Биореактивы

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(67 mM Tris-HCl (pH 8.8 при 25°C); 16.6 mM (NH4)2SO4; 0.01% Tween-20.) Отдельно поставляется 50mM MgCl2 Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Антитела кролика к иммуноглобулинам собаки: биотин идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины собаки 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

В основе работы набора лежит мультиплексная амплификация 28-ми STR-локусов с последующим разделением ПЦР-продуктов методом капиллярного электрофореза. Из них 25 аутосомных локуса: D3S1358, D2S441, D1S1656, D19S433, TPOX, D2S1338, TH01, D16S539, CSF1PO, D18S51, D21S11, D22S1045, D8S1179, VWA, D5S818, FGA, D13S317, D7S820, D12S391, D10S1248, SE33, DYS391, D8S1132, D7S1517, Penta D, Penta E и 3 половых локуса: Amelоgenin, Yindel, DYS391 Представленные в наборе STR-локусы высоко полиморфны, что позволяет достоверно идентифицировать личность. В набор входят все локусы баз данных CODIS (Combined DNA Index System) и ESS (European Standard Set), а также локусы SE33, Penta D, Penta E. Используемые в наборе праймеры мечены флуоресцентными красителями, детектируемыми в каналах Blue, Green, Yellow, Red, Purple. Стандарт длин СД-520 детектируется в канале Orange. Для получения полного (по всем 28-ти STR-локусам) генотипа исследуемого образца достаточно 0,125 нанограмм (нг) не деградированной ДНК. Оптимальное количество ДНК, вносимой в реакцию, составляет 1 нг. Диапазон концентраций ДНК для проведения амплификации составляет от 0,1 до 4 нг в реакцию. Возможно проведение ПРЦ реакции в объеме 10; 12,5 и 25 мкл. Максимальный объем вносимого в реакцию раствора ДНК может составлять 15 мкл (в случае общего объема реакционной смеси – 25 мкл).

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGCAG CTGCA↑G GACGTC G↓ACGTC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Pst I из Providencia stuartii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 25 25 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E109T и E110T). Для фасовок Turbo (E109T и E110T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Реакционная смесь 5X qPCRmix-HS HighROX предназначена для постановки ПЦР в присутствии референсного красителя ROX, и позволяет получать результаты со значительным превышением уровня сигнала над фоновой флуоресценцией и низким порогом насыщения реакции (cycle threshold, Ct). В состав 5X qPCRmix-HS HighROX входят следующие компоненты: высокопроцессивная HS Taq ДНК полимераза, референсный краситель ROX, смесь dNTP, Mg2+, ПЦР буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, матрицу ДНК, воду и краситель/зонд для детекции продукта. 5X qPCRmix-HS HighROX подходит для Real-Time амплификаторов, требующих высокой концентрации красителя ROX в реакции (например, StepOne, StepOne Plus).

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGCGC G↑CGCGC CGCGCG CGCGC↓G Источник: Bacillus stearothermophilus P Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 100 75 50 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 50°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.

Флуоресцентный краситель метокси-хлор-флуоресцеин (иначе JOE), содержащий азидную группу. Чистый 5-изомер. Предназначен для модификации с помощью click-реакций. Эмиссия в желтой области спектра. Кристаллическое вещество от оранжевого до коричневого цвета. Хорошо растворим в диметилсульфоксиде, диметилформамиде и других полярных растворителях.

Singlet Oxygen Sensor Green (SOSG) — флуорогенный индикатор для обнаружения синглетного кислорода (1O2) в водных растворах. SOSG способен встраиваться в живые клетки млекопитающих и может быть использован для визуализации in vivo внутриклеточного 1O2, а также различных клинических исследованиях. Молекула SOSG состоит из двух частей: флуорофора и захватывающего фрагмента — антрацена. В отсутствие синглетного кислорода эмиссия флуорофора гасится за счет переноса электронов с захватывающего фрагмента. SOSG демонстрирует слабую синюю флуоресценцию с максимумами возбуждения/эмиссии при 372/395 и 393/416 нм. В среде, содержащей 1O2, захватывающий фрагмент реагирует с синглетным кислородом и образует эндопероксид антрацена, который после этого перестаёт быть эффективным внутримолекулярным донором электронов. Прекращение тушения приводит к флуоресценции флуорофора с максимумами возбуждения/эмиссии около 504/525 нм.В отличие от других реагентов для детекции 1O2, SOSG обладает высокой селективностью в отношении синглетного кислорода и не проявляет заметной реакции на супероксид (•O2−) или гидроксильный радикал (•OH). Однако он активируется при щелочном pH и в некоторых растворителях, таких как ацетонитрил, ДМСО, ДМФА и ацетон. После получения реагента храните его в сухом и защищенном от света месте при температуре −20°C, не открывая пробирки до начала использования. Для приготовления стокового 5 мМ раствора, растворите содержимое пробирки с 100 мкг вещества в 33 мкл абсолютного метанола. Рабочие растворы SOSG готовят непосредственно перед использованием, излишки разбавленного реагента необходимо утилизировать по окончании работы. Оптимальную рабочую концентрацию SOSG определяют опытным путем, рекомендуемый диапазон начальной концентрации реагента составляет 1–10 мкМ.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG ↑CCWGG GGWCC GGWCC↓ Источник: Pseudomonas species 6 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dcm-) за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dcm-) Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 10 25 75 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG) : CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Примечание: При 37°С активность очень низкая.

ДНКаза Е — термостойкая эндонуклеаза, разрушающая ДНК до одноцепочечных олигонуклеотидов. Ферментативная активность проявляется в присутствии катионов кальция и магния, а ее оптимум достигается при слабокислом рН и повышенной температуре.

Каталитический буфер предназначен для конъюгации белков, модифицированных азидом (или алкином), с алкином (или азидом) красителя с помощью медь-катализируемой реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения (CuAAC). THPTA лиганд в составе буфера ускоряет реакцию и стабилизирует каталитически активные соединения меди (I). Кроме того, присутствие водорастворимого THPTA лиганда позволяет проводить реакцию мечения белков в водной среде и, за счёт стабилизации степени окисления (I) меди, минимизирует генерацию активных форм кислорода (АФК) и нежелательное повреждение ими белков. Входящий в состав буфера аминогуанидин препятствуют связыванию реакционноспособных альдегидов - продуктов гидролиза дегидроаскорбата, с боковыми цепями аргинина, N-концевого цистеина и лизина. Готовый 1.5х буфер содержит все необходимые компоненты для проведения реакции, кроме восстановителя меди (II) до меди (I). В качестве восстановителя мы рекомендуем использовать аскорбиновую кислоту. Состав буфера: медь (II), ацетат триэтиламмония pH 6.8, THPTA лиганд, аминогуанидин.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACCWGGT A↑CCWGGT TGGWCCA TGGWCC↓A Источник: Microbacterium arborescens SE Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Не блокируется dcm-метилированием (CmCWGG): ACCWGGT. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.