Биореактивы

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GATC GAT↑C CTAG C↓TAG Источник: Bacillus stearothermophilus KT Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-) Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Блокируется dam-метилированием (GmATC): 5`-G(6mA)TC-3`/3`-CT(6mA)G-5` Не блокируется CG метилированием. Гидролизует полуметилированный по аденину сайт: 5`-G(6mA)TC-3`/3`-CTAG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGGCCC G↑GGCCC CCCGGG CCCGG↓G Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген PspOM I из Pseudomonas species OM2164 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (BamHI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (BamHI-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 10 100 25 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Смесь дезоксинуклеотидов dNTP представляет собой эквимолярный раствор высокоочищенных 2’-дезоксинуклеозид-5’-трифосфатов (dATP, dTTP, dGTP, dCTP). Смесь dNTP предназначена для использования с ДНК-полимеразами в различных приложениях, в том числе в ПЦР, обратной транскрипции и других реакциях синтеза ДНК.

Краситель QuDye dsDNA HS, 200× — реагент для количественного анализа, высокоселективен в отношении дцДНК по сравнению с оцДНК и РНК. Для приготовления рабочего раствора концентрированный реагент QuDye dsDNA HS необходимо развести в соотношении 1:200. Использование реагента QuDye dsDNA HS является более чувствительным методом по сравнению с другими традиционными методами количественного анализа ДНК и предназначен для использования со всеми моделями флуорометров. Концентрированный раствор 200× также является компонентом набора QuDye dsDNA HS для измерения количества двухцепочечной ДНК.

Описание: Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. Длины фрагментов Длина фрагмента, п.н. Масса ДНК, нг Длина фрагмента, п.н. Масса ДНК, нг 3000 70 600 90 1500 60 500 120 1000 140 400 60 900 130 300 40 800 120 200 30 700 80 100 30 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при – 20°С. Примечание: ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку. Перед использованием в ДНК маркер добавить1/10 объема SE-буфера для нанесения с красителем. Маркер с красителем может храниться при 4-8°С в течение 6 месяцев.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген I фага T7. Описание: Катализирует синтез РНК, используя в качестве матрицы ДНК, содержащую промотор фага Т7. T7 РНК полимераза используется для приготовления меченого РНК зонда и для проведения транскрипции in vitro. Определение единицы активности: За одну единицу активности T7 РНК полимеразы принимали количество фермента необходимое для включения 1 нмоля NTP в кислотонерастворимую фракцию за 60 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Т7 РНК полимераза Условия хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 1 mM EDTA; 20 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°C.

Обратная транскриптаза (ревертаза) Magnus предназначена для синтеза первой цепи комплементарной ДНК с одноцепочечной матрицы РНК. Обратная транскриптаза Magnus — модифицированная ревертаза MMLV. Особенностью Magnus является повышенная термостойкость и отсутствие активности РНКазы H, что позволяет: – Увеличить температуру обратной транскрипции для повышения специфичности реакции. – Проводить синтез кДНК на GC-богатых областях и на матрицах со сложной вторичной структурой. – Получать кДНК длиной до 12 000 п.о. Область применения: • Синтез первой цепи кДНК с дальнейшей возможностью амплификации, клонирования и экспрессии. • Синтез первой цепи кДНК с последующим анализом с помощью ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ). Частные случаи применения: синтез первой цепи кДНК-копии РНКвирусов для последующей качественной или количественной оценки.

Тест-система для выявления РНК вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота методом одностадийной ОТ-ПЦР.

Ненуклеозидный фосфорамидит, предназначенный для введения в олигонуклеотиды остатка флуоресцеина по 5’-положению. Бесцветная твердая пена. Хорошо растворим в ацетонитриле и дихлорметане.

Di-4-ANEPPS представляет собой потенциал-чувствительный краситель семейства амино-нафтил-этенил-пиридиния (Amino-Naphthyl-Ethenyl-Pyridinium, ANEP), который широко используется в качестве быстрореагирующего индикатора мембранного потенциала. Краситель не флуоресцирует в несвязанном с мембранами состоянии и отвечает только на колебания электрического потенциала в окружающей его среде. Скорость оптического ответа Di-4-ANEPPS достаточна для обнаружения миллисекундных колебаний мембранного потенциала в возбудимых клетках, таких как отдельные нейроны и клетки сердца, а также для имиджинга интактного мозга. Величина потенциал-зависимого изменения флуоресценции красителя составляет около 2-10% на 100 мВ. Краситель также демонстрирует потенциал-зависимый сдвиг в спектре возбуждения, что позволяет количественно оценивать колебания мембранного потенциала с использованием ратиометрических подходов. Di-4-ANEPPS относительно быстро интернализуется клетками, поэтому его преимущественно используют для краткосрочных экспериментов. Мы также предлагаем краситель Di-8-ANEPPS, который обладает более липофильными свойствами и лучше удерживается во внешнем слое клеточной мембраны. Поскольку Di-4-ANEPPS связывается с клеточной мембраной, он может быть также использован в качестве маркера плазматических мембран и эндоцитоза. Максимумы возбуждения/эмиссии Di-4-ANEPPS в метаноле составляют 496/705 нм соответственно. В липидах и клеточных мембранах спектры возбуждения и излучения красителя обычно смещены в синий цвет по сравнению с органическими растворителями. Di-4-ANEPPS можно вводить в клетки прямым добавлением стокового раствора в культуральную среду, с использованием мягкого детергента Pluronic® F-127 или методом ретроградного мечения. В качестве отправной точки используйте рабочую концентрацию 5-10 мкМ. Точную концентрацию красителя следует определять экспериментально.

Источник: Выделена из бактериофага Т7 который получен из инфицированого штамма E.coli с неактивными системами метилирования Dam, Dcm Описание: Двухцепочечная линейная ДНК длиной 39936 пар оснований. Молекулярный вес 26х106 дальтон. Условия хранения: 10 mM Tris-HCl; (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С.