Поиск

Тирамидная амплификация (TSA) — самый универсальный и эффективный способ усиления интенсивности флуоресцентного сигнала, применяемый в иммуногистохимии (ИГХ, IHC), иммуноцитохимии (ICC) и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Метод TSA основан на способности пероксидазы хрена (HRP) в присутствии низких концентраций пероксида водорода превращать меченый тираминсодержащий субстрат в окисленный, высокореактивный свободный радикал, который ковалентно связывается с остатками тирозина белковых молекул, расположенных рядом с ним. По сравнению с обычными процедурами, метод TSA увеличивает чувствительность иммунофлуоресцентного обнаружения целевых молекул более чем в 100 раз, благодаря чему он особенно подходит для обнаружения мишеней с низкой концентрацией. В применениях, где не требуется повышение чувствительности обнаружения, TSA позволяет значительно снижать концентрации антител или зондов без потери интенсивности сигнала, и тем самым уменьшать фоновое окрашивание, возникающее из-за перекрестной реактивности или неспецифического связывания антител. Поскольку связывание тирамидной метки является ковалентным, тирамиды разных красителей можно использовать в нескольких последовательных раундах TSA-окрашивания, для обнаружения нескольких мишеней в одном и том же образце. Данный тирамид — конъюгат водорастворимого красителя sulfo-Cyanine7 с флуоресценцией в ближней инфракрасной области спектра. sulfo-Cyanine7 тирамид (также известный как Cy7® и Cyanine7 тирамид у других производителей) является компонентом многих наборов для тирамидной амплификации сигнала. Этот реагент можно использовать с любым антителом или другими молекулами (стрептавидин и др.), конъюгированными с HRP, для окрашивания клеток и тканей методами иммунофлуоресценции.

Тетраацетилированный N-(4-пентиноил)галактозамин (Ac4GalNAl) — меченый алкином моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GalNAl — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилгалактозамина (GalNAc). Образующиеся при этом алкинсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными азидами или биотин-азидом.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС), который на ранних стадиях апоптоза перемещается со внутренней стороны клеточной мембраны во внешнюю. Данный аннексин V представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 488 — ярким, фотостабильным зеленым флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с FITC (максимум поглощения — 495 нм, максимум эмиссии — 519 нм). Окрашивание на аннексин V-AF 488 не позволяет разделять популяции апоптотических и некротических клеток. Для этого требуется дополнительное окрашивание клеток непроникающими в живые клетки ядерными красителями — йодистым пропидием или YODi-3. Для этого также можно использовать готовый набор для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF 488.

Антитела козы к иммуноглобулину IgA человека: ФИТЦ идеально подходит для иммунохимических методов. В ИФА имеют следующую специфичность: IgA человека 100 % IgM человека <5% IgG человека <5% Основной функцией IgA является защита слизистых оболочек дыхательных, мочеполовых путей и желудочно-кишечного тракта от инфекций. Сывороточный IgA секретируется B-лимфоцитами; составляет 10-15% всех классов растворимых иммуноглобулинов. В организме IgA представлен в димерной форме в комплексе с секреторным компонентом, содержится в серозно-слизистых секретах. Молекулярная масса IgA составляет около 500 кДа.

Антитела кролика к иммуноглобулинам свиньи: ФИТЦ идеально подходит для иммунохимических методов. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины свиньи 100 % Иммуноглобулины человека <5 %

Антитела овцы к иммуноглобулинам кролика: ФИТЦ идеально подходят для использования в методах иммунохимического анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины кролика 100 % Иммуноглобулины человека <5 %

DiI (DiIC18(3); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндокарбоцианин) — карбоцианиновый краситель, флуоресцирующий в оранжево-красной части спектра. DiI — широко используемый липофильный краситель, который маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. DiI диффундирует латерально в плазматической мембране, постепенно окрашивая всю клетку, что позволяет использовать его в качестве антероградного и ретроградного трейсера нейронов. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. DiI часто используется совместно с другими трейсерами в двухцветных окрашиваниях, например, с DiA и DiO.

Антитела кролика к иммуноглобулинам овцы: ФИТЦ идеально подходит для иммунохимических методов. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины овцы 100 % Иммуноглобулины человека <5 %

H2DCFDA (2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетат) — широко используемый реагент для изучения продукции активных форм кислорода в живых клетках. H2DCFDA представляет собой нефлуоресцирующее производное флуоресцеина — его восстановленную ацетилированную форму. Реагент начинает флуоресцировать только после отщепления ацетильных групп и окисления внутри клетки, превращаясь в 2′,7′-дихлорофлуоресцеин. Он характеризуется яркой флуоресценцией в зеленой области спектра (максимум поглощения при 511 нм, максимум флуоресценции при 533 нм). Данный реагент подходит для исследования живых клеток и не совместим с фиксацией образцов. Ацетильные группы в структуре H2DCFDA повышают его липофильность и улучшают проникающую способность реагента через клеточную мембрану. Попадая внутрь клетки, он деацетилируется клеточными эстеразами, из-за чего приобретает заряд и лучше удерживается внутри клетки. Окисление активными формами кислорода приводит к образованию флуоресцирующего продукта — 2′,7′-дихлорофлуоресцеина и может быть детектировано различными способами, например с помощью проточного цитометра, планшетного ридера или флуоресцентного микроскопа.

Флуоресцентно меченый азид, реагирующий с алкинильными производными биомолекул (терминальными алкинами и циклооктинами) посредством клик-реакций с образованием устойчивых аддуктов. AF 647 — яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор, излучающий в дальнем красном канале (максимум поглощения — 650 нм, максимум излучения — 671 нм). Азид AF 647 применяется для мечения клеток и их детекции с помощью флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

TO-TAP-3 (мономер Тиазолового Красного также известный как TO-PRO®-3) — мономерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в дальней красной части спектра. TO-TAP-3 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TO-TAP-3 обладает ярким сигналом и низкой фоновой флуоресценцией. Он используется для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в микроскопии. TO-TAP-3 может использоваться для мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре. Длинноволновая флуоресценция TO-TAP-3 сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

Максимум флуоресценции BDP 558/568 лежит в желтой области спектра (569 нм). Данный краситель является аналогом такого флуорофора как Cy3™ по спектральным характеристикам. Он растворим в полярных органических растворителях, обладает хорошей фотостабильностью и высоким квантовым выходом. Краситель BDP 558/568 обладает гидрофобными свойствами и подходит для окрашивания липидов, мембран и других липофильных соединений. Введенная в молекулу BDP 558/568 циклооктиновая функциональная группа позволяет вступать в реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения с различными замещенными азидами. Подобные реакции промотируются напряжением цикла и не требуют медных катализаторов. Поэтому данный метод подходит для изучения различных процессов в живых клетках. BDP 558/568 ДБЦО используется для детекции целевых молекул, белков или нуклеиновых кислот, содержащих азидные группы, с помощью микроскопии и проточной цитометрии.