Биореактивы

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(33 mM Tris-ацетат (pH 8.3 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. Допускается хранение буфера при 4-10°C в течение 3 месяцев. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Описание: Предназначен для разбавления концентрированных препаратов фермента. Состав: 1X(10 мМ Tris-HCl (pH 7.6 при 25°С); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 mkg/ml BSA; 1 mM DTT, 50% глицерин) Условия хранения: Хранить при -20°C. Примечание: Поставляется 1 Х SE-буфер.

Cyanine5 - флуорофор, используемый в количественной ПЦР в реальном времени. Cyanine5 фосфорамидит используется для синтеза зондов для ПЦР в реальном времени, содержащих Cyanine5 на 5'-конце, наиболее типичном месте расположения флуорофора. Это терминирующий ненуклеозидный агент. Амидитный фрагмент связан с остальной молекулой через кислородный мостик. Это обеспечивает дополнительную стабильность против перегруппировки Арбузова - реакции, которая приводит к уменьшению содержания амидита в растворе в олигонуклеотидном синтезаторе. Такой молекулярный дизайн увеличивает стабильность реагента, поддерживая эффективное связывание в течение более длительного времени.

Буферы 2X Encyclo GC предназначен для работы со смесью полимераз Encyclo. Концентрация ионов магния в 2X Encyclo GC буфере составляет 7 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 3,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 2Х Encyclo GC буфер рекомендуется для работы со сложными для амплификации фрагментами, например, с фрагментами, богатыми GC участками (>65% GC). При замораживании в 2X Encyclo GC буфере может образовываться осадок. В этом случае перед применением буфер следует прогреть на 50°C до полного растворения осадка и перемешать на вортексе. При использовании Encyclo GC буфера следует внести следующие изменения в стандартную программу ПЦР: • увеличить продолжительность предварительной денатурации до 2 мин; • уменьшить температуру отжига праймера Tm на 2- 5°C относительно расчетной величины; • число циклов увеличить на 2–3 цикла ПЦР относительно ожидаемого, при отсутствии ПЦРпродукта следует добавить как минимум 10 циклов, после чего проанализировать продукт на геле.

Позволяет определять общий белок в моче в диапазоне от 0, 05 г/л до 4 г/л без дополнительных разведений. Для работы используется малый объем биологического материала - 20 мкл. Время инкубации проб всего 10 мин при температуре 18-25оС или 37оС. Срок годности калибратора после вскрытия флакона - до 3 месяцев при 4-8оС. Возможность использования на фотометрах любого типа. Все компоненты набора готовы к использованию.

MD ДНК эндонуклеаза Bls I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(5mC)NGC G(5mC)N↑GC (5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G Источник: Bacillus simplex 23 Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза, как минимум, одного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Субстрат для определения активности: Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три канонических сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2, 3]. Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 10 50 100 75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: Неспецифический гидролиз: Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 5 ед фермента Bls I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.

Готовая смесь для ПЦР «5X qPCRmix-HS» предназначена для рутинных аналитических исследований. «5X qPCRmix-HS» представляет собой смесь рекомбинантной Taq ДНКполимеразы (получена из штамма E.coli, экспрессирующего ген polA термостабильной бактерии Thermus aquaticus YT1), специфических моноклональных антител к полимеразе, dNTP (0.75 мМ каждого), Mg2+ (15 мМ) и буфера для ПЦР. Для проведения ПЦР в реакцию требуется добавить только праймеры, воду, ДНК и компоненты для детекции ДНК — флуоресцентные зонды типа TaqMan или интеркалирующий краситель (Sybr Green, Eva Green). Область применения • Амплификация ДНК. • ПЦР-РВ с TaqMan-зондами. • ПЦР-РВ с интеркалирующими красителями. • ПЦР-скрининг. • Мультиплексная ПЦР.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl, 1 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. Допускается хранение буфера при 4-10°C в течение 3 месяцев. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Применение: синтез комплементарной цепи ДНК на матрице РНК (РНК зависимая ДНК полимераза); полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР); одношаговая петлевая изотермическая амплификация с этапом обратной транскрипции (OT-LAMP); секвенирование; синтез фрагментов кДНК длиной до 7000 п.о. Активность/единица активности: 40 ед.акт./мкл. Происхождение фермента. Фермент получен из рекомбинантного штамма Еscherichia coli, экспрессирующего модифицированный ген M-MuLV ревертазы. Особенности фермента: отсутствие активности РНКазы H; термостабильность до 62 ⁰С; высокий выход кДНК. Фермент активен в широком диапазоне температур от плюс 37 °С до плюс 62 °C. Условия реакции: в 1-кратном реакционном буфере; инкубирование при температуре от плюс 37 °C до плюс 62 °C в течение 15 – 60 минут. Инактивация проходит при плюс 85 °С в течение 5 минут. Буфер для хранения: 10 мМ Трис рН 7,5, 0,1 М KCl, 0,001 мДТТ, 0,1 мМ ЭДТА. Условия хранения: 1 год при температуре минус 20 °С. Используется в зарегистрированных в Минздраве РФ наборах реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2. Цена указана за 40 000 ед. акт. фермента. Поставляется с 5-кратным реакционным буфером.

DTT (дитиотреитол) предназначен для стабилизации и сохранения активности белков, имеющих сульфгидрильные (тиоловые) группы. Раствор DTT используется в буферах для хранения белков и ферментативных реакциях, например, в ПЦР или реакции синтеза первой цепи кДНК.

Использование в клинике: Ревматоидный фактор (РФ) представляет собой аутоантитела к собственным иммуноглобулинам класса G человека. Присутствие высоких концентраций РФ в сыворотке крови характерно для больных аутоиммунными заболеваниями, в том числе болезнью Лима, остеоартритом, моно- и полиартритом, ревматоидным артритом и др. Определение уровня РФ необходимо для повышения надежности диагностики ревматоидных заболеваний. Нормой для здорового донора является уровень РФ не более 25 МЕ/мл. Принцип метода: Метод основан на иммунологической реакции между иммобилизоваными на поверхности частиц латекса иммуноглобулинами класса G человека и ревматоидным фактором, присутствующим в образце. Образующийся в зоне эквивалентности иммунный комплекс вызывает видимую агглютинацию частиц латекса. Уровень РФ выше, чем 20 МЕ/мл выявляется появлением агглютинации латексных частиц в течение 2 минут. Для предотвращения ложно-положительной реакции для разведения проб используется входящий в состав набора буфер для разведения.

SIMA (дихлордифенилфлуоресцеин) — ксантеновый краситель со спектральными свойствами, аналогичными HEX, однако с более высоким квантовым выходом. SIMA также обладает повышенной стабильностью во время деблокирования в основных условиях, поэтому деблокирование может проводиться с использованием водного раствора аммиака при повышенных температурах либо с помощью AMA (смесь 1:1, концентрированный водный аммиак / 40% водный метиламин) при комнатной температуре в течение 2 часов или 65°C в течение 10 минут. При деблокировании водным раствором аммиака при 55°C в течение ночи SIMA, связанный с олигонуклеотидом, не деградирует, в то время как для HEX наблюдается деградация флуорофора как минимум на 10%. SIMA фосфорамидит используется в олигонуклеотидном синтезе для получения флуоресцентно-меченых праймеров и гибридизационных зондов для количественной ПЦР.