Биореактивы

ДМФ (диметилформамид, ДМФА) - рекомендуемый растворитель для реакций мечения с использованием активированных эфиров. При хранении на воздухе ДМФ медленно портится по причине образования в нем диметиламина и поглощения воды из воздуха (этот растворитель гигроскопичен). Влага и в особенности диметиламин плохо сказываются на эффективности мечения - в растворителе низкого качества реакция может не пройти. Сушка и подготовка диметилформамида требует специального оборудования, которое не всегда доступно в биологических лабораториях. Мы предлагаем пользоваться для реакций мечения высококачественным сухим растворителем, упакованным в небольшие пробирки в инертной атмосфере.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCTAGA T↑CTAGA AGATCT AGATC↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген XbaI из Xanthomonas badrii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-/ HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-/HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 100 50 75 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): TCTAGATC. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E141m, E141T и E142T). Для фасовок Turbo (E141T и E142T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

TAMRA (тетраметилродамин) — ксантеновый краситель с максимум флуоресценции при 567 нм. Данный продукт представляет собой чистый 6-изомер N-гидроксисукцинимидного эфира красителя TAMRA. Активированный эфир TAMRA легко реагирует с различными аминами и используется для получения флуоресцентно-меченых белков, пептидов, антител и других биомолекул.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CAGCTG CAG↑CTG GTCGAC GTC↓GAC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген PvuII из Proteus vulgaris Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 25 25 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Cyanine3 тетразин - флуоресцентный краситель, содержащий фрагмент тетразина для конъюгации по реакции, называемой ТЦО (транс-циклооктеновым) лигированием. В действительности, тетразины реагруют не только с транс-циклооктенами; в качестве партнеров могут выступать циклопропены и напряженные циклоалкины, не содержащие конденсированных бензольных колец. Cyanine3 - умеренно гидрофобный краситель, пригодный для конъюгации в органических растворителях и водных средах, содержащих добавку органического растворителя, такого как ацетонитрил или ДМСО. Для реакций в водной среде есть сульфированная версия этого реагента.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: VCTCGAGB VC↑TCGAGB BGAGCTCV BGAGCT↓CV Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген PspX I из Pseudomonas species A1-1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII – digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 25 75 100 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Ингибитор РНКаз RiboCare предназначен для защиты РНК от деградации РНКазами. Ингибитор РНКаз RiboCare формирует комплексы с РНКазами, тем самым эффективно предотвращая деградацию РНК. Ингибитор РНКаз RiboCare представляет собой рекомбинантный белок, выделенный из штамма-продуцента E.coli. Защита РНК от деградации РНКазами в реакциях: – синтез кДНК, – синтез кДНК и ПЦР в одной пробирке, – in vitro транскрипция, – при обработке РНК ДНКазами

Азид-ПЭГ3-хлорид - гетеробифункциональный линкер, содержащий реакционноспособную галогенидную группу, способную замещаться под действием различных нуклеофилов. Благодаря анхимерному содействую ближайшего атома кислорода, реакционная способность галогенидной группы выше, чем для обычных алкилхлоридов. Вторая реакционноспособная группа в молекуле - азидная. Ее можно конъюгировать посредством клик-реакции. Ее также можно восстановить в аминогруппу для дальнейшего ацилирования реакционноспособными карбонильными соединениями. ПЭГ3 - гидрофильный линкер для биоконъюгации.

Антитела кролика к коллагену V человека, аффинно-очищенные, идеально подходят для использования в методах вестерн-блота и иммуногистохимии (парафиновые срезы тканей), так как они связываются как с нативным, так и с термически денатурированным коллагеном V типа. Коллаген V типа - фибриллярный белок, наиболее представленный в легких, роговице, кости, плаценте в комплексе с коллагеном I типа.

Бордипиррометеновые красители BDP - высокопроизводительные флуорофоры, обладающие отличной фотостабильностью и яркостью. Существует большое число красителей этой структуры, "настроенных" на каналы возбуждения и эмиссии классических ксантеновых и цианиновых флуорофоров. BDP R6G по своим длинам волн возбуждения и эмиссии соответствует флуорофору R6G. BDP R6G - отличная альтернатива R6G для различных применений: микроскопии, флуоресцентно-поляризационного анализа, а также для двухфотонных экспериментов. Азидогруппа позволяет легко конъюгировать флуорофор с различными биомолекулами, малыми молекулами и полимерами по реакции медь-катализируемой Click chemistry и безмедной реакции spAAC.

Многие природные и синтетические молекулы содержат карбонильный фрагмент в виде альдегидной группы или кетогруппы. Карбонильные группы реагируют с гидразидами с образованием гидразонов. Реакция легко протекает при pH около нейтрального. Образующиеся гидразоны очень стабильны. Соединения, содержащие 1,2-диольный фрагмент (например, сахара) могут быть окислены периодатом натрия до карбонильных соединений для дальнейшей модификации гидразидами. Этот метод эффективен для мечения гликопротеинов (таких как антитела) и полисахаридов. FAM гидразид - гидразидное производное флуоресцеина, яркого красителя для канала 488 нм, предназначенное для мечения карбонильных соединений.

ROX - яркий флуорофор, обладающим максимумом эмиссии в области 580 нм. Он часто используется для мечения биомолекул. Как и другие родамины, он доступен в виде двух изомеров - 5-ROX и 6-ROX. Хотя оба изомера обладают почти одинаковыми спектральными свойствами, их разделение необходимо для того, чтобы избежать "двоения" пиков и пятен меченых продуктов на ВЭЖХ или при разделении электрофорезом. Это производное содержит малеимидный фрагмент, обладающий высокой реакционной способностью в отношении тиольных групп, таких как цистеиновые остатки белков и пептидов.