Биореактивы

SIMA-dT фосфорамидит используется при синтезе олигонуклеотидов для введения в последовательность красителя дихлордифенилфлуоресцеина (SIMA), как правило, за счёт замены природного дезокситимидина (dT). SIMA как более стабильный в основной среде краситель, чем HEX, позволяет проводить деблокирование в жестких условиях, используя как концентрированный раствор аммиака (до 6-8 часов при 55 градусах), так и AMA (смесь 1:1, концентрированный водный аммиак / 40% водный метиламин) при комнатной температуре или при 65 градусах.

Антитела кролика к коллагену IV человека (2 WB), аффинно-очищенные, идеально подходят для использования в методе вестерн-блота. Данной фасовки достаточно для обработки двух мембран площадью 36 см2. Коллаген IV типа - основной компонент базальных мембран. Одной из основных функций коллагена IV типа является поддержание структуры тканей в процессе эмбриогенеза, ремоделинга и регенерации. Молекула коллагена IV типа является лигандом для интегринов, рецепторов на поверхности клеток, обеспечивая клеточную адгезию, миграцию и дифференцировку.

Данный фосфорамидит используется для синтеза олигонуклеотидов, меченых TAMRA на 5’-конце. TAMRA (карбокситетраметилродамин) — ксантеновый краситель родаминового ряда с эмиссией в оранжевой области спектра (максимум на 563 нм). Данный флуорофор традиционно используется в качестве FRET-акцептора (и тушителя) в паре с флуоресцеином (FAM) благодаря значительному перекрытию их спектров. Поэтому данный фосфорамидит удобно использовать для синтеза дважды меченых зондов TaqMan, содержащих TAMRA на 5’-конце и FAM в середине последовательности или на 3’-конце (с использованием Флуоресцеин dT фосфорамидита и FAM CPG соответственно). 5’-меченые красителем TAMRA олигонуклеотиды часто используются для количественной ПЦР и фрагментного анализа (например, для анализа микросателлитов), поскольку доступное оборудование часто имеет канал детекции для TAMRA. Поскольку краситель TAMRA не стабилен в присутствие аммиака и первичных стерически незатрудненных аминов, настоятельно рекомендуется соблюдать указанные условия деблокирования меченых олигонуклеотидов.

LumiTracker® Lyso Blue — флуоресцентный краситель, избирательно накапливающийся в клеточных органеллах с кислым содержимым. Он активно используется для окрашивания живых лизосом, поддерживающих для эффективной работы гидролитических ферментов низкий уровень pH с помощью протонной помпы. LumiTracker® Lyso Blue содержит в своей структуре аминогруппы, которые выступают в роли слабого основания. В нейтральной среде они не полностью протонированы, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему ее проникновению через клеточную мембрану. Попадая в лизосомы и другие органеллы с кислой средой, краситель протонируется и, предположительно, таким образом удерживается в их составе. Мечение живых клеток производится с использованием наномолярных концентраций LumiTracker® Lyso Blue без использования детергентов. Протонирование красителя способствует локальному защелачиванию, поэтому окрашивание живых клеток рекомендуется проводить не более 7 мин непосредственно перед визуализацией с помощью флуоресцентной микроскопии. LumiTracker® Lyso Blue имеет максимум поглощения при 373 нм и максимум флуоресценции при 422 нм. Для визуализации лизосом мы также предлагаем LumiTracker® Lyso Green и LumiTracker® Lyso Red для зеленого и красного каналов. LumiTracker® Lyso Blue поставляется в виде 1 mM раствора в ДМСО.

KTN-полимераза — модифицированная Taq-полимераза, у которой отсутствует 5’ → 3’ экзонуклеазная активность. Реакционная смесь 5X KTNmix-HS применяется для ПЦР-РВ с флуоресцентными зондами или праймерами по технологиям, основанным на изменении конформации зонда без его разрушения (технологии Scorpion, Amplifluor, LUX и другие). Возможно применение с целью генотипирования. В состав 5X KTNmix-HS входят: KTN-полимераза, инактивированная специфичными моноклональными антителами; смесь dNTP, оптимизированный буфер и ионы магния. Для постановки ПЦР к смеси необходимо добавить праймеры, флуоресцентные пробы и ДНК-матрицу.

LumiTracker Mito Green FM — катионный зеленый флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. Краситель пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них, поэтому часто используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий. Флуоресценция LumiTracker Mito Green FM исчезает после фиксации альдегидами, поэтому данный краситель подходит только для работы с живыми клетками.

Тест-система для выявления генетического материала вирусa лейкоза кошачьих (Feline leukaemia virus) методом одностадийной ОТ-ПЦР.

ПЭГ3-дикарбоновая кислота - гомобифункциональный линкер с двумя карбоксигруппами, с линкером PEG3. Линкер отличается высокой гидрофильностью, пригоден для конъюгации и иммобилизации белков, пептидов и других биомолекул. Карбоксильную группу можно активировать карбодиимидами.

DiA представляет собой диалкиламиностириловый краситель, который флуоресцирует после растворения в органических растворителях, в т.ч. мембранах. Максимальная длина волны возбуждения DiA — 492 нм, максимум эмиссии — 607 нм. Благодаря широкому спектру излучения DiA можно детектировать в зеленом, оранжевом и красном каналах в зависимости от используемого фильтра. DiA широко используется в качестве антероградного и ретроградного нейротрэйсера в живых и фиксированных тканях и клетках. DiA равномерно маркирует нейроны посредством диффузии в их плазматической мембране. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. DiA можно использовать для трассировки нейронов в сочетании с трейсерами другого цвета, например, DiI.

PreciseGreen — ДНК-связывающий краситель на основе бензотиазола. 200-кратный раствор в ДМСО. Это флуоресцентный сенсор, специфичный в отношении двухцепочечной ДНК. Его эмиссию в канале флуоресцеина можно легко детектировать и измерять с помощью кюветного флуориметра, флуориметра для микропланшетов, и с помощью специальных устройств для измерения количества ДНК. PreciseGreen примечателен тем, что флуоресцентный сигнал прямо пропорционален концентрации ДНК в диапазоне от десятков пикограмм до сотен нанограмм в миллилитре образца. Также доступен готовый набор с данным красителем.

5-Винилуридин (VU) представляет собой производное уридина с концевой алкеновой группой, использующееся для исследования и мониторинга транскрипции РНК в клетках вместо 5-этинилуридина (EU). Винилуридин легко поглощается живыми клетками и включается РНК-полимеразами вместо эндогенного уридина в новосинтезированные молекулы РНК, но не в ДНК [1]. Синтезированная de novo РНК, меченная винилуридином, может быть затем обнаружена с помощью быстрой и высокочувствительной реакции циклоприсоединения с обращенными электронными требованиями Дильса-Альдера (IEDDA) между винильной группой и флуоресцентно- или биотин-меченым тетразином. Меченую РНК можно детектировать затем с помощью различных методов оценки уровня клеточной транскрипции, например, методами флуоресцентной микроскопии или проточной цитометрии.

F-ara-EdU (2’-дезокси-2’-фтор-5-этинилуридин) — синтетический аналог тимидина, используемый для изучения синтеза ДНК de novo и пролиферации клеток. F-ara-EdU является менее цитотоксичной альтернативой BrdU (5-бром-2’-дезоксиуридину) и EdU (5-этинил-2’-дезоксиуридину). F-ara-EdU встраивается в реплицирующуюся ДНК во время S-фазы клеточного цикла вместо природного тимидина. Метаболическое включение F-ara-EdU в ДНК можно обнаружить с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или биотинилированными азидами. В отличие от EdU, F-ara-EdU практически не вызывает остановки клеточных делений или ингибирования синтеза ДНК. Таким образом, F-ara-EdU идеально подходит для экспериментов, направленных на датирование появления ДНК in vivo и оценку долгосрочной выживаемости клеток.