Биореактивы

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов для ПЦР по 4мМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15.5 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Химический синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA.) Условия хранения: Хранить при -20°C. Допускается хранение буфера при 4-10°C в течение 3 месяцев. Примечание: Буфер поставляется в концентрации 10Х. В нем присутствует концентрированный BSA, поэтому этот буфер требует бережной разморозки. Мы рекомендуем размораживать SE-буфер B+ (10Х) при комнатной температуре и аккуратно перемешать его перед использованием. В случае нагревания концентрированного буфера до температуры, превышающей 37°C, может образовываться осадок вследствие частичной денатурации BSA.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GAGCGG GAG↑CGG CTCGCC CTC↓GCC Источник: Acinetobacter calcoaceticus BS Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 50% могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTNAGG CC↑TNAGG GGANTCC GGANT↓CC Источник: Bacillus species 21 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 10 25 100 40 Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.4); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной ДНК-лигазой в присутствии 10%ПЭГ и более 90% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Источник: Из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Описание: Урацил-ДНК-гликозилаза катализирует высвобождение свободного урацила из урацил-содержащих ДНК. UDG эффективно гидролизует урацил из одно- и двуцепочечных ДНК, но не из олигомеров (6 или менее оснований) Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для высвобождения 60 пмолей урацила за 1 мин из двуцепочечной урацил-содержащей ДНК при 37°С. Активность измеряется по высвобождению меченого[3Н]–урацила в 50 мкл рекционной смеси, содержащей 0,2 мкг ДНК (8.7 х 104cpm/μg) за 30 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Урацил ДНК гликозилаза Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 1 mM EDTA; 1mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGGCCT AGG↑CCT TCCGGA TCC↓GGA Источник: Planococcus citreus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 50 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 50°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo (E105T и E106T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: При температуре 37°С активность 50% от максимальной.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCGCGCC GG↑CGCGCC CCGCGCGG CCGCGC↓GG Источник: Из штамма E. coli, несущего клонированный ген PalA I из Pseudomanas alcaligenes BS17Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 10 -10 -10 100 40 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг λ-ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов для ПЦР по 10мМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15.5 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Химический синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGGCCC GGGCC↑C CCCGGG C↓CCGGG Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген ApaI из Acetobacter pasteurianus. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда/BamHI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда/BamHI Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): GGGCCCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E019T и E020T) Для фасовок Turbo (E019T и E020T) прикладывается буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CACNNNNGTG CACNN↓NNGTG GTGNNNNCAC GTGNN↓NNCAC Источник: Aureobacterium liquefaciens Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y при 37 С за 1 час. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10-25 10-25 0-10 10-25 100 50-75 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 100 мкг/мл BSA, 1 mM DTT, 50% глицерин; Хранить при 20°С Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и более 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед. фермента в течение 16 часов при 37 С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании CG-метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGTACT AGT↑ACT TCATGA TCA↓TGA Источник: Zoogloea ramigera SCA Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mМ Tris-HCl (pH 7.6 при 25°С); 1 mM MgCl2.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.