Биореактивы

Антитела овцы к иммуноглобулинам кролика идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины овцы 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

AF 488 С6 малеимид применяется для мечения флуорофором AF 488 белков и пептидов, содержащих остатки цистеина, а также других молекул, содержащих тиольную (меркаптановую) функциональную группу (например, олигонуклеотидов с тиольной модификацией). Остатки цистина и другие дисульфиды перед проведением реакции следует восстановить до тиолов. Для этого хорошо подходит трис(карбоксиэтил)фосфин (TCEP), но не меркаптоэтанол и не дитиотреит, которые сами содержат тиольные группы. AF 488 представляет собой сульфированный родаминовый краситель — родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-. Они обладают практически идентичными фотофизическими свойствами. Изомеры требуют разделения, использование смеси изомеров может вести к «двоению» пиков меченых продуктов при анализе ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт представляет собой изомерно чистый 5-AF 488.

Биотин-X-малеимид представляет собой тиол-реакционноспособный бифункциональный линкер для мечения SH-групп. Его можно использовать для присоединения биотина к белкам и пептидам через остатки цистеина, а также к другим тиолированным молекулам, таким как тиол-содержащие олигонуклеотиды. Соединения, меченные биотином, затем можно связывать с авидином или стрептавидином для дальнейшей их очистки или обнаружения. Группа биотина сравнительно небольшая и не влияет на биологическую активность биотинилированных молекул. Реагент содержит аминокапроновый спейсер, который устраняет стерические препятствия для связывания целевой молекулы со стрептавидином и авидином.

DBCO-малеимид представляет собой бифункциональный линкер, содержащий малеимидную группу и фрагмент ДБЦО (дибензоциклооктин, DBCO, ADIBO). Малеимидная группа специфически и эффективно реагирует с тиолами с образованием тиоэфирных связей. Низкий массовый вес добавляет минимальный спейсер к модифицированным молекулам и обеспечивает простое и эффективное включение фрагмента ДБЦО в цистеин-содержащие пептиды или другие тиол-содержащие биомолекулы. ДБЦО является одним из наиболее реакционноспособных циклоалкинов для реакции стерически промотируемого алкин-азидного циклоприсоединения (SPAAC). ДБЦО мгновенно реагирует с азидами без необходимости использования медного катализатора с образованием стабильной триазольной связи. Скорость реакции SPAAC намного выше, чем у реакции, катализируемой медью (CuAAC), и реакций со многими другими циклооктинами. В отличие от других циклооктинов, ДБЦО не вступает во взаимодействие с тетразинами, что позволят проводить конъюгацию с ним одновременно с реакцией между транс-циклооктенами и тетразинами.

sulfo-Cyanine5.5 — водорастворимый, гидрофильный флуорофор, с эмиссией в дальнем красном диапазоне. Является аналогом Сy5.5®. Подобно другим красителям из группы цианинов, sulfo-Cyanine5.5 обладает высоким молярным коэффициентом экстинкции, что способствует его яркой флуоресценции. Молекула содержит 4 сульфогруппы, чем обусловлена её гидрофильность и отрицательные заряды в молекуле; это минимизирует неспецифические взаимодействия. Данное производное содержит фрагмент тетразина, вступающий в реакцию [4+2]-циклоприсоединения с обращенными электронными требованиями (IEDDA) с транс-циклооктенами, циклопропенами и некоторыми напряженными циклооктинами. Реагент обладает высокой гидрофильностью и рекомендуется для мечения биомолекул в водных средах.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGC G↑CGC CGCG CGC↓G Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген HspAI из Haemophilus species A1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5` Гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CGCG-5` Не блокируется при метилировании 5`-GCG(5mC)-3`/3`-(5mC)GCG-5` и 5`-GCG(5mC)-3`/3`-CGCG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

BDP 650/665 алкин — производное красителя BDP, обладающего эмиссией в красной области спектра. Данное производное содержит терминальную этинильную группу для конъюгации с азидами посредством клик-реакции. Спектры поглощения и эмиссии BDP 650/665 идеально подходят для канала Cy5 большинства приборов.

ATT 565 представляет собой оранжевый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. Краситель хорошо подходит для использования в микроскопии высокого разрешения и для обнаружения одиночных молекул. Данный продукт является полным аналогом ATTO®565. ATT 565 азид — флуоресцентно меченый азид, реагирующий с алкинильными производными биомолекул (терминальными алкинами и циклооктинами) посредством клик-реакций с образованием стабильных аддуктов.

Азидопроизводное красителя ATT 550 для конъюгации с терминальными алкинами посредством медь-катализируемой клик-реакции или с напряженными алкинами посредством безмедной безмедной клик-реакции. ATT 550 — желтый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. ATT 550 является структурным аналогом ATTO® 550. ATT 550 — катионный краситель. После связывания с субстратом краситель несет суммарный электрический заряд +1.

MD ДНК эндонуклеаза Mal I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(mA)TC G(mA)↑TC CT(mA)G CT↓(mA)G Источник: Из штамма E.Coli, несущего клонированный ген Mal из Marinococus albus I. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК pBR322 (dam-метилированной) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: pBR322 ДНК (dam-methylated) Оптимальный буфер: SE-буфер MalI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 50 75 50 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер MalI.

Антитела козы к иммуноглобулину IgG человека: биотин идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа и вестерн блота. В ИФА имеют следующую специфичность: IgG человека 100 % IgA человека <5% IgM человека <5% IgG - основной вид сывороточных иммуноглобулинов, участвующих в иммунном ответе. Молекула IgG состоит из двух тяжелых и двух легких цепей и имеет молекулярную массу около 150 кДа. IgG составляет 70-75% всей фракции иммуноглобулинов. Благодаря своим размерам является единственной фракцией иммуноглобулинов, способной к транспорту через плацентарный барьер. Дефицит IgG в организме ослабляет сопротивляемость к инфекциям.

Строительный блок, содержащий талидомид, с линкером ПЭГ2 и карбоксильной группой для удобной сборки молекулы PROTAC посредством конъюгации с амин-содержащими линкерами и лигандами целевого белка. Карбоксильную группу предварительно необходимо активировать с помощью реагентов для пептидного синтеза, таких как PyBOP, или карбодиимидов (EDC, DCC). ПЭГ2 — гидрофильный линкер, обеспечивающий пространственное разделение компонентов молекулы PROTAC. Комбинированные молекулы выборочного протеолиза белка (PROteolysis TArgeting Chimeras, PROTACs) — это гетеробифункциональные молекулы, способные проникать через клеточную мембрану, и позволяющие удалять выбранный целевой белок из клетки. Один конец молекулы PROTAC содержит лиганд, способный связываться с белком интереса, а второй — с субтрат-распознающим белком белкового комплекса E3-лигазы. Сближение белка и E3-лигазы вызывает полиубиквитинирование субстрата с последующей его деградацией клеточной протеасомой, которая распознает убиквитиновую метку. Существует несколько Е3-лигазных комплексов, которые на практике подходят для PROTAC. Талидомид — лиганд, который позволяет мобилизовать цереблон E3-лигазу (CRBN). Его используют многие новые исследовательские препараты работающие по механизму PROTAC, находящиеся на последних стадиях клинических испытаний.