Биореактивы

Стандартный праймер комплементарен последовательности 16S rRNA. 16S RNA Reverse: 5’-CTT GTG CGG GCC CCC GTC AAT TC-3’

ROX (родамин X или родамин 101) — флуорофор красной области спектра, обладающий высокой яркостью и квантовым выходом флуоресценции. Данный реагент представляет собой высокоочищенный 6-изомер. ROX карбоновая кислота представляет собой нереактивную форму красителя ROX, которую можно использовать в качестве эталонного стандарта в экспериментах с конъюгатами ROX. Кроме того, карбоксильная группа может реагировать с гидразинами, гидроксиламинами и аминами с использованием карбодиимидов, таких как EDAC.

Набор для трекинга клеток CFDA SE используется для флуоресцентного мечения и долгосрочного отслеживания клеток. CFDA SE (сукцинимидиловый эфир (5,6)-карбоксифлуоресцеина диацетата) — стабильный, проникающий в клетки диацетатный предшественник CFSE. Краситель не флуоресцирует до тех пор, пока не произойдет отщепление ацетатных групп внутриклеточными эстеразами. При этом образуется CFSE — флуорофор с излучением в зеленой области спектра (максимум поглощения при ~492 нм, максимум излучения при ~517 нм). CFSE взаимодействует с клеточными аминами через свои сукцинимидильные группы и ковалентно связывается с внутриклеточными белками. CFDA SE обычно используется для мечения клеток и оценки их пролиферации in vivo и in vitro, а также для трекинга клеток и мониторинга их подвижности. Внутри клетки CFDA SE не проявляет цитотоксичности и минимально воздействует на пролиферативную способность или биологию клетки. Во время пролиферации флуоресцентная метка распределяется примерно поровну между потомками, приводя к последовательному уменьшению интенсивности флуоресценции вдвое в ходе ряда клеточных делений. Это позволяет производить количественную оценку пролиферативной способности клеток. Набор для трекинга клеток CFDA SE содержит микропробирки с сухим красителем и безводный ДМСО для приготовления небольших объемов рабочего окрашивающего раствора, что удобно для проведения экспериментов и их масштабирования без лишней потери красителя.

Лаурдан (6-додеканоил-2-диметиламинонафталин) — проникающий в мембраны флуоресцентный индикатор, высокочувствительный к физическому состоянию окружающих его фосфолипидов. Лаурдан состоит из цепочки лауриновой кислоты, связанной с молекулой нафталина. Гидрофобный хвост жирной кислоты внедряет молекулу индикатора в липидный бислой мембраны. Нафталиновая часть молекулы локализуется на уровне глицериновых остовов мембранных фосфолипидов. Химическая структура и мембранное расположение Лаурдана делают его чувствительным к присутствию и подвижности молекул воды в липидном бислое. Количественное определение генерализованной поляризации Лаурдана можно использовать для идентификации фосфолипидной фазы. При возбуждении длиной волны 340 нм значения генерализованной поляризации составляют 0,6 для гелевой фазы и −0,2 для жидкокристаллической фазы. Генерализованная поляризация Лаурдана не зависит от полярной головной группы и pH в диапазоне от 4 до 10. Лаурдан подходит для визуализации мембран методами генерализованной поляризации и сканирующей флуоресцентной корреляционной спектроскопии. Его также можно использовать для визуализации липидных рафтов (липидных микродоменов) в живых и фиксированных клетках и целых тканях с помощью мультифотонной микроскопии. Максимумы эмиссии Лаурдана составляют 440 нм и 490 нм в гелевых и жидкокристаллических мембранах, соответственно. Чтобы приготовить концентрированный стоковый раствор Лаурдана с концентрацией до 20 мМ, растворите его либо в ДМФ, либо в ацетонитриле.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(67 mM Tris-HCl (pH 8.8 при 25°C); 6.7 mM MgCl2; 16.7 mM (NH4)2SO4; 1 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Тетраацетилированный N-азидоацетилманнозамин (Ac4ManNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4ManNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилманнозамина (ManNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.

 Преимущества набора: • ДНК из любых реакционных смесей, фрагменты длины от 70 до 20000 п. о. • Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,0 • Выделенный ПЦР-продукт пригоден для проведения лигирования, рестрикции, трансформации, секвенирования, ПЦР.

Набор разработан на основе рекомендаций Европейской и Средиземноморской организации по карантину и защите растений (EPPO) и позволяет детектировать ДНК патогена методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Мишенью для амплификации является участок ams-оперона Erwinia amylovora. Внутренний контроль (ВКО) разработан на основе последовательностей генов 18S-рибосомной РНК яблони и груши. Зонд TaqMan® к участку генома Erwinia amylovora несет на 5’-конце метку-краситель FAM. ВКО-специфичный зонд мечен флуорофором HEX, что позволяет пользователю валидировать этап экстракции ДНК из растений.

Singlet Oxygen Sensor Green (SOSG) — флуорогенный индикатор для обнаружения синглетного кислорода (1O2) в водных растворах. SOSG способен встраиваться в живые клетки млекопитающих и может быть использован для визуализации in vivo внутриклеточного 1O2, а также различных клинических исследованиях. Молекула SOSG состоит из двух частей: флуорофора и захватывающего фрагмента — антрацена. В отсутствие синглетного кислорода эмиссия флуорофора гасится за счет переноса электронов с захватывающего фрагмента. SOSG демонстрирует слабую синюю флуоресценцию с максимумами возбуждения/эмиссии при 372/395 и 393/416 нм. В среде, содержащей 1O2, захватывающий фрагмент реагирует с синглетным кислородом и образует эндопероксид антрацена, который после этого перестаёт быть эффективным внутримолекулярным донором электронов. Прекращение тушения приводит к флуоресценции флуорофора с максимумами возбуждения/эмиссии около 504/525 нм.В отличие от других реагентов для детекции 1O2, SOSG обладает высокой селективностью в отношении синглетного кислорода и не проявляет заметной реакции на супероксид (•O2−) или гидроксильный радикал (•OH). Однако он активируется при щелочном pH и в некоторых растворителях, таких как ацетонитрил, ДМСО, ДМФА и ацетон. После получения реагента храните его в сухом и защищенном от света месте при температуре −20°C, не открывая пробирки до начала использования. Для приготовления стокового 5 мМ раствора, растворите содержимое пробирки с 100 мкг вещества в 33 мкл абсолютного метанола. Рабочие растворы SOSG готовят непосредственно перед использованием, излишки разбавленного реагента необходимо утилизировать по окончании работы. Оптимальную рабочую концентрацию SOSG определяют опытным путем, рекомендуемый диапазон начальной концентрации реагента составляет 1–10 мкМ.

Описание фермента. InnovaHeliх использует энергию гидролиза нуклеотидтрифосфатов (АТФ, ГТФ) для движения вдоль сахарофосфатного остова нуклеиновых кислот (ДНК, РНК, гибридов ДНК/РНК) и разрыва внутри- или межмолекулярных водородных связей между основаниями, обладает способностью расплетать двухцепочечные ДНК-субстраты. Подходит для использования в составе смесей для LAMP (петлевая изотермическая амплификация) и ОТ-LAMP (петлевая изотермическая амплификация с обратной транскрипцией) в качестве дополнительного фермента, повышает специфичность изотермической реакции. Применение: полимеразная цепная реакция; полимеразная цепная реакция с этапом обратной транскрипции; петлевая изотермическая амплификация; одношаговая петлевая изотермическая амплификация с этапом обратной транскрипции (OT-LAMP); секвенирование. Происхождение фермента. Фермент получен из рекомбинантного штамма Еscherichia coli. Особенности фермента: термостабильность до 65 °С. Условия реакции: в 1-кратном реакционном буфере для изотермической амплификации, обогащенном АТФ и ГТФ. Инкубирование при температуре плюс 60-65 °C. Инактивация проходит при температуре плюс 85 °С в течение 5 мин. Буфер для хранения: 10 мМ Трис рН 7,5, 0,1 М KCl, 0,001 ДТТ, 0,1 мМ ЭДТА. Условия хранения: 1 год при температуре минус 20 °С. Цена указана за 1 мкг фермента при концентрации 20 мкг/мл.

Буферы 10X Tersus Plus предназначен для работы со смесью полимераз Tersus. Концентрация ионов магния в 10X Tersus Plus буфере составляет 25 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 2,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 10Х Tersus Plus буфер подходит для большинства приложений, может быть использован для проведения ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующим красителем SYBR Green I, Eva Green. Рекомендуется для работы со сложными для амплификации фрагментами, например, с фрагментами, богатыми GC участками (>65 % GC). При этом следует внести следующие изменения в стандартную программу ПЦР: • увеличить продолжительность предварительной денатурации до 2 мин; • увеличить количество циклов ПЦР на 2–7.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CYCGRG C↑YCGRG GRGCYC GRGCY↓C Источник: Alteromonas macleodii 87 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 50 75 100 25 Условия хранения: 10 mM KH2PO4 (pH 7.2); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.