Поиск

Применение: синтез комплементарной цепи ДНК на матрице РНК (РНК зависимая ДНК полимераза); полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР); одношаговая петлевая изотермическая амплификация с этапом обратной транскрипции (OT-LAMP); секвенирование; синтез фрагментов кДНК длиной до 7000 п.о. Активность/единица активности: 40 ед.акт./мкл. Происхождение фермента. Фермент получен из рекомбинантного штамма Еscherichia coli, экспрессирующего модифицированный ген M-MuLV ревертазы. Особенности фермента: отсутствие активности РНКазы H; термостабильность до 62 ⁰С; высокий выход кДНК. Фермент активен в широком диапазоне температур от плюс 37 °С до плюс 62 °C. Условия реакции: в 1-кратном реакционном буфере; инкубирование при температуре от плюс 37 °C до плюс 62 °C в течение 15 – 60 минут. Инактивация проходит при плюс 85 °С в течение 5 минут. Буфер для хранения: 10 мМ Трис рН 7,5, 0,1 М KCl, 0,001 мДТТ, 0,1 мМ ЭДТА. Условия хранения: 1 год при температуре минус 20 °С. Используется в зарегистрированных в Минздраве РФ наборах реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2. Цена указана за 40 000 ед. акт. фермента. Поставляется с 5-кратным реакционным буфером.

DTT (дитиотреитол) предназначен для стабилизации и сохранения активности белков, имеющих сульфгидрильные (тиоловые) группы. Раствор DTT используется в буферах для хранения белков и ферментативных реакциях, например, в ПЦР или реакции синтеза первой цепи кДНК.

Флуоресцентные зонды представляет собой олигонуклеотид с флуоресцентной меткой и гасителем, который может связываться с цепью ДНК во процессе амплификации. Когда зонд находится в свободном состоянии, оба красителя расположены близко друг к другу, поэтому происходит гашение флуоресценции. В ходе ПЦР на этапе удлинения цепи гибридизовавшийся зонд расщепляется полимеразой, которая обладает 5’-экзонуклеазной активностью, красители разъединяются, и наблюдается флуоресцентный сигнал, пропорциональный количеству амплифицированного продукта. Интенсивность флуоресценции увеличивается в каждом цикле пропорционально скорости расщепления зонда. Использование зондов в ПЦР позволяет повысить точность и селективность реакции. Широкий спектр флуоресцентных красителей: FAM, R6G, VIC, HEX, JOE, TAMRA, ROX, Cy 5 и Cy5.5 Возможность мультиплексного анализа нескольких ДНК-мишеней в одной пробирке. Высокая эффективность ПЦР-РВ. Контроль качества зондов: очистка ВЭЖХ и проверка масс-спектрометрией

Использование в клинике: Ревматоидный фактор (РФ) представляет собой аутоантитела к собственным иммуноглобулинам класса G человека. Присутствие высоких концентраций РФ в сыворотке крови характерно для больных аутоиммунными заболеваниями, в том числе болезнью Лима, остеоартритом, моно- и полиартритом, ревматоидным артритом и др. Определение уровня РФ необходимо для повышения надежности диагностики ревматоидных заболеваний. Нормой для здорового донора является уровень РФ не более 25 МЕ/мл. Принцип метода: Метод основан на иммунологической реакции между иммобилизоваными на поверхности частиц латекса иммуноглобулинами класса G человека и ревматоидным фактором, присутствующим в образце. Образующийся в зоне эквивалентности иммунный комплекс вызывает видимую агглютинацию частиц латекса. Уровень РФ выше, чем 20 МЕ/мл выявляется появлением агглютинации латексных частиц в течение 2 минут. Для предотвращения ложно-положительной реакции для разведения проб используется входящий в состав набора буфер для разведения.

SIMA (дихлордифенилфлуоресцеин) — ксантеновый краситель со спектральными свойствами, аналогичными HEX, однако с более высоким квантовым выходом. SIMA также обладает повышенной стабильностью во время деблокирования в основных условиях, поэтому деблокирование может проводиться с использованием водного раствора аммиака при повышенных температурах либо с помощью AMA (смесь 1:1, концентрированный водный аммиак / 40% водный метиламин) при комнатной температуре в течение 2 часов или 65°C в течение 10 минут. При деблокировании водным раствором аммиака при 55°C в течение ночи SIMA, связанный с олигонуклеотидом, не деградирует, в то время как для HEX наблюдается деградация флуорофора как минимум на 10%. SIMA фосфорамидит используется в олигонуклеотидном синтезе для получения флуоресцентно-меченых праймеров и гибридизационных зондов для количественной ПЦР.

Модифицирующий носитель предназначен для синтеза олигонуклеотидов с тушителем DusQ 2 на 3’-конце. Размер пор носителя 1000 Å подходит для синтеза олигонуклеотидов длиной до 120 оснований. DusQ 2 — нефлуоресцирующий тушитель с поглощением в диапазоне 560–670 нм. Подходит для эффективного тушения по механизму FRET флуорофоров с эмиссией в указанном диапазоне. Кроме этого, тушитель используется в гибридизационных зондах на основе статического и смешанного тушения, при этом эффективность тушения в незначительной степени зависит от перекрытия спектров флуорофора и тушителя, что обеспечивает эффективное тушение широкого спектра флуорофоров, в том числе с эмиссией в красном и дальнем красном диапазонах. Таким образом, список флуорофоров для использования с DusQ 2 включает, но не ограничивается Cyanine3, TAMRA, ROX, Cyanine3.5, Cyanine5, Cyanine5.5.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: (N)8GACNNNNNNTTYG(N)11 ↑(N)8GACNNNNNNTTYG(N)11↑ (N)13CTGNNNNNNAARC(N)6 ↓(N)13CTGNNNNNNAARC(N)6↓ Источник: Arthrobacter species NTS Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 20 Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.4); 200 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента около 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 30°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: BSA при длительной инкубации использоватьне рекомендуется. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Бифункциональный линкер, содержащий азодибензоциклооктин (ДБЦО, или АДИБО) для реакций безмедной клик-химии и аминогруппу для конъюгации с активированными производными карбоновых кислот и эпоксидами. Дибензоциклооктин (ДБЦО) — один из самых реакционноспособных циклоалкинов для реакций безмедной клик-химии (SPAAC, СПААЦ, стерически промотируемого алкин-азидного циклоприсоединения). ДБЦО моментально реагирует с азидами, при этом скорость процесса значительно выше, чем у медь-катализируемой клик-реакции, и реакций циклоприсоединения с другими циклооктинами. В отличие от некоторых циклооктинов, ДБЦО не вступает во взаимодействие с тетразинами.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCGC C↑CGC GGCG GGC↓G Источник: Bacillus species AC Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 75 10 100 Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.2); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 50% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Универсальное CPG тип II, 500A подходит для олигонуклеотидного синтеза и ускорения стадии дефосфорилирования 3'-конца в ходе деблокирования благодаря наличию бицикличной молекулы в составе. Универсальное CPG тип II, 500A совместимо с деблоком в жёстких условиях в безводной газовой среде аммиаком, смесью аммиак-метиламин (AMA) или другими основными реагентами и позволяет провести отщепление и удаление защитных групп быстрее по сравнению с другими универсальными носителями на основе стекла с контролируемым размером пор (CPG). Размер пор 500 Å рекомендуется для синтеза олигонуклеотидов длиной до 50 оснований. Для синтеза олигонуклеотидов большей длины можно использовать носитель с размером пор 1000 Å

Азид-ПЭГ2-карбоновая кислота — бифункциональный линкер, содержащий терминальные карбоксильную и азидо-группы. Данная молекула гидрофильна и подходит для синтеза водорастворимых конъюгатов. Азидная группа может вступать в реакции [3+2]-диполярного циклоприсоединения с биомолекулами, содержащими алкиновый фрагмент, а карбоксильная группа может быть активирована и реагировать с различными аминами, в том числе в составе пептидов и белков. Репертуар полученных биоконъюгатов может быть довольно широким, таким способом можно получать конъюгаты антител с лекарственными средствами (ADC-antibody drug conjugates). При этом введение ПЭГ-линкера может повысить стабильность и растворимость в воде, а также снизить иммуногенность биомолекул.

Нативный коллаген быка I типа (B C11-NCL) выделен из сухожилий быка, полученных от здоровых животных. В препарате B C11-NCL содержится около 90% коллагена I типа и незначительная примесь коллагена III типа. B C11-NCL - это легкорастворимый стерильный нативный коллаген. B C11-NCL идеально подходит для формирования плотных прозрачных гидрогелей, пригодных для 3D культивирования. Данный продукт удобно использовать в различных областях регенеративной медицины, B C11-NCL совместим с различными органическими и неорганическими биоматериалами.