Биореактивы

Neuro-DiO представляет собой зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель с максимумом возбуждения при 497 нм и максимумом эмиссии при 514 нм. Neuro-DiO является аналогом DiO, широко используемого антероградного и ретроградного нейротрейсера и мембранного красителя для живых и фиксированных тканей и клеток. В отличие от DiO, Neuro-DiO обладает лучшей растворимостью в мембранах и менее склонен к образованию нефлуоресцентных агрегатов, снижающих скорость диффузии красителя. Neuro-DiO равномерно метит нейроны посредством диффузии в плазматической мембране. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако, такой перенос может наблюдаться при повреждении мембран, например, после секционирования ткани. Neuro-DiO можно использовать совместно с другими липофильными трейсерами (DiI, DiD, DiR и т. д.) в задачах двухцветного и многоцветного имиджинга.

Готовый набор для мечения антител красителем AF 488, эквивалентом Alexa Fluor 488®. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель, который, благодаря своей гидрофильности, хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. AF 488 представляет собой сульфированное производное красителя родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-, обладающими практически идентичными фотофизическими свойствами, но требующими их разделения, поскольку использование смеси изомеров приводит к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Тетрафторфениловые (TFP) эфиры принадлежат к группе активированных сложных эфиров, которые широко используются для конъюгации флуорофоров с первичными и вторичными аминами биомолекул. Как и гидроксисукцинимидные (NHS) эфиры, они образуют прочную амидную связь между красителем и соединением, которое подвергается модификации, однако, TFP сложные эфиры более стабильны при основных значениях pH, характерных для реакций с аминами, а также менее подвержены спонтанному гидролизу.

Тиазоловый Оранжевый представляет собой асимметричный цианиновый краситель, флуоресценция которого сильно зависит от его ближнего окружения. Тиазоловый Оранжевый практически не светится в растворе, однако тысячекратно усиливает свою флуоресценцию при его введении в двухцепочечные ДНК и РНК. Максимум поглощения Тиазолового Оранжевого в комплексе с ДНК — 509 нм, максимум излучения — 532 нм. Раствор Тиазолового Оранжевого широко используется для определения процентного содержания ретикулоцитов в периферической крови человека с помощью микроскопии и проточной цитометрии. Мы также предлагаем готовый к использованию раствор Тиазолового Оранжевого LumiCell Reticulocyte Stain для этих целей.

Краситель Cyanine7.5 - флуорофор для ближней инфракрасной области. Данное производное содержит азидогруппу для конъюгации с биомолекулами с помощью клик-реакции. Cyanine7.5 по своим фотофизическим свойствам напоминает краситель ICG (indocyanine green), но имеет более высокий квантовый выход флуоресценции. Конъюгаты с Cyanine7.5 можно использовать для неинвазивного имиджинга in vivo, поскольку спектры поглощения и эмиссии флуорофора находятся в инфракрасном окне прозрачности биологических тканей. Этот флуорофор можно использовать и в тех случаях, когда необходимо избежать высокого уровня фоновой флуоресценции от биологических объектов. Азид поставляется в виде раствора в DMSO и в сухом виде. Раствор пригоден для конъюгации в соответствии с нашим рекомендуемым протоколом.

Некатализируемая (безмедная) клик-реакция протекает между циклоалкинами (циклооктинами) и азидами. Это реакция очень быстрая и надежная; ее можно использовать флуоресцентного мечения. Этот реагент — производное водорастворимого красителя sulfo-Cyanine5, обладающего эмиссией в красной области спектра. Он хорошо подходит для мечения биомолекул в водной среде.

dСпейсер фосфорамидит (Abasic CE-Phosphoramidite) применяется для синтеза олигонуклеотидов, содержащих мономер без азотистого основания, абазический сайт. (Abasic phosphoramidite) dCпейсер фосфорамидит может быть использован при изучении повреждений и репарации ДНК. Вставка спейсера в ходе синтеза позволяет смоделировать потерю нуклеотидом способности к спариванию оснований, например, вследствие спонтанной депуринации или депиримидинирования. dCпейсер является модификацией 1’,2’-дидезоксирибозы, содержит диметокситритильную защиту гидроксиметильной группы и демонстрирует стабильность в ходе синтеза и очистки олигонуклеотидов в стандартных условиях с использованием AMA (водный аммиак / 40% метиламин, 1:1).

DDTT представляет собой сульфирующий реагент, который используется для создания фосфоротиоатных межнуклеотидных связей, повышающих стабильность и устойчивость нуклеиновых кислот, особенно РНК, к нуклеазам. Реагент подходит для автоматизированного крупномасштабного синтеза олигонуклеотидов с применением стандартных фосфорамидитов. DDTT отличается более быстрой кинетикой и более высокой стабильностью в растворе по сравнению с другими сульфирующими реагентами, такими как тетраэтилтиурамдисульфид (TETD) и реагент Бекаже соответственно. DDTT, как правило, применяется в виде 0,05 или 0,1 М раствора в смеси пиридин—ацетонитрил, период полужизни которого составляет до 6 месяцев.

JOE фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер (6-JOE). Флуоресцентный краситель JOE — производное флуоресцеина, содержащее два атома хлора и две метоксигруппы. Максимумы поглощения и испускания находятся на 503 нм и 525 нм соответственно. По спектральным свойствам JOE занимает промежуточное положение между FAM и TAMRA/ROX, и по этой причине этот флуорофор часто используется для мультиплексной детекции, в том числе при секвенировании ДНК. В нашем каталоге также представлен JOE фосфорамидит, 5-изомер. Выполненное нами сравнение кПЦР зондов, содержащих разные изомеры JOE (5-JOE и 6-JOE), не выявило между ними каких-либо существенных различий.

Алкин-ПЭГ4-активированный эфир — бифункциональная молекула, содержащая терминальную алкиновую группу и фрагмент активированного NHS-эфира. Активированные эфиры используются для мечения аминогрупп, например, лизина и концевой NH2-группы в белках и пептидах. Терминальная алкиновая группа вступает в реакцию медь-катализируемого циклоприсоединения с азидами (CuAAC) и реакцию Соногаширы. ПЭГ4 — гидрофильный линкер, обеспечивающий хорошее пространственное разделение компонентов конъюгата.

BTTAA — водорастворимый лиганд новейшего поколения, применяемый в реакции катализируемого медью (I) азид-алкинового циклоприсоединения (CuААЦ). BTTAA поддерживает степень окисления Cu (I) в катализаторе и защищает биомолекулы от окислительного повреждения во время мечения. BTTAA обеспечивает большее увеличение скорости химической реакции, чем лиганды предыдущего поколения (например, THPTA или TBTA), а также уменьшает клеточную цитотоксичность клик-реакции за счет снижения содержания меди в составе катализатора. Исходный раствор можно приготовить в ddH2O и хранить при −20°C. Избегайте циклов замораживания-оттаивания.

Гидразид биотина, содержащий остаток 6-аминогексановой кислоты в качестве спейсера, для биотинилирования реакционноспособных карбонилов макромолекул. Биотин-Х-гидразид селективно связывается в кислой среде с альдегидами, и кислотными остатками, способными окисляться до альдегидов. Он используется для получения меченых биотином гликопротеинов, гликолипидов, антител, путём связывания карбоксильных групп методом карбодиимидной сшивки. Гидразид биотина можно встретить в исследованиях окислительной модификации белков. Спейсерная группа на основе 6-аминогексановой кислоты снижает стерические затруднения при связывании со стрептавидином и авидинами.