Биореактивы

MD ДНК эндонуклеаза Pkr I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(5mC)NG(5mC) G(5mC)N↑G(5mC) (5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G Источник: Planomicrobium koreense 78k Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4). Субстрат для определения активности: Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2]. Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 10 25 100 100 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: Неспецифический гидролиз: Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Применение: Набор рассчитан на проведение 20 реакций и позволяет сшивать липкие и тупые концы фрагментов ДНК в течении 5 минут при комнатной температуре (25°C). Состав: Высокоактивная Т4 ДНК лигаза, 2х буфер для реакции (132mM Tris-HCl, 20mM MgCl2, 2mM DTT, 2mM ATP, 15% PEG 6000). Условия хранения: Набор хранить при -20°C. Буфер для реакции перед первым использованием рекомендуется разделить на порции и не замораживать более 2-3 раз. Допускается хранение буфера при +4°C в течение 7 дней.

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов(ферментативно синтезированных) для ПЦР по 2.5mМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Ферментативный синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGCAG CTGCA↑G GACGTC G↓ACGTC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Pst I из Providencia stuartii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 25 25 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E109T и E110T). Для фасовок Turbo (E109T и E110T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTNAGC CC↑TNAGC GGANTCG GGANT↓CG Источник: Из штаммов E.coli, содержащих рекомбинантные плазмиды Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер K Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 50 50 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Сшивка лучше в присутствии 10% ПЭГ. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 1 часa при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер K Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности или неполному разрезанию ДНК. Рекомендуется увеличение времени инкубации вместо использования избытка фермента.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTCGAGG CC↑TCGAGG GGAGCTCC GGAGCT↓CC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Abs Iиз Arthrobacter species 7М06. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК pUC19SE/DriI в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере AbsI при 37°С за 1 час Субстрат для определения активности: pUC19SE/DriI Оптимальный буфер: SE-буфер AbsI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10-25 10-25 0-10 25-50 10-25 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 0.05% Triton X-100, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер AbsI Примечание: Длительная инкубация может привести к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTAC G↑TAC CATG CAT↓G Источник: Rhodopseudomonas sphaeroides N Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 50 50 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 100 μg/ml BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.

Состав: смесь для гидролиза ДНК эндонуклеазами рестрикции. Используется для предварительного выщепления амплифицируемого фрагмента ДНК при ПЦР как описано в публикации. Для заказа требуется указание эндонуклеазы рестрикции, подобранной таким образом, чтобы амплифицируемый фрагмент не расщеплялся.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GAAGAC(N)2 GAAGAC(N)2↑ CTTCTG(N)6 CTTCTG(N)6↓ Источник: Bacillus stearothermophilus V2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 25 100 70 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Источник: Из Tritirachium album Описание: Катализирует неспецифический гидролиз белков Определение единицы активности: Активность >30.0 ед/мг Активность ДНКаз и РНКаз не выявлена Условия хранения: Хранить при -20°С Перед тем, как открыть упаковку, нагрейте ее до комнатной температуры Фасовка: 100 мг.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mM Tris-HCl (pH 7.5 при 25°C); 6 mM MgCl2; 2 mM спермидин; 10 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Описание: Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. Длины фрагментов Длина фрагмента, п.н. Масса ДНК, нг Длина фрагмента, п.н. Масса ДНК, нг 1000 160 400 70 900 140 300 50 800 120 200 30 700 110 100 30 600 100 50 20 500 170 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при – 20°С. Примечание: ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку. Перед использованием в ДНК маркер добавить1/10 объема SE-буфера для нанесения с красителем. Маркер с красителем может храниться при 4-8°С в течение 6 месяцев.