Поиск

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACCTGC(N)4 ACCTGC(N)4↑ TGGACG(N)8 TGGACG(N)8↓ Источник: Acinetobacter calcoaceticus 36 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 50 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Примечание: Избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

В последние годы Cyanine5 (аналог Cy5®) приобрел весьма широкую популярность в качестве флуоресцентной метки как в исследованиях в области биологических наук, так и в диагностических применениях. Максимум флуоресценции этого флуорофора приходится на красную область спектра, где многие CCD-детекторы имеют максимальную чувствительность, а фон от биологических объектов низок. Цвет красителя очень насыщенный: даже весьма малые его количества (1 наномоль) можно увидеть в гель-электрофорезе невооруженным глазом. Активированное N-гидроксисукцинимидное (NHS) производное этого красителя (Cy5® NHS эфир) применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках, амино-модифицированных олигонуклеотидах. Для проведения реакции требуется небольшое количество органического растворителя (ДМФА или ДМСО - подробности см. в рекомендованном нами для этого реагента протоколе). Данный реагент идеален для мечения водорастворимых белков, пептидов и олигонуклеотидов. Он также хорошо работает в органических растворителях для мечения малых молекул. Для легко денатурируемых белков и в других молекул, плохо совместимых органическими сорастворителями, рекомендуется использовать водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine5, не требующий использования органического растворителя и имеющий практически идентичные флуоресцентные свойства. Флуорофор Cyanine5 совместим с различными аналитическими приборами, включая большинство флуоресцентных микроскопов, имэджеров, сканеров флуоресценции. Существует ряд аналогов Сyanine5. Активированный эфир Cyanine5 успешно заменяет активированные эфиры Cy5® и DyLight 649.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine7. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Антитела кролика к иммуноглобулину A человека идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgA человека 100 % IgM человека <5% IgG человека <5% Сывороточный IgA обычно существуют в виде мономеров, но могут присутствовать в виде димеров (около 15%). Димерные молекулы IgA удерживаются за счет J-цепи. Существует два подкласса IgA - IgA1 и IgA2 - различающиеся дисульфидными мостиками в шарнирной области. Молекулы IgA содержат много углеводных участков и не связывают комплемент.

3,5-бис-[(E)-2-фенилэтенил]-BDP — это соединение симметричного строения из ряда бис(гетеро)арилэтенил-замещённых дифторидов дипиррометенбора. В молекуле присутствуют в транс-конфигурации относительно двойных связей две фенилэтенильные группы, что делает данное производное красителя BDP в значительной степени липофильным. Это нефункционализированное производное BDP может использоваться в микроскопии для проникновения внутрь клетки и окрашивания липидов. Производные флуорофора BDP обладают высокими квантовым выходом и фотохимической стабильностью, и могут применяться в качестве флуорогенных зондов для индикации липидных капель. Для производных с расширенной π-электронной системой благодаря введению ароматических, алкенильных или алкинильных заместителей в 3- и 5-положении дипирринового остова характерен сдвиг эмиссионного спектра в красную область по сравнению с большинством маркеров липидных капель из ряда классических красителей семейства бордипиррометена.

Пирен - полициклический ароматический углеводород, обладающий коротковолновой флуоресценцией. В отличие от других флуорофоров, он обладает большой чувствительностью к микроокружению - его флуоресценция в полярных и в неполярных окружениях различается. Когда два остатка пирена находятся рядом друг с другом, они образуют эксимеры (excited dimers - "возбужденные димеры"). Образование эксимеров может быть обнаружено и количественно оценено с помощью спектров флуоресценции. Эксимеры отличаются более длинноволновой флуоресценцией. Пирен азид - реагент для введения остатка пирена с помощью клик-химии. Этот реагент содержит линкер на основе триэтиленгликоля для увеличения гидрофильности и растворимости реагента и упрощения конъюгации с биомолекулами в водных средах.

ДБЦО-ПЭГ6-NHS-эфир — бифункциональный линкер, содержащий дибензоциклооктин (ДБЦО) и остаток N-гидроксисукцинимида на концах полимерного спейсера ПЭГ6 (гексаэтиленгликоля). Спейсер ПЭГ6 увеличивает растворимость реагента в водной среде и обеспечивает длинное и гибкое присоединение функциональных групп, сводящее к минимуму стерические затруднения, возникающие при лигировании. Дибензоциклооктин легко реагирует с азидами посредством безмедной клик-реакции (SPAAC). ДБЦО — один из наиболее реакционноспособных циклоалкинов, не реагирующий с тетразинами. Остаток N-гидроксисукцинимида (NHS) используется для связывания с первичными аминами белков, пептидов, модифицированных амином олигонуклеотидов и другими молекулами, содержащими амины.

Сульфотетрафторфениловый эфир дибензоциклооктина (STP-эфир ДБЦО) — это растворимый в воде реагент, который используется для модификации пептидов, антител, белков и других биомолекул, содержащих -NH2 группу. STP-эфиры гораздо медленнее гидролизуются по сравнению с NHS-эфирами, что позволяет более эффективно проводить модификацию биомолекул в водной среде. Дибензоциклооктиновый фрагмент (ДБЦО, DBCO), также известный как ADIBO или DIBAC, является наиболее часто используемым субстратом для безмедных клик-реакций, которые промотируются напряжением цикла. В такой реакции производные DBCO в отсутствие Cu (I) катализатора реагируют с биомолекулами, функционализированными азидной группой, приводя к образованию стабильных триазолов.

BDP TMR - это краситель для канала TAMRA. В отличие от оригинального красителя TAMRA у него высокий квантовый выход и соответственно, высокая яркость. Данное производное BDP TMR содержит первичную аминогруппу, которая может быть конъюгирована с различными электрофилами, а также может участвовать в катализируемой энзимами реакции трансаминирования.

TODi-1 (гомодимер Тиазолового Оранжевого, также известный как TOTO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. TODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. TODi-1 не цитотоксичен и может использоваться для долгосрочного мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре.

TMRE широко используется для окрашивания митохондрий в живых клетках и не подходит для протоколов с фиксацией клеток. Этот липофильный и положительно заряженный краситель проникает через плазматическую мембрану клеток, при этом не взаимодействуя с мембранными белками и не образуя агрегатов. Краситель TMRE селективно накапливается в активных митохондриях благодаря трансмембранному потенциалу, который митохондрии поддерживают в нормальном состоянии. Кроме окрашивания митохондрий для их визуализации, TMRE используется для количественной оценки митохондриального мембранного потенциала с помощью уравнения Нернста. Краситель служит инструментом для изучения изменений функционирования митохондрий и жизнеспособности клеток в ответ на исследуемые агенты. Деполяризация митохондрий вследствие запуска процессов апоптоза, некроза или других факторов характеризуется уменьшением мембранного потенциала и, как следствие, уменьшением накопления красителя и его флуоресценции, по сравнению с интактными клетками, имеющими поляризованные митохондрии. Краситель TMRE применяется в флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии, экспериментах с использованием планшетных ридеров. Краситель имеет максимум возбуждения при 549 нм — он совместим с голубым (488 нм) и желто-зеленым (561 нм) лазерами. Флуоресценция красителя детектируется в канале фикоэритрина (PE) (максимум при 574 нм).

BDP 650/665 — бордипиррометеновый краситель с поглощением и эмиссией в дальней красной области. Он обладает высоким коэффициентом экстинкции и хорошим квантовым выходом. Активированный эфир можно конъюгировать с аминогруппами белков, пептидов и других молекул. Этот активированный эфир содержит дополнительный линкер на основе аминогексановой кислоты.