Биореактивы

sulfo-Cyanine5 — сульфированное производное красителя Cyanine5, хорошо растворимое в воде за счет наличия в структуре красителя двух отрицательно заряженных сульфогрупп. По спектральным свойствам является аналогом Cy™5 с максимумом флуоресценции в дальне-красной области спектра. Гидразиды эффективно взаимодействуют с альдегидами и кетонами с образованием гидразонов, поэтому данное соединение хорошо подходит для коньюгации с карбонильными производными биомолекул. Реакция проходит в водных условиях, что важно при работе с антителами и многими другими белками. Цис-диольные группы в сахарах в структуре гликозилированных белков и антител можно окислить в диальдегиды, а цистеин в белках можно ферментативно превратить в формилглицин — реакционноспособные группы для конъюгации с гидразидом sulfo-Cyanine5. Карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот в белках и пептидах также могут быть конъюгированы с гидразидом sulfo-Cyanine5 в присутствии активирующих агентов: производных карбодиимида (EDAC) или метилморфолина (DMTMM).

Гидразидное производное Cyanine7 - флуорофора для ближней ИК-области, аналога Cy7®. Этот вариант гептаметинового флуорофора содержит циклогексеновое кольцо, увеличивающее жесткость полиметиновой цепочки. Благодаря этой особенности структуры, квантовый выход флуорофора выше на 20% в сравнении с родоначальным соединением. Гидразиды быстро и гладко реагируют с альдегидами и кетонами с образованием стабильных гидразонов. Эта реакция хорошо подходит для синтеза флуоресцентно-меченых производных. Она годится и для мечения гликопротеинов после их окисления периодатом.

TechnoDye 498/505 - водорастворимый флуорофор. Его спектры поглощения и эмиссии демонстрируют сходство со спектрами для флуоресцеина. Однако, в отличие от флуоресцеина, TechnoDye 498/505 флуоресцирует также и в кислой среде, а также существенно более фотостабилен и устойчив к окислению.

DusQ 2 dT фосфорамидит — это реагент для синтеза модифицированных олигонуклеотидов, содержащих нуклеотид с основанием, несущим нефлуоресцирующий тушитель. DusQ 2 применяют для приготовления зондов для количественной ПЦР (qPCR) с репортером и тушителем. Данный фосфорамидит имеет DMT-защиту гидроксиметильной группы, и может использоваться для очистки на картридже. Для DusQ 2 характерно высокое значение коэфициента экстинкции, он эффективно гасит флуоресценцию репортеров даже в дальнем красном диапазоне, например, Cyanine5. DusQ 2 имеет широкий спектр поглощения в красной до ближне-инфракрасной области спектра, он работает в паре с красителями, испускающими в диапазоне 560–670 нм, такими как TAMRA, ROX, Cyanine3 и Cyanine5.

DusQ 2 активированный эфир можно конъюгировать с модифицированными олигонуклеотидами, различными амин-содержащими белками и другими молекулами. DusQ 2 является тушителем, для которого характерен максимум поглощения при 552 нм. Находит широкое применение в методах исследования FRET в качестве акцептора в паре с флуорофорами с эмиссией в жёлтой и оранжевой до красной областей спектра, например, Cyanine3, Cyanine5, ROX, Texas Red, AF 555, AF 594, AF 647.

Азид для конъюгации с помощью медь-катализируемой и безмедной стерически промотируемой клик-реакций. Предназначен для мечения флуорофором BDP TR — ярким красителем с эмиссией в красной области спектра. Этот краситель на основе бордипиррометена содержит арильные заместители, подобранные для соответствия спектров его поглощения и эмиссии каналу ROX. В то время как краситель ROX склонен к окислению, BDP TR к нему устойчив. Он также характеризуется очень высокой яркостью и фотостабильностью.

ПЭГ3-тетразин — монореакционноспособное производное, позволяющее конъюгировать гидрофильный остаток триэтиленгликоля (ПЭГ3) посредством реакции Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями (IEDDA) с напряженными олефинами — транс-циклоалкенами и некоторыми циклоалкинами.

Твердофазный носитель, модифицированный красителем родаминового ряда TAMRA для синтеза олигонуклеотидов с 3'-концевой меткой. Содержит чистый 5-изомер флуоресцентного красителя, излучающего в красной области спектра. Этот носитель CPG 500 Å обеспечивает оптимальный выход олигонуклеотидов длиной до 50 оснований. Носители с TAMRA позволяют вводить репортер/тушитель в дважды меченые зонды, такие как TaqMan, для использования в ПЦР режима реального времени и в экспериментах с переносом энергии FRET.

SIMA-dT фосфорамидит используется при синтезе олигонуклеотидов для введения в последовательность красителя дихлордифенилфлуоресцеина (SIMA), как правило, за счёт замены природного дезокситимидина (dT). SIMA как более стабильный в основной среде краситель, чем HEX, позволяет проводить деблокирование в жестких условиях, используя как концентрированный раствор аммиака (до 6-8 часов при 55 градусах), так и AMA (смесь 1:1, концентрированный водный аммиак / 40% водный метиламин) при комнатной температуре или при 65 градусах.

Малеимид Cyanine3 - производное красителя, реагирующее с тиолами. Этот реагент используется для присоединения флуорофора Cyanine3 (аналога Cy3®) к белкам и пептидам, содержащим остатки цистеина, а также к другим молекулам, содержащим тиольную (меркаптановую) функциональную группу (например, олигонуклеотидам с тиольной модификации). Остатки цистина и другие дисульфиды перед проведением реакции следует восстановить до тиолов. Для этого хорошо подходит трис(карбоксиэтил)фосфин (TCEP), но не меркаптоэтанол и не дитиотреит, которые сами содержат тиольные группы. Мечение малеимидами происходит селективно и с высокой эффективностью. Для мечения антител и других белков, чувствительных к добавлению органических растворителей, мы рекомендуем Малеимид sulfo-Cyanine3 - это водорастворимый реагент, который позволяет проводить мечение в полностью водной среде.

sulfo-Cyanine5 — флуоресцентный краситель дальней красной области спектра, широко используемый для мечения биомолекул. Максимумы поглощения и эмиссии sulfo-Cyanine5 находятся на 646 и 662 нм, соответственно. Красители с максимумом флуоресценции в дальнем красном диапазоне (более 650 нм) широко используются в различных методах визуализации благодаря низкому уровню фоновой флуоресценции в данной области спектра. Кроме этого, они используются в мультиплексной детекции вместе с красителями ближнего красного, оранжевого, зеленого и синего диапазонов. Биотин, или водорастворимый витамин Н, играет важнейшую роль в реакциях клеточного метаболизма. Он с высокой аффинностью и некооперативно связывает авидин, гликопротеин белка куриного яйца, а также стрептавидин (бактериальный аналог авидина) и нейтравидин (дегликозилированный авидин). Таким образом, конъюгат sulfo-Cyanine5 с биотином может использоваться для качественной и количественной оценки сайтов связывания авидина в биологических образцах различного происхождения. Реагент хорошо растворим в воде, его флуоресценция не зависит от рН в диапазоне от pH 4 до pH 10. Гибкий ПЭГ3-линкер между биотином и sulfo-Cyanine5 предотвращает стерические затруднения при связывании конъюгата с авидином. Конъюгат sulfo-Cyanine5-биотин может использоваться в различных методах для визуализации целевых молекул (например, для мечения первичных и вторичных антител для Вестерн-блоттинга, иммуноанализа, цито- и гистохимии, проточной цитофлуориметрии), измерения констант связывания и диссоциации, биосенсоров на основе стрептавидина и т. д.