Биореактивы

TBTA (трис(бензилтриазолилметил)амин) представляет собой третичный амин с тремя 1,2,3-триазольными группами. Это один из наиболее широко используемых водонерастворимых лигандов для реакций катализируемого медью азид-алкинового циклоприсоединения (CuAAC). TBTA образует комплексы с медью (I) и способствует катализу клик-реакции за счет стабилизации степени окисления меди (I).

TAMRA (известный также как TMR или тетраметилродамин) — ксантеновый краситель, используемый для мечения биомолекул на протяжении уже десятков лет. Ксантеновые красители доступны в виде двух изомеров (обозначаемых как 5- и 6-изомеры). Их фотофизические свойства практически идентичны, но изомеры требуют разделения для того, чтобы избежать «двоения» и размывания пиков меченых продуктов на хроматографии и полос на электрофорезе. Этот продукт — чистый 6-изомер ТАМРА малеимида, предназначенный для мечения белков и пептидов по тиольным (SH) группам.

Neuro-DiO представляет собой зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель с максимумом возбуждения при 497 нм и максимумом эмиссии при 514 нм. Neuro-DiO является аналогом DiO, широко используемого антероградного и ретроградного нейротрейсера и мембранного красителя для живых и фиксированных тканей и клеток. В отличие от DiO, Neuro-DiO обладает лучшей растворимостью в мембранах и менее склонен к образованию нефлуоресцентных агрегатов, снижающих скорость диффузии красителя. Neuro-DiO равномерно метит нейроны посредством диффузии в плазматической мембране. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако, такой перенос может наблюдаться при повреждении мембран, например, после секционирования ткани. Neuro-DiO можно использовать совместно с другими липофильными трейсерами (DiI, DiD, DiR и т. д.) в задачах двухцветного и многоцветного имиджинга.

Фосфорамидит - точка ветвления цепи для олигонуклеотидного синтеза. Позволяет синтезировать разветвленные ДНК-структуры с использованием только стандартного олигонуклеотидного синтезатора.После конденсации этого амидита образуется точка ветвления, и дальше растет одновременно три цепи олигонуклеотида. Так образуется структура, в которой одна из цепей присоединена к точке разветвления своим 5'-концом, а три другие - 3'-концами. Использование 5'-фосфорамидитов позволяет получать конструкции с другими ориентациями цепей. Последовательная конденсация амидита-растроителя на разных стадиях синтеза позволяет получать ДНК-дендримеры. Амидит-растроитель позволяет присоединить несколько модификаций к 5'-концу олигонуклеотида - например, три остатка биотина или три аминолинкера. Амидит не требует особых условий хранения или обращения. Рекомендуем увеличить время конденсации до 5 минут. Деблокирование олигонуклеотида можно проводить в обычных условиях.

AF 430 — стабильный краситель, пик флуоресценции которого находится в желто-зеленой области спектра (542 нм), флуоресценция устойчива в широком диапазоне pH — от 4 до 10. Конъюгаты биомолекул с AF 430 используются в проточной цитометрии, например, в случае многоцветного окрашивания. Также краситель AF 430 применяется при изучении клеток микроскопическими методами из-за его высокой фотостабильности. AF 430, содержащий аминогруппу, обладает хорошей растворимостью в воде, и может быть конъюгирован с электрофилами и участвовать в реакциях ферментативного трансаминирования.

Протеиназа К — неспецифическая протеаза семейства сериновых протеаз, расщепляющая пептидные связи, прилегающие к карбоксильной группе ароматических и алифатических аминокислот. Протеиназа К используется для расщепления белков в биологических образцах, удаления эндогенных нуклеаз при очистке ДНК и РНК, демаскирования антигенов в иммунохимии, а также при подготовке тканей для гибридизации in situ. Протеиназа К активна в широком диапазоне pH (от 6,5 до 9,5), при повышенных температурах, в присутствии хелатирующих агентов металлов и SDS. Рабочая концентрация протеиназы К обычно составляет 50–100 мкг/мл.

LumiMount Plus — готовая к использованию среда на водной основе для заключения и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. LumiMount Plus имеет вязкую консистенцию, благодаря чему среда легко наносится и равномерно распределяется по препарату, а также меньше склонна к образованию пузырей. Благодаря своему особому составу, LumiMount Plus ингибирует быстрое фотовыгорание флуоресцентных белков и красителей, что продлевает возможное время визуализации. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.43, но данный показатель увеличивается до 1.52 после испарения воды и затвердевания среды. LumiMount Plus обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от 2° до 8°C. Поскольку LumiMount Plus растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. LumiMount Plus несовместим с интеркалирующими красителями типа Hoechst, DAPI и др.

LumiTracker Mito Red FM — катионный красный флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. Краситель пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них, поэтому часто используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий. Флуоресценция LumiTracker Mito Red FM исчезает после фиксации альдегидами, поэтому данный краситель подходит только для работы с живыми клетками.

Во время ферроптоза и митохондриальной стадии апоптоза специфический для митохондрий фосфолипид, кардиолипин, подвергается перекисному окислению. MitoCLox является флуоресцентным зондом, позволяющим отслеживать этот процесс в митохондриях in vivo. MitoCLox состоит из флуорофора BDP 581/591, несущего диенсодержащий мотив (C11), связанного с остатком трифенилфосфония (TPP) через длинный гибкий линкер с двумя амидными связями. MitoCLox похож по структуре на MitoPerOx, но в отличие от него имеет более длинный линкер и содержит две (а не одну, как в MitoPerOx) пептидные связи. Гибкий линкер MitoCLox имитирует пептид SS-20 (Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2), что делает данный индикатор специфичным для кардиолипина. Линкер также увеличивает клеточную проницаемость MitoCLox благодаря дополнительным положительным зарядам на нем. Окисление диена в MitoCLox приводит к значительному увеличению флуоресценции BDP 581/591 при 520 нм и снижению его исходной флуоресценции при 590 нм. Таким образом, окисление MitoCLox может быть измерено либо как снижение поглощения при 588 нм, либо как увеличение эмиссии флуоресценции в ратиометрическом режиме при 520/590 нм [1]. MitoCLox накапливается в митохондриях живых клеток. Максимальное его содержание в клетках достигается через 45-60 мин после добавления индикатора в среду. После удаления MitoCLox из среды флуоресценция клеток медленно снижается и достигает 50% от максимума примерно через 1 ч. Рекомендуемая рабочая концентрация MitoCLox составляет 100-200 нМ [2].

AF 594 — водорастворимый красный флуоресцентный краситель с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Краситель не чувствителен к изменению рН в диапазоне от 4 до 10. По спектральным характеристикам AF 594 близок к техасскому красному (макс. поглощение при 586 нм, макс. испускания при 613 нм). AF 594 азид — флуоресцентно меченый азид, реагирующий с алкинильными производными биомолекул (терминальными алкинами и циклооктинами) посредством клик-реакций с образованием стабильных аддуктов. AF 594 азид обычно используется для присоединения красителя к биомолекулам, окрашивания клеток для проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии, а также других приложений.

Линкеры на основе полиэтиленгликоля идеально подходят для конъюгации различных чувствительных биомолекул, таких как белки. Такие линкеры обладают гидрофильностью и обеспечивают пространственное разделение субъединиц конъюгата. Линкер на основе ПЭГ4 имеет длину 14Å (1.4 нм). Гетеробифункциональные линкеры, несущие различные функциональные группы, позволяют селективно получать конъюгаты двух различных молекул путем последовательных реакций конъюгации. Малеимидная функциональная группа особенно полезна для синтеза конъюгатов белков. Малеимид селективно реагирует с тиолами. Как правило, в белках небольшое число остатков цистеина, что позволяет проводить эту реакцию сайт-специфически. После этого алкиновая группа линкера может быть конъюгирована с азидами в реакции CuAAC (медь-катализируемая реакция алкин-азидного циклоприсоединения).

DiO, также называемый DiOC18(3), представляет собой зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель. Максимум возбуждения DiO составляет 487 нм, а максимум эмиссии — 501 нм. DiO широко используется в качестве антероградного и ретроградного нейротрейсера в живых и фиксированных тканях и клетках. DiO равномерно метит нейроны посредством диффузии в плазматической мембране. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако, такой перенос может наблюдаться при повреждения мембран, например, после секционирования ткани. DiO и DiI часто используются вместе в двухцветных исследованиях. При этом DiO имеет более медленную скорость боковой диффузии в мембранах, чем DiI.