Поиск

Готовый к работе набор, предназначенный для быстрого и удобного анализа двух ключевых показателей апоптоза: экстернализации фосфатидилсерина (с помощью аннексина V-AF 488) и изменений потенциала митохондриальной мембраны (с помощью LumiTracker® Mito Red CMXRos). Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V часто используется для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином, который на ранних стадиях апоптоза перемещается со внутренней стороны клеточной мембраны во внешнюю. Настоящий набор содержит рекомбинантный аннексин V, конъюгированный с AF 488, — ярким фотостабильным зеленым флуорофором со спектральными характеристиками, аналогичными FITC. LumiTracker Mito Red CMXRos — катионный красный флуоресцентный краситель, который пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них. Здоровые клетки обладают высоким митохондриальным мембранным потенциалом, и его снижение считают маркером ранней стадии апоптоза. После окрашивания популяции клеток аннексином V-AF 488 и красителем LumiTracker® Mito Red CMXRos в поставляемом с набором связывающем буфере живые клетки будут иметь слабую зеленую и интенсивную красную флуоресценцию; апоптотические клетки, наоборот, будут обладать высокой зеленой и низкой красной флуоресценцией. Эти две популяции клеток легко различаются с помощью проточного цитометра, при этом оба красителя способны возбуждаться линией 488 нм аргоно-ионного лазера.

BDP 505/515 - бордипиррометеновый флуорофор для визуализации липидных мембран. Он характеризуется очень высокой яркостью, а также стабильностью в условиях облучения светом возбуждения в конфокальной микроскопии.

BDP 630/650 - это яркий и фотостабильный дальне-красный флуорофор с высокими молярным коэффициентом экстинкции и квантовым выходом. Он обладает относительно долгим времем жизни возбужденного состояния, и благодаря этому этот краситель полезен для анализа поляризации флуоресценции. Данное производное представляет собой этиловый эфир BDP 630/650 и может применяться для окрашивания липидов и других липофильных соединений.

CM-DiI — оранжево-красный флуоресцентный карбоцианиновый краситель, содержащий тиол-реактивную хлорметильную (CM) функциональную группу. CM-DiI маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. CM-DiI используется для мечения клеток и оценки их пролиферации in vivo и in vitro, а также для трекинга клеток и мониторинга их подвижности. Краситель переносится в дочерние клетки и не просачивается в соседние клетки популяции. Окрашивание CM-DiI показывает яркую флуоресценцию в течение не менее 72 часов (около трех-шести поколений клеток). Внутри клетки CM-DiI не проявляет цитотоксичности и минимально воздействует на пролиферативную способность или биологию клетки. В отличие от других мембранных красителей, CM-DiI обладает повышенной растворимостью в воде и может фиксироваться традиционными альдегидными фиксаторами. CM-DiI также сохраняется в клетках после их пермеабилизации. Все это позволяет сочетать мечение с помощью CM-DiI с другими гистологическими методами, такими как иммунохимия, оптическое просветление и т.д.

(5,6)-FITC, или FAM (5,6)-изотиоцианат представляет собой реакционноспособное производное флуоресцеина, взаимодействующее с нуклеофильными заместителями биомолекул (в т.ч. с гидроксильными, тиольными и аминогруппами). Соединение часто используется для мечения антител и других зондов, применяемых в различных методах на основе флуоресценции, таких как микроскопия, проточная цитометрия и иммунофлуоресцентный анализ (иммунохимия, Вестерн-блоттинг, ИФА).3524

LumiTracker Mito Red CMXRos — катионный красный флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. CMXRos представляет собой гидрофобное соединение, которое пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них. Окрашивание LumiTracker Mito Red CMXRos сохраняется после фиксации альдегидами. Этот краситель обычно используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий.

Тетраацетилированный N-азидоацетилглюкозамин (Ac4GlcNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.

Азидопроизводное красителя AMCA для конъюгации с терминальными алкинами посредством медь-катализируемой клик-реакции или с напряженными алкинами посредством безмедной клик-реакции. AMCA (ацетат аминометилкумарина) — один из самых ярких синих флуоресцентных красителей. Этот флуорофор имеет относительно большой стоксов сдвиг, высокую устойчивость к фотовыгоранию и рН-независимую флуоресценцию в диапазоне рН от 4 до 10. АМСА широко используется для многоцветного мечения из-за минимального перекрытия его флуоресценции с зелеными и более длинноволновыми флуоресцентными красителями.

YODi-1 (гомодимер Оксазолового Желтого, также известный как YOYO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. YODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. YODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для анализа единичных молекул ДНК.

L-Азидогомоаланин (AHA) представляет собой неканонический аминокислотный аналог метионина, который содержит азидную группу. Мечение с помощью AHA является быстрой, чувствительной, нетоксичной и нерадиоактивной альтернативой традиционному методу обнаружения синтеза белка de novo. AHA — проникающее в клетку соединение, включающееся случайным образом в синтезирующийся белок вместо метионина во время трансляции. Полученные таким образом меченые азидом полноразмерные белки могут быть обнаружены с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или биотинилированными алкинами, либо безмедной клик-реакции с циклоалкинами, и использованы для последующей визуализации или очистки.

Антитела кролика к иммуноглобулину IgM человека: ФИТЦ идеально подходят для использования в методах иммунохимического анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgM человека 100 % IgA человека <5% IgG человека <5% Молекула IgM представляет пентамерный комплекс, образованный из пяти мономеров-иммуноглобулинов классического строения, соединенных Fc-фрагментами с помощью дисульфидных связей и J-цепи. Такой комплекс имеет большую молекулярную массу (970 кДа), поэтому он плохо проникает в ткани. В процессе иммунного ответа первыми вырабатываются IgM антитела. IgM, связавшись с антигеном, претерпевает конформационные изменения, после чего приобретает наибольшую способность связывать и активировать белки системы комплемента. Основная физиологическая функция IgM - нейтрализация патогенов в кровяном русле. Помимо пентамера, IgM в мономерной форме присутствует на мембране B-лимфоцитов, выполняя роль антигенраспознающего рецептора.

LumiMount DAPI — заливочная среда на водной основе, содержащая DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол), для заключения под покровные стекла и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. DAPI — синий флуоресцентный краситель, который прочно связывается с участками ДНК, богатыми аденином и тимином, и используется для контрастирования клеточных ядер, а также для окрашивания хромосом. DAPI демонстрирует ~20-кратное усиление флуоресценции при связывании с двухцепочечной ДНК с максимумами поглощения при 358 нм и испускания при 461 нм. LumiMount DAPI совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла. LumiMount DAPI обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount DAPI растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.