НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ СЕКВЕНИРОВАНИЯ ДНК ПО МЕТОДУ СЕНГЕРА GENSEQ

Сотрудниками компании СИНТОЛ разработан полимер "ПДМА-6" для секвенирования ДНК методом капиллярного электрофореза - линейный поли-N,N-диметилакриламид. По эффективности разделения полимер аналогичен полимеру "POP-7" производства фирмы "Applied Biosystems".

Продукт представляет собой стерильный 10 мМ раствор аналога структуры кэпа ARCA в виде аммонийной соли в воде. Продукт протестирован на присутствие эндо- и экзонуклеазной активности и свободен от примесей ДНКаз и РНКаз. Чистота нуклеотида по данным ВЭЖХ не менее 96%. Функциональная активность подтверждена in vitro в реакции транскрипции.

Продукт представляет собой стерильный 100 мМ раствор аналога кэпа m7GmAmG в виде аммонийной соли в воде. Продукт протестирован на присутствие эндо- и экзонуклеазной активности и свободен от примесей ДНКаз и РНКаз. Чистота нуклеотида по данным ВЭЖХ не менее 96%. Функциональная активность подтверждена in vitro в реакции транскрипции.

Описание фермента. InnovaHeliх использует энергию гидролиза нуклеотидтрифосфатов (АТФ, ГТФ) для движения вдоль сахарофосфатного остова нуклеиновых кислот (ДНК, РНК, гибридов ДНК/РНК) и разрыва внутри- или межмолекулярных водородных связей между основаниями, обладает способностью расплетать двухцепочечные ДНК-субстраты. Подходит для использования в составе смесей для LAMP (петлевая изотермическая амплификация) и ОТ-LAMP (петлевая изотермическая амплификация с обратной транскрипцией) в качестве дополнительного фермента, повышает специфичность изотермической реакции. Применение: полимеразная цепная реакция; полимеразная цепная реакция с этапом обратной транскрипции; петлевая изотермическая амплификация; одношаговая петлевая изотермическая амплификация с этапом обратной транскрипции (OT-LAMP); секвенирование. Происхождение фермента. Фермент получен из рекомбинантного штамма Еscherichia coli. Особенности фермента: термостабильность до 65 °С. Условия реакции: в 1-кратном реакционном буфере для изотермической амплификации, обогащенном АТФ и ГТФ. Инкубирование при температуре плюс 60-65 °C. Инактивация проходит при температуре плюс 85 °С в течение 5 мин. Буфер для хранения: 10 мМ Трис рН 7,5, 0,1 М KCl, 0,001 ДТТ, 0,1 мМ ЭДТА. Условия хранения: 1 год при температуре минус 20 °С. Цена указана за 1 мкг фермента при концентрации 20 мкг/мл.

Применение: петлевая изотермическая амплификация (LAMP); петлевая изотермическая амплификация с этапом обратной транскрипции (OT-LAMP); полногеномная амплификация (whole genome amplification, WGA); амплификация с вытеснением цепи (strand displacement amplification, SDA); подготовка библиотек для NGS секвенирования. Активность / единица активности: 8 ед. акт./ мкл. За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для включения 10 нмоль дНТФ в кислотонерастворимую фракцию в течение 30 минут при температуре плюс 65 °C. Происхождение фермента. Фермент получают из штамма Escherichia coli, содержащего модифицированный ген ДНК-полимеразы Bacillus stearothermophilus. Преимущества фермента. На основе данного фермента производится более 8 наборов реагентов для детекции различных заболеваний методами колориметрической изотермической петлевой амплификации, ОТ-LAMP, изотермической петлевой амплификации в режиме реального времени. Условия реакции: 1Х реакционный буфер, инкубировать при температуре от плюс 60 ⁰С до плюс 65 ⁰С. Инактивация происходит при плюс 80 ⁰С в течение 20 мин. Буфер для хранения: 10 мМ Трис рН 7,5, 0,1 М KCl, 0,001 мДТТ, 0,1 мМ ЭДТА, 0,1% Triton X100. Условия хранения: 1 год при минус 20 ⁰С. Цена указана за 8000 ед. акт. фермента. Поставляется с 10-кратным реакционным буфером.

В основе работы набора лежит мультиплексная амплификация 28-ми STR-локусов с последующим разделением ПЦР-продуктов методом капиллярного электрофореза. Из них 25 аутосомных локуса: D3S1358, D2S441, D1S1656, D19S433, TPOX, D2S1338, TH01, D16S539, CSF1PO, D18S51, D21S11, D22S1045, D8S1179, VWA, D5S818, FGA, D13S317, D7S820, D12S391, D10S1248, SE33, DYS391, D8S1132, D7S1517, Penta D, Penta E и 3 половых локуса: Amelоgenin, Yindel, DYS391 Представленные в наборе STR-локусы высоко полиморфны, что позволяет достоверно идентифицировать личность. В набор входят все локусы баз данных CODIS (Combined DNA Index System) и ESS (European Standard Set), а также локусы SE33, Penta D, Penta E. Используемые в наборе праймеры мечены флуоресцентными красителями, детектируемыми в каналах Blue, Green, Yellow, Red, Purple. Стандарт длин СД-520 детектируется в канале Orange. Для получения полного (по всем 28-ти STR-локусам) генотипа исследуемого образца достаточно 0,125 нанограмм (нг) не деградированной ДНК. Оптимальное количество ДНК, вносимой в реакцию, составляет 1 нг. Диапазон концентраций ДНК для проведения амплификации составляет от 0,1 до 4 нг в реакцию. Возможно проведение ПРЦ реакции в объеме 10; 12,5 и 25 мкл. Максимальный объем вносимого в реакцию раствора ДНК может составлять 15 мкл (в случае общего объема реакционной смеси – 25 мкл).

Фьюжн ДНК-полимераза является рекомбинантным полипептидом, состоящим из слитых термостабильной ДНК-полимеразы Pyrococcus furiosus (Pfu) и ДНК- связывающего белка термофильных архей вида Sulfolobus solfataricus (Sso7d). Белок Sso7d связывается с малой бороздкой двухцепочечной ДНК и дополнительно стабилизирует комплекс полимеразы с матрицей. Благодаря этому Фьюжн ДНК-полимераза, обладает повышенной процессивностью, точностью синтеза, скоростью амплификации фрагментов и повышенной устойчивостью к ингибиторам ПЦР по сравнению с нативной Pfu ДНК- полимеразой [1]. Фьюжн ДНК-полимераза обладает 5’→3’ полимеразной активностью, 3’→5’ экзонуклеазной активностью и синтезирует продукты с тупыми концами. Фьюжн ДНК-полимераза является хорошим выбором для рутинного клонирования и может использоваться для получения методом ПЦР длинных или сложных ампликонов. Примеры использования Фьюжн ДНК-полимеразы представлены в конце описания. Фьюжн ДНК-полимераза выделена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным фрагментом ДНК, состоящим из слитых генов термостабильной ДНК-полимеразы Pyrococcus furiosus (Pfu) и ДНК-связывающего белка Sulfolobus solfataricus (Sso7d). Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 74°С.

Набор предназначен для выделения и очистки ДНК из следующих образцов: 1. Листья, хвоя, тычинки, зелёные части растений 2. Корни, стебли, кора 3. Плоды, ягоды, семена 4. Мхи, лишайники 5. Одноклеточные водоросли

 Преимущества набора: • ДНК из любых реакционных смесей, фрагменты длины от 70 до 20000 п. о. • Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,0 • Выделенный ПЦР-продукт пригоден для проведения лигирования, рестрикции, трансформации, секвенирования, ПЦР.

Метод исследования цитотоксичности на основе резазурина базируется на способности живых клеток превращать синий нефлуоресцентный краситель, резазурин, в розовый флуоресцентный, резоруфин, что позволяет определять цитотоксичность клеток колориметрически или флуориметрически. Восстановление резазурина осуществляется широким спектром ферментов клеток (митихондриальными и цитоплазматическими дегидрогеназами, цитохромами и другими). Жизнеспособные клетки непрерывно превращают резазурин в резофурин, увеличивая общую флуоресценцию и цвет среды для культивирования клеток.

Носитель AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose — разработка Abisense для очистки белков методом металл-хелатной хроматографии низкого давления. Носитель представляет собой микросферы со средним диметром 100 мкм, полученные путем кросс-сшивания природного полисахарида агарозы фармакопейного качества, с иммобилизованным комплексом тетра-дентантного хелатирующего лиганда с никелем (AZUR-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах. Размер микросфер влияет на скорость потока и выход белка. Каталожный номер Фасовка, мл Цена, руб Срок изготовления FLO-931-102-10ML 10 мл носителя 7 800 В наличии FLO-931-102-50ML 50 мл носителя 33 100 В наличии FLO-931-102-250ML 250 мл носителя 142 700 В наличии Характеристики Параметр Значение Тип носителя Агароза Размер микросфер носителя 50-150 мкм* Аффинность His-Tag Назначение Специфическое связывание и очистка белков с His-Tag меткой Лиганд AZUR: улучшенный тетрадентантный лиганд для His-Tag Связанный ион Ni2+ Стабильность хелатора Стабилен в буферах с 20 мМ DTT и 20 мМ EDTA Хранения +4 ОС

AbiFlow 100 СМ-Agarose — слабый катионобменник на основе кросс-сшитой 4% агарозы фармакопейного качества и иммобилизованных на нее карбоксиметильных (СМ) остатков – слабого ионообменного лиганда. Отлично подходит для быстрой и эффективной очистки белков методом ион-обменной хроматографии, которую проводят, как правило, в растворах с низкой ионной силой, а элюцию связавшихся белковых молекул – в возрастающем солевом градиенте. Носитель имеет высокую пористость, что обеспечивает эффективное ионное взаимодействие с белками. Сшитая агароза физически стабильна, что делает ее пригодной для процессов очистки при низком давлении со скоростью потока до 5 мл/мин (оптимально 0,5–2 мл/мин). Плотность иммобилизованных СМ групп превышает 30 мкмоль/мл. AbiFlow 100 DEAE-Agarose поставляется в виде 50% суспензии, т.е. 1 мл соответствует 500 мкл влажной смолы. Суспензия содержит 20% этанола в качестве консерванта. AbiFlow 100 СМ-Agarose стабильна в диапазоне pH 2–14, что упрощает разработку процедуры «очистки на месте» (CIP).

Лизирующий буфер для красных кровяных клеток наиболее часто используется для лизиса эритроцитов периферической крови человека и мышей, а также суспензий мышиных гематопоэтических тканей (например, спленоциты селезенки). Данный буфер содержит хлорид аммония, благодаря чему при правильном использовании реагента лизируются преимущественно красные кровяные клетки с минимальным воздействием на лимфоциты. Ядерные эритроциты могут не разрушиться под воздействием хлорида аммония.

Данная субстратная система состоит из 2 реагентов и преимущественно используется в тестах иммуноферментного анализа (ИФА, EIA, ELISA) для определения активности пероксидазы хрена (HRP). Готовый субстрат представляет собой раствор 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина в слабокислом буфере. Непрореагировавший субстрат должен быть бесцветным или иметь очень светло-жёлтый цвет. При взаимодействии субстратной системы с пероксидазой хрена образуется растворимый продукт реакции синего цвета с максимумом поглощения при 652 нм.

Лучший субстрат для люциферазы NanoLuc. Масса Цена, руб Каталожный номер Срок изготовления 1 мг 9 000 LUX-02-5-1MG 2 недели 10 мг 72 000 LUX-02-5-10MG 4 недели 50 мг 288 000 LUX-02-5-50MG 4 недели Характеристики Параметр Значение CAS номер 1374040-24-0 Химическая формула C24H19N3O2 Молекулярная масса 381.4 г/моль Специфичность NanoLuc Применение Люминесцентный субстрат Возможность применения in vivo Да Хранение -80 ОС

Классический тип носителя для металл-хелатной хроматографии белков. Представляет собой микросферы средним диаметром ок. 100 мкм на основе кросс-сшитой агарозы фармакопейного качества с иммобилизованным комплексом лиганда нитрилотриуксусной кислоты с никелем (NTA-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах. Каталожный номер Фасовка, мл Цена, руб Срок изготовления FLO-911-102-10ML 10 мл носителя 7 800 В наличии FLO-911-102-50ML 50 мл носителя 33 100 В наличии FLO-911-102-250ML 250 мл носителя 142 700 В наличии Характеристики Параметр Значение Тип носителя Агароза Размер микросфер носителя 50-150 мкм Аффинность His-Tag Назначение Специфическое связывание и очистка белков с His-Tag меткой Лиганд NTA Связанный ион Ni2+ Стабильность хелатора Стабилен в буферах с 10 мМ DTT и 1 мМ EDTA Хранения +4 ОС