Биореактивы

BDP 576/589 — бордипиррометеновый краситель. Это гидрофобный краситель с высоким квантовым выходом, характеризуется долгим временем жизни возбужденного состояния (~ 5 наносекунд). Подходит для измерения времени жизни флуоресценции, определения поляризации флуоресценции, а также двухфотонной лазерной сканирующей микроскопии. Данный реагент представляет собой активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя, который обладает реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп.

dsGold (также известен как Oxazole Gold) является асимметричным цианиновым красителем, используемым для окрашивания дцДНК, оцДНК и РНК в электрофоретических гелях. dsGold демонстрирует более чем 1000-кратное увеличение флуоресценции при связывании с нуклеиновыми кислотами и имеет самый высокий квантовый выход (0,6-0,7) по сравнению с другими красителями, такими как бромистый этидий (EtBr), dsGreen и ssGreen. Комплексы красителя с нуклеиновыми кислотами имеют два максимума возбуждения флуоресценции — при 300 нм и 495 нм, и один максимум излучения при 546 нм. Таким образом, гели, окрашенные с помощью dsGold, могут быть визуализированы с использованием как ультрафиолетовых, так и синих транслиминаторов с соответствующими светофильтрами. Чувствительность dsGold позволяет обнаруживать всего 25 пг ДНК в денатурирующих гелях с мочевиной, глиоксалом и формальдегидом. Краситель способен быстро проникать в толстые и высокопроцентные агарозные гели. Из-за низкой флуоресценции несвязанного красителя, гели с формальдегидом не требуют процедуры удаления красителя. Присутствие dsGold в окрашенных гелях в стандартных рабочих концентрациях не мешает Т4 ДНК-лигазе, Taq-полимеразе, эндонуклеазам рестрикции или нозерн- или Саузерн-блоттингу. Краситель можно легко удалить из нуклеиновых кислот путем осаждения этанолом, оставляя чистые матрицы доступными для последующих манипуляций или анализа. Мы предлагаем dsGold в виде 10 000-кратного концентрата в ДМСО. Для окрашивания геля разведите концентрат в буфере TE, TBE или TAE и инкубируйте гель в 1× окрашивающем растворе в течение 10-40 мин.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGCGCT AGC↑GCT TCGCGA TCG↓CGA Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Afe I из Alcaligenes faecalis T2774 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (BamHI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (BamHI-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 75 75 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 80% фрагментов ДНК pBR322 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир красителя AF 532. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 532 — яркий, фотостабильный, гидрофильный флуорофор, излучающий в желтом канале, альтернатива HEX, JOE и SIMA. Краситель активно используется в микроскопии сверхвысокого разрешения, в частности в методе STORM, в качестве активатора в nSTORM и репортера в dSTORM.

Излучающий в синем спектре кумариновый краситель AF 343 (Кумарин) образует FRET-пару с флуоресцеином. Его производное, реакционноспособное по отношению к аминогруппам (AF 343-NHS), активировано N-гидроксисукцинимидом (NHS). Получившийся NHS-эфир красителя содержит линкер аминогексановой кислоты между флуорофором и NHS-группой. Линкер обеспечивает лучшую растворимость и разносит в пространстве флуорофор и помечаемую им молекулу. Кумарин, активированный NHS, может быть использован для постановки экспериментов с FRET, где акцептором является FAM, а также для создания систем генерации энергии из излучения синего спектра.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GACGTC GACGT↑C CTGCAG C↓TGCAG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Aat II из Acetobacter aceti Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°C Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Амин-ПЭГ3-карбоновая кислота представляет собой бифункциональное производное полиэтиленгликоля с тремя мономерными звеньями (ПЭГ3), содержащее терминальные карбоксильную и аминогруппы. Благодаря гидрофильности ПЭГ3 спейсера, получаемые конъюгаты обладают большей растворимостью в воде. Терминальная аминогруппа способна взаимодействовать с активированными эфирами, различными карбонильными соединениями (например, альдегидами и кетонами) и карбоновыми кислотами, например, в реакциях восстановительного аминирования. Входящая в состав Амин-ПЭГ3-карбоновой кислоты карбоксильная группа в присутствии активаторов (карбодиимидов или HATU) может реагировать с первичными аминогруппами с образованием стабильной амидной связи.

TET фосфорамидит для синтеза флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов, чистый 6-изомер. TET, тетрахлорфлуоресцеин — производное флуоресцеина с эмиссией в зеленой области спектра (максимум поглощения и эмиссии флуоресценции при 519 нм и 535 нм соответственно). TET фосфорамидит используется для синтеза флуоресцентно-меченых праймеров и гибридизационных зондов для количественной ПЦР. TET можно использовать в паре с тушителем флуоресценции DusQ1 (удобно использовать вместе с носителем DusQ1 CPG 500 с размером пор 500 Å). 5’-меченые праймеры используется в паре с немеченым обратным праймером для амплификации с помощью ПЦР микросателлитов и последующего фрагментного анализа. Продукты амплификации с TET-меткой можно анализировать на различных секвенаторах для проведения капиллярного электрофореза, в том числе на ABI PRISM® 310 Genetic Analyzer.

Антитела кролика к иммуноглобулинам кошки: биотин идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины кошки 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

Реакционноспособный краситель с малеимидной группой для сочетания с тиольными группами белков и других биомолекул, аналог малеимида Cy7®. sulfo-Cyanine7 — это флуорофор ближнего ИК-спектра. Его особенности структуры — сульфогруппы для придания молекуле растоворимости в воде, а также кольцо в гептаметиновой цепи, улучшающее фотофизические свойства. Превосходно подходит для множества применений, включая визуализацию изображений в ближнем ИК.

G-квадруплексы (G4s) представляют собой вторичные структуры, образующиеся в ДНК и РНК за счет неканонических водородных связей между четырьмя гуаниновыми основаниями [1,2]. В ядре ДНК G4s связаны с эпигенетической регуляцией экспрессии генов посредством их взаимодействия с регуляторными белками, такими как транскрипционные факторы и модификаторы хроматина [3,4]. РНК G4s связаны со сплайсингом, транспортом и регуляцией трансляции РНК, а также с РНК-опосредованными стрессовыми реакциями в цитоплазме клетки [5-7]. TOR-G4 — производное тиазолового оранжевого, недавно синтезированный флуоресцентный индикатор G4s [8]. TOR-G4 является низкомолекулярной альтернативой иммунохимии со специфичными к G4 антителами. TOR-G4 позволяет визуализировать G4s на основе изменений продолжительности флуоресценции индикатора при связывании им нуклеиновой кислоты. Продолжительность флуоресценции TOR-G4 самая высокая в присутствии G4s и значительно ниже с другими последовательностями. Внутри клеток TOR-G4 преимущественно колокализуется с РНК в цитоплазме и ядрышках, что делает его первым прижизненным зондом, валидированным для изучения роли РНК G4s в функционировании клеток. TOR-G4 подходит для визуализации РНК G4s с помощью FLIM [8].

BDP 564/570 — липофильный краситель с эмиссией в оранжевой области. Подходит для мечения различных молекул с первичными и вторичными аминогруппами, в том числе, олигонуклеотидов с амино-модификациями.