Биореактивы

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCAGC(N)8 GCAGC(N)8↑ CGTCG(N)12 CGTCG(N)12↓ Источник: Bacillus stearothermophilus V1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК pBR322 за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК pBR322 Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 75 75 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 55°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G. Примечание: При 37°С активность 10% от максимальной.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: RGCGCY RGCGC↑Y YCGCGR Y↓CGCGR Источник: Bacillus stearothermophilus H2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 10 100 100 Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.5); 10 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

ATT 594 представляет собой красный флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. Краситель хорошо подходит для использования в микроскопии высокого разрешения и для обнаружения одиночных молекул. Данный продукт является полным аналогом ATTO®594. ATT 594 азид — флуоресцентно меченый азид, реагирующий с алкинильными производными биомолекул (терминальными алкинами и циклооктинами) посредством клик-реакций с образованием стабильных аддуктов.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGGAG(N)16 CTGGAG(N)16↑ GACCTC(N)14 GACCTC(N)14↓ Источник: Bacillus pumilus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA, 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG): 5′- C(5mC)TGGAG(N)16-3′ 3′- GGA(5mC)CTC(N)14-5′ С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

DOTA (dodecane tetraacetic acid, додекантетрауксусная кислота, также известная как тетраксетан) — комплексообразователь для ионов лантанидов. DOTA-ПЭГ4-азид представляет собой бифункциональный линкер, содержащий хелатирующую группу и азид для конъюгации с алкин-содержащими биомолекулами. Данное производное также содержит длинный гидрофильный ПЭГ4-линкер, который позволяет разделять в пространстве DOTA и связываемую с ним биомолекулу. Линкер также увеличивает растворимость вещества в воде, что упрощает его конъюгацию. DOTA-ПЭГ4-азид может быть использован для мечения радиотерапевтических агентов или визуализирующих зондов и обнаружения меченых опухолей методами ПЭТ, ОФЭКТ и КТ.

Геномная ДНК из культуры клеток человека линии HeLa, гидролизованная эндонуклеазой рестрикции TaqI (5’-T^CGA-3’), эндонуклеазой рестрикции AgsI (5’-TTS^AA-3’) или эндонуклеазой рестрикции HaeIII (5’-GG^CC-3’) и метилированная метилтрансферазой M.SssI. Содержит метилированные сайты 5’-(5mC)G-3’. Уровень метилирования гидролизатов ДНК HeLa более 97%. Поставляется в буфере хранения (10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA).

Флуоресцентный конъюгат биотина, который может быть использован в флуоресцентных аналитических методиках и для визуализации меченных стрептавидином/авидином биомолекул, к которым биотин имеет высокую аффинность. Наличие у стрептавидина четырех центров связывания биотина благоприятствует разработке поэтапных методов анализа. Например, биотинилированную целевую молекулу, обладающую аффинностью к поверхности, можно иммобилизировать на ней. Обработка стрептавидином и отмывка приводит к иммобилизации стрептавидина, который, в свою очередь, можно визуализировать данным конъюгатом и детектировать с помощью флуоресцентной спектроскопии или микроскопии. Длинный и гидрофильный ПЭГ-линкер способствует эффективному связыванию и препятствует неспецифическим взаимодействиям.

Биотин-ПЭГ4-алкин — соединение для биотинилирования методом клик-химии. Реагент позволяет метить азид-содержащие молекулы биотином с помощью катализируемой медью клик-реакции. Биомолекулы, меченные биотином, могут быть затем связаны с авидином или стрептавидином для дальнейшей их очистки или детекции. Данное производное содержит длинный гидрофильный ПЭГ4-линкер, который разделяет в пространстве остаток биотина и связанную с ним биомолекулу для более эффективного связывания биотина со стрептавидином. Линкер также увеличивает растворимость вещества в воде, что упрощает его конъюгацию.

Протеиназа К — неспецифическая протеаза семейства сериновых протеаз, расщепляющая пептидные связи, прилегающие к карбоксильной группе ароматических и алифатических аминокислот. Протеиназа К используется для расщепления белков в биологических образцах, удаления эндогенных нуклеаз при очистке ДНК и РНК, демаскирования антигенов в иммунохимии, а также при подготовке тканей для гибридизации in situ. Протеиназа К активна в широком диапазоне pH (от 6,5 до 9,5), при повышенных температурах, в присутствии хелатирующих агентов металлов и SDS. Рабочая концентрация протеиназы К обычно составляет 50–100 мкг/мл.

Пирен - полициклический ароматический углеводород, обладающий коротковолновой флуоресценцией. В отличие от других флуорофоров, он обладает большой чувствительностью к микроокружению - его флуоресценция в полярных и в неполярных окружениях различается. Когда два остатка пирена находятся рядом друг с другом, они образуют эксимеры (excited dimers - "возбужденные димеры"). Образование эксимеров может быть обнаружено и количественно оценено с помощью спектров флуоресценции. Эксимеры отличаются более длинноволновой флуоресценцией. Пирен азид - реагент для введения остатка пирена с помощью клик-химии. Этот реагент содержит линкер на основе триэтиленгликоля для увеличения гидрофильности и растворимости реагента и упрощения конъюгации с биомолекулами в водных средах.

Тетразин-транс-циклооктеновое лигирование (ТЦО-лигирование) входит в число самых быстрых на сегодняшний день реакций биоконъюгации. Водорастворимый краситель sulfo-Cyanine3 с фрагментом тетразина (метильное производное) в составе предназначен для реакций сочетания с транс-циклооктенами. У метилтетразинов оптимальная стабильность при физиологических pH, и при этом предельно высокая реакционная способность по отношению к циклооктенам. Краситель характеризуется яркостью, фотостабильностью и его излучение очень хорошо видно невооруженным глазом.

Пирен - полициклический ароматический углеводород, способный к интеркаляции в ДНК. Пирен обладает синей флуоресценцией. Ее свойства зависят от микроокружения флуорофора. Поэтому спектры флуоресценции пирена содержат информацию о структуре сайта, в котором находится флуорофор. Когда два остатка пирена сближены в пространстве, они образуют эксимеры, легко детектируемые по более длинноволновому пику в спектре флуоресценции. Пирен может служить донором для других флуорофоров, например для перилена. Этот фосфорамидит позволяет встраивать остаток пирена в состав ДНК с помощью автоматического олигонуклеотидного синтеза. Пиреновый фосфорамидит содержит фрагмент пирена, присоединенный к дезоксиуридину жестким линкером. Пирен можно ввести по 5'-положению олигонуклеотида, внутрь цепи, и по 3'-положению при использовании универсального носителя для синтеза. Этот амидит совместим со стандартными условиями конденсации и деблокирования. Для растворения рекомендуется использовать ацетонитрил.