Биореактивы

LumiTracker ER Red (также известен как ER-Tracker™ Red) — проникающий в клетки высокоселективный краситель эндоплазматического ретикулума (ER) для визуализации живых клеток. LumiTracker ER Red представляет собой производное красного флуоресцентного красителя BDP TR, соединенного с глибенкламидом (глибуридом). Глибенкламид связывается с рецепторами сульфонилмочевины (SUR) АТФ-зависимых калиевых каналов (KATP), которые активно представлены в эндоплазматическом ретикулуме. Окрашивание в клетках частично сохраняется после их фиксации формальдегидом. LumiTracker ER Red не подходит для окрашивания клеток после фиксации. Фармакологическая активность глибенкламида потенциально может влиять на функцию эндоплазматического ретикулума. Вариабельная экспрессия рецепторов сульфонилмочевины в некоторых специализированных типах клеток может приводить к появлению неспецифического мечения.

BDP 576/589 — бордипиррометеновый краситель. Это гидрофобный краситель с высоким квантовым выходом, характеризуется долгим временем жизни возбужденного состояния (~ 5 наносекунд). Подходит для измерения времени жизни флуоресценции, определения поляризации флуоресценции, а также двухфотонной лазерной сканирующей микроскопии. Данный реагент представляет собой активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя, который обладает реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп.

dsGold (также известен как Oxazole Gold) является асимметричным цианиновым красителем, используемым для окрашивания дцДНК, оцДНК и РНК в электрофоретических гелях. dsGold демонстрирует более чем 1000-кратное увеличение флуоресценции при связывании с нуклеиновыми кислотами и имеет самый высокий квантовый выход (0,6-0,7) по сравнению с другими красителями, такими как бромистый этидий (EtBr), dsGreen и ssGreen. Комплексы красителя с нуклеиновыми кислотами имеют два максимума возбуждения флуоресценции — при 300 нм и 495 нм, и один максимум излучения при 546 нм. Таким образом, гели, окрашенные с помощью dsGold, могут быть визуализированы с использованием как ультрафиолетовых, так и синих транслиминаторов с соответствующими светофильтрами. Чувствительность dsGold позволяет обнаруживать всего 25 пг ДНК в денатурирующих гелях с мочевиной, глиоксалом и формальдегидом. Краситель способен быстро проникать в толстые и высокопроцентные агарозные гели. Из-за низкой флуоресценции несвязанного красителя, гели с формальдегидом не требуют процедуры удаления красителя. Присутствие dsGold в окрашенных гелях в стандартных рабочих концентрациях не мешает Т4 ДНК-лигазе, Taq-полимеразе, эндонуклеазам рестрикции или нозерн- или Саузерн-блоттингу. Краситель можно легко удалить из нуклеиновых кислот путем осаждения этанолом, оставляя чистые матрицы доступными для последующих манипуляций или анализа. Мы предлагаем dsGold в виде 10 000-кратного концентрата в ДМСО. Для окрашивания геля разведите концентрат в буфере TE, TBE или TAE и инкубируйте гель в 1× окрашивающем растворе в течение 10-40 мин.

Активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир красителя AF 532. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 532 — яркий, фотостабильный, гидрофильный флуорофор, излучающий в желтом канале, альтернатива HEX, JOE и SIMA. Краситель активно используется в микроскопии сверхвысокого разрешения, в частности в методе STORM, в качестве активатора в nSTORM и репортера в dSTORM.

Излучающий в синем спектре кумариновый краситель AF 343 (Кумарин) образует FRET-пару с флуоресцеином. Его производное, реакционноспособное по отношению к аминогруппам (AF 343-NHS), активировано N-гидроксисукцинимидом (NHS). Получившийся NHS-эфир красителя содержит линкер аминогексановой кислоты между флуорофором и NHS-группой. Линкер обеспечивает лучшую растворимость и разносит в пространстве флуорофор и помечаемую им молекулу. Кумарин, активированный NHS, может быть использован для постановки экспериментов с FRET, где акцептором является FAM, а также для создания систем генерации энергии из излучения синего спектра.

Амин-ПЭГ3-карбоновая кислота представляет собой бифункциональное производное полиэтиленгликоля с тремя мономерными звеньями (ПЭГ3), содержащее терминальные карбоксильную и аминогруппы. Благодаря гидрофильности ПЭГ3 спейсера, получаемые конъюгаты обладают большей растворимостью в воде. Терминальная аминогруппа способна взаимодействовать с активированными эфирами, различными карбонильными соединениями (например, альдегидами и кетонами) и карбоновыми кислотами, например, в реакциях восстановительного аминирования. Входящая в состав Амин-ПЭГ3-карбоновой кислоты карбоксильная группа в присутствии активаторов (карбодиимидов или HATU) может реагировать с первичными аминогруппами с образованием стабильной амидной связи.

TET фосфорамидит для синтеза флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов, чистый 6-изомер. TET, тетрахлорфлуоресцеин — производное флуоресцеина с эмиссией в зеленой области спектра (максимум поглощения и эмиссии флуоресценции при 519 нм и 535 нм соответственно). TET фосфорамидит используется для синтеза флуоресцентно-меченых праймеров и гибридизационных зондов для количественной ПЦР. TET можно использовать в паре с тушителем флуоресценции DusQ1 (удобно использовать вместе с носителем DusQ1 CPG 500 с размером пор 500 Å). 5’-меченые праймеры используется в паре с немеченым обратным праймером для амплификации с помощью ПЦР микросателлитов и последующего фрагментного анализа. Продукты амплификации с TET-меткой можно анализировать на различных секвенаторах для проведения капиллярного электрофореза, в том числе на ABI PRISM® 310 Genetic Analyzer.

Реакционноспособный краситель с малеимидной группой для сочетания с тиольными группами белков и других биомолекул, аналог малеимида Cy7®. sulfo-Cyanine7 — это флуорофор ближнего ИК-спектра. Его особенности структуры — сульфогруппы для придания молекуле растоворимости в воде, а также кольцо в гептаметиновой цепи, улучшающее фотофизические свойства. Превосходно подходит для множества применений, включая визуализацию изображений в ближнем ИК.

G-квадруплексы (G4s) представляют собой вторичные структуры, образующиеся в ДНК и РНК за счет неканонических водородных связей между четырьмя гуаниновыми основаниями [1,2]. В ядре ДНК G4s связаны с эпигенетической регуляцией экспрессии генов посредством их взаимодействия с регуляторными белками, такими как транскрипционные факторы и модификаторы хроматина [3,4]. РНК G4s связаны со сплайсингом, транспортом и регуляцией трансляции РНК, а также с РНК-опосредованными стрессовыми реакциями в цитоплазме клетки [5-7]. TOR-G4 — производное тиазолового оранжевого, недавно синтезированный флуоресцентный индикатор G4s [8]. TOR-G4 является низкомолекулярной альтернативой иммунохимии со специфичными к G4 антителами. TOR-G4 позволяет визуализировать G4s на основе изменений продолжительности флуоресценции индикатора при связывании им нуклеиновой кислоты. Продолжительность флуоресценции TOR-G4 самая высокая в присутствии G4s и значительно ниже с другими последовательностями. Внутри клеток TOR-G4 преимущественно колокализуется с РНК в цитоплазме и ядрышках, что делает его первым прижизненным зондом, валидированным для изучения роли РНК G4s в функционировании клеток. TOR-G4 подходит для визуализации РНК G4s с помощью FLIM [8].

BDP 564/570 — липофильный краситель с эмиссией в оранжевой области. Подходит для мечения различных молекул с первичными и вторичными аминогруппами, в том числе, олигонуклеотидов с амино-модификациями.

D,L-Arginine-2,3,3-d3 hydrochloride is a stable isotope-labeled derivative of an amino acid L-arginine. D,L-Arginine-d3 is intended for use as an internal standard for the quantification of L-arginine by Tandem mass spectrometry (MS-MS) combined with UPLC, HPLC or GC.

TAMRA (тетраметилродамин) - это хорошо известный флуорофор с длинной историей использования в мечении биомолекул. TAMRA может применяться как FRET-акцептор для FAM (флуоресцеин). TAMRA амин (TMR амин) это производное с первичной аминогруппой, которую можно вводить в конъюгацию с различными электрофильными агентами, в частности, активированными эфирами, эпоксидами, а также использовать в реакциях восстановительного аминирования, в ферментативном трансаминировании.