Поиск

MD ДНК эндонуклеаза Mte I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC) G(5mC)G(5mC)↑NG(5mC)G(5mC) (5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G (5mC)G(5mC)GN↓(5mC)G(5mC)G Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Mte I из Microbacterium testaceum 17B Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pHspAI10/DriI дополнительно метилированной M.Fsp4HI за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси Определение активности MteI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Субстрат для определения активности: Субстрат pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI10, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI и метилированной ДНК-метилтрансферазой Fsp4HI. Плазмида pHspAI10 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HspAI, которая модифицирует сайт узнавания 5`-GCGC-3` с образованием 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5`. Кроме того, данная плазмида дополнительно метилирована ДНК-метилтрасферазой М.Fsp4HI, которая модифицирует сайт 5`-GCNGC-3` с образованием 5`-G(5mC)NGC-3`/3`-CGN(5mC)G-5`. В результате в используемом субстрате имеется один канонический сайт узнавания МteI: 5`-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5`. МteI может также расщеплять сайт узнавания, включающий шесть 5-метилцитозинов [1], однако активность фермента в этом случае меньше более чем на порядок. Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 75 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: Неспецифический гидролиз: Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 40 ед фермента Mte I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, pHspAI10/DriI дополнительно метилированная M.Fsp4HI .

Линейный полиакриламид инертен, не ингибирует ферментативные реакции и идеально подходит для соосаждения малых количеств нуклеиновых кислот либо количественного выделения из разбавленных растворов. Линейный полиакриламид не интерферирует при A260/280 и не влияет на спектральные характеристики нуклеиновых кислот, позволяя осаждать фрагменты размером более 15 пар оснований и отделять продукты ПЦР-реакции от нуклеотидов и коротких фрагментов. Также преимуществом линейного полиакриламида для осаждения нуктеиновых кислот является то, что он не контаминирован ферментами, так как синтезируется химическим способом.

Набор RNA Solo предназначен для выделения суммарной РНК на микроцентрифужных колонках из клеток и мягких тканей человека и животных, бактерий, дрожжей. Очищенную суммарную РНК можно использовать для синтеза кДНК и анализа экспрессии генов методом ОТ-ПЦР, пробоподготовки для NGS, Нозерн-блота, трансляции in vitro и других молекулярно-биологических приложений.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ASST ASST↑ TSSA ↓TSSA Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген SetI из Streptomyces werraensis 37 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 pmol олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 1 час при 55°С в 20 μl реакционной смеси Субстрат для определения активности: Олигонуклеотидный дуплекс 5`-CGAGTTTATAGCTGGGCCCAAC-3` 3`-GCTCAAATATCGACCCGGGTTG-5` Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 75 75 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 50% фрагментов pBR322 ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: RGGWCCY RG↑GWCCY YCCWGGR YCCWG↓GR Источник: Pseudomonas species PP Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда/HindIII за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда/HindIII Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 10 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (СmCWGG): RGGWCCTGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 5 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

JOE — флуорофор, спектрально и химически сходный с TET, но обладающий меньшей в сравнении с ним гидрофобностью. Краситель часто используется для мечения нуклеиновых кислот и олигонуклеотидов. JOE алкин можно конъюгировать с азидами в присутствии соединений меди (I) в качестве катализатора.

Антитела кролика к иммуноглобулинам курицы: ФИТЦ идеально подходит для иммунохимических методов. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины курицы 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

SYBR Green I – интеркалирующий краситель, специфичный к двухцепочечной ДНК. Раствор SYBR Green I оптимизирован для применения в ПЦР с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Рекомендуется использовать как 50X раствор, при оптимизации условий ПЦР допускается двухкратное увеличение или двухкратное уменьшение (25Х – 100Х) концентрации красителя в реакционной смеси.

Реакционная смесь 5X qPCRmix-HS SYBR+LowROX предназначена для постановки ПЦР с SYBR Green I в присутствии референсного красителя ROX, и позволяет получать результаты со значительным превышением уровня сигнала над фоновой флуоресценцией и низким порогом насыщения реакции (cycle threshold, Ct). В состав 5X qPCRmix-HS SYBR+LowROX входят все необходимые компоненты для ПЦР: HS Taq ДНК полимераза, интеркалирующий краситель SYBR Green I, референсный краситель ROX, смесь dNTP, Mg2+, ПЦР буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, ДНК и воду. 5X qPCRmix-HS SYBR+LowROX подходит для Real-Time амплификаторов, требующих низкой концентрации красителя ROX в реакции (например, ABI 7500).

Флуоресцентный краситель Тетраметилроданин (иначе TAMRA), содержащий азидную группу. Чистый 6-изомер. Предназначен для модификации с помощью click-реакций. Эмиссия в оранжевой области спектра. Кристаллическое вещество от светло-голубого до фиолетового цвета. Хорошо растворим в диметилсульфоксиде, диметилформамиде и других полярных растворителях.

VIC — несимметричный ксантеновый краситель, обладающий схожими с HEX и JOE спектральными свойствами. Олигонуклеотиды, меченые VIC, часто используются в ПЦР реального времени; получение таких олигонуклеотидов может быть выполнено с помощью клик-химии. Это производное — азид, чистый 6-изомер, для конъюгации VIC с другими молекулами с помощью медь-катализируемых и безмедных клик-реакций.