен с высокой аффинностью и селективностью связывать до четырех молекул биотина посредством множественных водородных связей и ван-дер-ваальсовых взаимодействий. Из-за отсутствия углеводных модификаций и близкого к нейтральному pI, стрептавидин демонстрирует меньшее неспецифическое связывание, в сравнении с другим биотин-связывающим белком — авидином. Стрептавидин обладает высокой термостабильностью и устойчивостью к экстремальным значениям pH, денатурирующим агентам и ферментативной деградации, что позволяет использовать его в широком спектре экспериментальных условий. Флуоресцентные конъюгаты стрептавидина обычно используют в качестве реагента второй ступени для специфического обнаружения различных биотин-меченых биомолекул, таких как белки (антитела и др.), нуклеиновые кислоты, липиды в протоколах непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания, вестерн-блоттинге, проточной цитометрии, микропланшетном анализе и других методах детекции. Данный стрептавидин представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 488 — ярким, фотостабильным зеленым флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с FITC (максимум поглощения — 495 нм, максимум эмиссии — 519 нм). Рекомендуемый диапазон концентраций для использования составляет 0,5-10 мкг/мл. Избегайте использования растворов, содержащих биотин (некоторые сыворотки, RPMI 1640 и т. д.) в качестве разбавителей.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2]. Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 488, и PI. AF 488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом канале. Спектральные характеристики красителя сходны с FITC. Максимум поглощения — 495 нм. Максимум эмиссии — 519 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Тест-система для выявления ДНК бактерий Chlamidia psittaci в биологическом материале методом ПЦР.

Амин-ПЭГ3-карбоновая кислота представляет собой бифункциональное производное полиэтиленгликоля с тремя мономерными звеньями (ПЭГ3), содержащее терминальные карбоксильную и аминогруппы. Благодаря гидрофильности ПЭГ3 спейсера, получаемые конъюгаты обладают большей растворимостью в воде. Терминальная аминогруппа способна взаимодействовать с активированными эфирами, различными карбонильными соединениями (например, альдегидами и кетонами) и карбоновыми кислотами, например, в реакциях восстановительного аминирования. Входящая в состав Амин-ПЭГ3-карбоновой кислоты карбоксильная группа в присутствии активаторов (карбодиимидов или HATU) может реагировать с первичными аминогруппами с образованием стабильной амидной связи.

TAMRA (известный также как TMR или тетраметилродамин) — ксантеновый краситель, используемый для мечения биомолекул на протяжении уже десятков лет. Ксантеновые красители доступны в виде двух изомеров (обозначаемых как 5- и 6-изомеры). Их фотофизические свойства практически идентичны, но изомеры требуют разделения для того, чтобы избежать «двоения» и размывания пиков меченых продуктов на хроматографии и полос на электрофорезе. Этот продукт — чистый 6-изомер ТАМРА малеимида, предназначенный для мечения белков и пептидов по тиольным (SH) группам.

Применение: Предназначен для изучения метилирования ДНК. Позволяет определить наличие неметилированных сайтов RCGY в заданном регионе генома. Рассчитан на проведение 200 реакций GlaI-ПЦР. Инструкция по применению набора. Состав: 1. 1X TE буфер 2. 10Х SE TMN Буфер 3. БСА, 10 мг/мл 4. MD-эндонуклеаза (20 е.а./мкл) 5. β-меркаптоэтанол (200 мМ) 6. 10X SE GLAD буфер 7. Смесь 4х dNTP, 10 mM каждый 8. SP Taq ДНК Полимераза, 5 е.а./мкл 9. Контрольная ДНК L68, 18 нг/мкл 10. Контрольная ДНК HeLa, 18 нг/мкл 11. Контрольная ДНК мыши, 18 нг/мкл 12. ДНК фага λ, 18 нг/мкл 13. ДНК Raji, 18 нг/мкл 12. Контрольная смесь RARb (праймеры и флюоресцентный зонд), 10 μM каждый Условия хранения: Хранить при -20°C Примечание: При проведения GlaI-ПЦР анализа в реакционную смесь на стадии ПЦР необходимо добавить геномные праймеры и зонд, рассчитанные для заданной области в ДНК. Геномные праймеры и зонд могут быть синтезированы по дополнительному заказу. Набор также включает все реагенты, необходимые для проведения контрольных экспериментов Анализ проводится менее чем за 3 часа.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GATNNNNATC GATNN↑NNATC CTANNNNTAG CTANN↓NNTAG Источник: Bacillus species 8 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 75 75 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 60°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется Dam-метилированием при перекрывании (GmATC): 5’-GmATCN^NNATC-3’/3’-CTmAGN^NNTAG-5’. Блокируется (5mC)-метилированием при перекрывании: 5’-GATNN^NNAT(5mC)-3’/3’-(5mC)TANN^NNTAG-5’. Гидролизует полуметилированный сайт: 5’-GATNN^NNAT(5mC)-3’/3’-CTANN^NNTAG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G Примечание: При более чем 5-кратном избытке фермента на 1 мкг ДНК наблюдается звездчатая активность.

G-квадруплексы (G4s) представляют собой вторичные структуры, образующиеся в ДНК и РНК за счет неканонических водородных связей между четырьмя гуаниновыми основаниями [1,2]. В ядре ДНК G4s связаны с эпигенетической регуляцией экспрессии генов посредством их взаимодействия с регуляторными белками, такими как транскрипционные факторы и модификаторы хроматина [3,4]. РНК G4s связаны со сплайсингом, транспортом и регуляцией трансляции РНК, а также с РНК-опосредованными стрессовыми реакциями в цитоплазме клетки [5-7]. TOR-G4 — производное тиазолового оранжевого, недавно синтезированный флуоресцентный индикатор G4s [8]. TOR-G4 является низкомолекулярной альтернативой иммунохимии со специфичными к G4 антителами. TOR-G4 позволяет визуализировать G4s на основе изменений продолжительности флуоресценции индикатора при связывании им нуклеиновой кислоты. Продолжительность флуоресценции TOR-G4 самая высокая в присутствии G4s и значительно ниже с другими последовательностями. Внутри клеток TOR-G4 преимущественно колокализуется с РНК в цитоплазме и ядрышках, что делает его первым прижизненным зондом, валидированным для изучения роли РНК G4s в функционировании клеток. TOR-G4 подходит для визуализации РНК G4s с помощью FLIM [8].