Биореактивы

Обратная транскриптаза (ревертаза) Mint предназначена для синтеза первой цепи комплементарной ДНК с одноцепочечной матрицы РНК. Обратная транскриптаза Mint — модифицированная ревертаза MMLV. Особенностью Mint является отсутствие активности РНКазы H и способность нематрично присоединять к 3’-концу первой цепи кДНК несколько дезоксинуклеотидов (преимущественно G или C) после завершения синтеза, что позволяет использовать первую цепь для синтеза полноразмерных кДНК библиотек и клонирования 5’-концов кДНК (5’-RACE). Область применения: • Синтез первой цепи кДНК для дальнейшего получения полноразмерных кДНК библиотек. • Синтез первой цепи кДНК с дальнейшей возможностью амплификации, клонирования и экспрессии. • Синтез первой цепи кДНК с последующим анализом с помощью ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ).

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов(ферментативно синтезированных) для ПЦР по 0.5mМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Ферментативный синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

Описание: Представляет собой ДНК фага Лямбда гидролизованную ферментом BstEII с образованием 14 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. Длины фрагментов Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. 8454 4822 1929 224 7242 4324 1371 117 6369 3675 1264 5686 2323 702 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С. Примечание: Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. Перед использованием в ДНК маркер добавить1/10 объема SE-буфера для нанесения с красителем. Маркер с красителем может храниться при 4-8°С в течение 6 месяцев.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG CC↑WGG GGWCC GGW↓CC Источник: Bacillus stearothermophilus 2U Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 50 50 10 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента <5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCGCC GGC↑GCC CCGCGG CCG↓CGG Источник: Enterobacter gergoviae Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 10 50 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Набор предназначен для быстрого выделения плазмидной ДНК высокой степени очистки из культуры клеток E. coli. Выделенная ДНК пригодна для ПЦР, секвенирования, рестрикции, трансформации, трансфекции и других молекулярно-биологических приложений.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: (N)7GAACNNNNNNTAC(N)12 ↑(N)7GAACNNNNNNTAC(N)12↑ 21(N)CTTGNNNNNNATG7(N) ↓21(N)CTTGNNNNNNATG7(N)↓ Источник: Pseudomonas stutzeri N2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 10 100 30 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 30°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: При 37°С активность 20% от максимальной Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Представляет собой ДНК фага Лямбда гидролизованную ферментом Hind III с образованием 8 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. Длины фрагментов Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. 23130 6557 2322 564 9416 4361 2027 125 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С. Примечание: Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. Перед использованием в ДНК маркер добавить1/10 объема SE-буфера для нанесения с красителем. Маркер с красителем может храниться при 4-8°С в течение 6 месяцев.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGTGA(N)8 GGTGA(N)8↑ CCACT(N)7 CCACT(N)7↓ Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген AsuHP I из Actinobacillus suis HP. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере O при 37°С за 1 час. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10-25 50-75 100 75-100 25-50 100 Условия хранения: 15 mM Tris-HCl (pH 7.5), 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 30% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется dam-метилированием при перекрывании (GmATC): GGTGATCС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O. Примечание: Фермент также может гидролизовать ДНК в положении 9/8 в зависимости от последовательности между сайтомузнавания и местом расщепления.

Окрашенная реакционная смесь 5X ScreenMix-HS (UDG) предназначена для проведения ПЦР с последующим электрофоретическим анализом продукта в агарозном геле. В состав смеси входят UDG (урацил-ДНКгликозилаза) и нуклеотиды dUTP. На первом этапе фермент UDG разрушает все ранее амплифицированные ПЦР-продукты по включенным остаткам dUTP, что предотвращает кросс-контаминацию. В состав 5X ScreenMix-HS (UDG) входят все необходимые компоненты ПЦР: Taq ДНК-полимераза с «горячим стартом», UDG, смесь dNTP (включая dUTP в оптимальной пропорции), ионы Mg2+, ПЦР буфер, глицерин, красители (красный и желтый). Красители и глицерин позволяют после прохождения ПЦР напрямую наносить реакционную смесь на гель для проведения электрофореза. Для постановки реакции ПЦР в смесь требуется добавить только праймеры, ДНК-матрицу и воду.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGC GCG↑C CGCG C↓GCG Источник: Arthrobacter species LE3860 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 75 100 50 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Фермент чувствителен к CpG метилированию Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием 5`- G(5mC)GC – 3`/3`- CG(5mC)G – 5` Не блокируется при метилировании 5`- GCG(5mC) – 3`/3`- (5mC)GCG – 5` и 5`- GCG(5mC) – 3`/3`- CGCG – 5`. Гидролизует полуметилированный по внутреннему цитозину сайт: 5`-G(5mC)GC-3`/3`-СGCG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.