Поиск

RAPID DiI (также известный как FAST DiI™) — карбоцианиновый краситель, флуоресцирующий в оранжево-красной части спектра, ненасыщенный аналог DiI (DiIC18(3)). RAPID DiI — липофильный краситель, который маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. RAPID DiI диффундирует латерально в плазматической мембране, постепенно окрашивая всю клетку, что позволяет использовать его в качестве антероградного и ретроградного трейсера нейронов. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. RAPID DiI мигрирует в мембранах примерно на 50% быстрее, чем DiI. RAPID DiI можно использовать совместно с другими трейсерами в двухцветных окрашиваниях, например, с DiA и DiO. RAPID DiI представлен в виде кристаллов, которые можно наносить непосредственно на мембраны.

LumiTracker Mito Red FM — катионный красный флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. Краситель пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них, поэтому часто используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий. Флуоресценция LumiTracker Mito Red FM исчезает после фиксации альдегидами, поэтому данный краситель подходит только для работы с живыми клетками.

Флуоресцентный краситель метокси-хлор-флуоресцеин (иначе JOE), содержащий азидную группу. Чистый 5-изомер. Предназначен для модификации с помощью click-реакций. Эмиссия в желтой области спектра. Кристаллическое вещество от оранжевого до коричневого цвета. Хорошо растворим в диметилсульфоксиде, диметилформамиде и других полярных растворителях.

В последние годы Cyanine5 (аналог Cy5®) приобрел весьма широкую популярность в качестве флуоресцентной метки как в исследованиях в области биологических наук, так и в диагностических применениях. Максимум флуоресценции этого флуорофора приходится на красную область спектра, где многие CCD-детекторы имеют максимальную чувствительность, а фон от биологических объектов низок. Цвет красителя очень насыщенный: даже весьма малые его количества (1 наномоль) можно увидеть в гель-электрофорезе невооруженным глазом. Активированное N-гидроксисукцинимидное (NHS) производное этого красителя (Cy5® NHS эфир) применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках, амино-модифицированных олигонуклеотидах. Для проведения реакции требуется небольшое количество органического растворителя (ДМФА или ДМСО - подробности см. в рекомендованном нами для этого реагента протоколе). Данный реагент идеален для мечения водорастворимых белков, пептидов и олигонуклеотидов. Он также хорошо работает в органических растворителях для мечения малых молекул. Для легко денатурируемых белков и в других молекул, плохо совместимых органическими сорастворителями, рекомендуется использовать водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine5, не требующий использования органического растворителя и имеющий практически идентичные флуоресцентные свойства. Флуорофор Cyanine5 совместим с различными аналитическими приборами, включая большинство флуоресцентных микроскопов, имэджеров, сканеров флуоресценции. Существует ряд аналогов Сyanine5. Активированный эфир Cyanine5 успешно заменяет активированные эфиры Cy5® и DyLight 649.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином, который на ранних стадиях апоптоза перемещается со внутренней стороны клеточной мембраны во внешнюю. Данный аннексин V представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 647 — ярким, фотостабильным, гидрофильным дальне-красным флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с Cyanine5 (максимум поглощения — 655 нм, максимум эмиссии — 680 нм). Красители с максимумом флуоресценции в дальнем красном диапазоне (более 650 нм) широко используются в различных методах визуализации благодаря низкому уровню фоновой флуоресценции в данной области спектра. Окрашивание на аннексин V-AF 647 не позволяет разделять популяции апоптотических и некротических клеток. Для этого требуется дополнительное окрашивание клеток непроникающими в живые клетки ядерными красителями — йодистым пропидием или YODi-3. Для этого также можно использовать готовый набор для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF 647.

JOE — ксантеновый краситель, производное флуоресцеина, содержащий метоксигруппы и атомы хлора. Его спектры поглощения и эмиссии попадают в канал между FAM и TAMRA/ROX. По этой причине этот флуорофор часто используется для мультиплексной детекции, в том числе при секвенировании ДНК. Это производное — активированный N-гидроксисукцинимидный эфир, использующийся для мечения белков, пептидов, амино-модифицированных олигонуклеотидов и других целевых молекул через конъюгацию с аминами.

AF 430 — гидрофильный флуорофор. Он используется в проточной цитометрии и других флуоресцентных методах. Функциональная группа — активированный эфир — позволяет проводить эффективную конъюгацию флуорофора с первичными и вторичными аминами (в том числе белками и антителами) в среде водных буферов и безводных органических растворителях.

DusQ 3 NHS активированный эфир представляет собой производное тушителя флуоресценции DusQ 3 для конъюгации с аминогруппами белков, олигонуклеотидов. Демонстрирует наиболее эффективное ковалентное связывание в диапазоне значений pH 7-9. DusQ 3 используется в качестве акцептора для флуорогенных зондов с двойной меткой, зондов для количественной ПЦР, секвенирования и других областей применения комбинации репортер-гаситель. Для DusQ 3 характерным является диапазон поглощения 620-730 нм, благодаря чему в методах, основанных на резонансном переносе флуоресцентной энергии (FRET), он служит акцептором в сочетании с флуорофорами с эмиссией в диапазоне от дальнего красного до ближнего-ИК таких, как Cyanine5, Cyanine5.5, AF 647.

Излучающий в синем спектре кумариновый краситель AF 343 (Кумарин) образует FRET-пару с флуоресцеином. Его производное, реакционноспособное по отношению к аминогруппам (AF 343-NHS), активировано N-гидроксисукцинимидом (NHS). Получившийся NHS-эфир красителя содержит линкер аминогексановой кислоты между флуорофором и NHS-группой. Линкер обеспечивает лучшую растворимость и разносит в пространстве флуорофор и помечаемую им молекулу. Кумарин, активированный NHS, может быть использован для постановки экспериментов с FRET, где акцептором является FAM, а также для создания систем генерации энергии из излучения синего спектра.

Окрашивание по Нисслю — широко используемый гистологический метод визуализации морфологии нервной ткани. Метод основан на взаимодействии основных красителей с нуклеиновыми кислотами клеток. Из-за интенсивного синтеза белка, перикарион нейронов имеет высокое содержание рибосомальной РНК в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме (т.н. «вещество Ниссля»), и в следствие этого, окрашивание нейронов основными красителями в цитоплазме более выражено, чем в ядрах. На этом основании окрашенные по Нисслю нейроны можно отличить от глиальных клеток, а данный метод считается специфичным для обнаружения нейронов. Deep-Red Fluorescent Nissl Stain — непроникающий в живые клетки краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с РНК и ДНК. Длинноволновая флуоресценция Deep-Red Fluorescent Nissl Stain сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

Neuro-DiO представляет собой зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель с максимумом возбуждения при 497 нм и максимумом эмиссии при 514 нм. Neuro-DiO является аналогом DiO, широко используемого антероградного и ретроградного нейротрейсера и мембранного красителя для живых и фиксированных тканей и клеток. В отличие от DiO, Neuro-DiO обладает лучшей растворимостью в мембранах и менее склонен к образованию нефлуоресцентных агрегатов, снижающих скорость диффузии красителя. Neuro-DiO равномерно метит нейроны посредством диффузии в плазматической мембране. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако, такой перенос может наблюдаться при повреждении мембран, например, после секционирования ткани. Neuro-DiO можно использовать совместно с другими липофильными трейсерами (DiI, DiD, DiR и т. д.) в задачах двухцветного и многоцветного имиджинга.

TODi-3 (гомодимер Тиазолового Красного, также известный как TOTO®-3) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в дальней красной части спектра. TODi-3 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TODi-3 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. TODi-3 не цитотоксичен и может использоваться для долгосрочного мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре. Длинноволновая флуоресценция TO-TAP-3 сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.