Биореактивы

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCCGGCC GGCCGG↑CC CCGGCCGG CC↓GGCCGG Источник: Rhizobium yangligense Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК Аденовируса-2 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК Аденовируса-2 Оптимальный буфер: SE-буфер RigI + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 50 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl;0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 mkg/ml BSA, 50% глицерин. При -20ºC хранить не более 7 дней. При более длительном сроке хранения рекомендуется -70°С.Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов Ad2 ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг Ad2 ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.Чувствительность к метилированию: Блокируется mCG и GmC метилированием: 5`-GGC(m5C)GGCC-3`/3`-CCGG(m5C)CGG-5` и 5`-GG(m5C)CGG(m5C)C-3`/3`-C(m5C)GGC(m5C)GG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер RigI, BSA(10 мг/мл). Примечания: Для достижения 100% активности в реакционную смесь следует добавить BSA до концентрации 100 мкг/мл.

Описание: Состав: 10 X (0,01% бромфеноловый синий; 0,25 M EDTA; 50% глицерин) Условия хранения: Хранить при комнатной температуре. Примечание: Поставляется 10 Х SE-буфер.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTTAAG C↑TTAAG GAATTC GAATT↓C Источник: Bacillus stearothermophilus AF Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 75 100 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 40% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCATGG C↑CATGG GGTACC GGTAC↓C Источник: Bacillus species 19 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер 2W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 50 75 10 5 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Bsp19I гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт 5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTACC-5` и не гидролизует метилированные сайты 5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(5mC)-5` и 5`-(4mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(4mC)-5`. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2W, BSA (кроме E047T и E048T). Для фасовок Turbo (E047T и E048T) прикладывается буфер 2W+. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 150 mM KCl; 1 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACCWGGT A↑CCWGGT TGGWCCA TGGWCC↓A Источник: Microbacterium arborescens SE Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Не блокируется dcm-метилированием (CmCWGG): ACCWGGT. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCGCC GGC↑GCC CCGCGG CCG↓CGG Источник: Enterobacter gergoviae Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 10 50 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGCT AG↑CT TCGA TC↓GA Источник: Arthrobacter luteus B Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 10 10 75 60 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Гидролизует метилированный и полуметилированный по внутреннему цитозину сайт: A G (5mC)T и AG(5mC)T T(5mC) G A TC G A С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA Примечание: AluBI является изошизомером AluI Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTATAC GTA↑TAC CATATG CAT↓ATG Источник: Bacillus stearothermophilus NA Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 75 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGGAC(N)10 GGGAC(N)10↑ CCCTG(N)14 CCCTG(N)14↓ Источник: Bacillus stearothermophilus Fl Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA Примечание: Высокая концентрация фермента в реакционной смеси приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. В присутствии SAM фермент проявляет ДНК-метилтрансферазную активность, максимальную при 48°С. При наличии в в реакционной смеси 10мМ MgCl2 рестриктазная и метилтрансферазная активности проявляются одновременно и ДНК гидролизуется специфически и полностью. При отсутствии MgCl2 ДНК только метилируется и впоследствии устойчива к гидролизу BslFI. Фермент также расщепляет ДНК в положении 11/15 от сайта узнавания. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG CC↑WGG GGWCC GGW↓CC Источник: Bacillus stearothermophilus 2U Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 50 50 10 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента <5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов для ПЦР по 0.5мМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15.5 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Химический синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.