Биореактивы

Сайт узнавания: G(5mC)GC Источник: из штамма E.coli, содержащего клонированный ген ДНК метилтрансферазы HspAI из Haemophilus species A1. Описание: Модифицирует внутренний остаток цитозина (C5) в последовательности узнавания 5’-GCGC- 3’. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимают количество фермента, необходимое для защиты 1 мкг ДНК фага Лямбда за 1 час при 37ºC в 20 мкл реакционной смеси от гидролиза эндонуклеазой рестрикции HspAI. Реакционный буфер: SE-буфер B + SAM Условия хранения: 10 mМ Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mМ EDTA, 10 mМ 2-меркаптоэтанол, 100 mМ NaCl и 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 80 μM.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACATGT A↑CATGT TGTACA TGTAC↓A Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Pci I из Planococcus citreus SE-F45 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 100 75 50 50 \Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Не блокируется метилированием ACmATGT. Блокируется метилированием mACATGT. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGATCGC GCGAT↑CGC CGCTAGCG CGC↓TAGCG Источник: Rhizoblum galegae Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК Аденовируса-2 за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК Аденовируса-2 Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl;0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов Ad2 ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Не блокируется dam-метилированием при перекрывании (GmATC): GCGATCGC Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ATTTAAAT ATTT↑AAAT TAAATTTA TAAA↓TTTA Источник: Streptococcus milleri S Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 (SspI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 (SspI-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 100 75 25 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента > 95% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10 % ПЭГ Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер O+. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(20 mM Tris-HCl (pH 8,8 при 25°C), 10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 2 mM MgSO4, 0.1% Triton X-100.) 50 x BSA прилагается. Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCCGGG CCC↑GGG GGGCCC GGG↓CCC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sma I из Serratia marcescens Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 25°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10% ПЭГ и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 25°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo (E177T и E178T) прикладывается буфер 10x SE-Буфер Y. Turbo Sma I можно использовать как для быстрого гидролиза ДНК (в течение 15 мин), так и в стандартной реакции гидролиза в течение 1 ч. Применение Turbo эндонуклеаз рестрикции: – быстрый гидролиз (анализ) ДНК – быстрое приготовление векторов для клонирования – гидролиз ДНК двумя разными ферментами Свойства Turbo фермента: С помощью 1 мкл эндонуклеазы рестрикции Turbo Sma I можно расщепить до 1 мкг двуцепочечной ДНКв 1x SE-Буфере Y в течение 15 мин (см. протокол ниже). Препарат ДНК, используемый в реакции быстрого гидролиза Turbo ферментом, должен быть высокой степени очистки. Данный Turbo фермент можно применять и в стандартной реакции гидролиза ДНК (в течение 1-16 ч). Стандартный протокол Turbo реакции: На 20 мкл реакционной смеси: Y (x10) – 2 мкл ДНК – 0,2-1 мкг Дист. вода – до 20 мкл + 1мкл препарата Turbo Sma I эндонуклеазы рестрикции. Инкубировать при 25°C в течение 15 мин.

Применение: Набор рассчитан на проведение 100 реакций в амплификаторах с нагреваемой крышкой. Состав: Taq ДНК-полимераза (1 е.а./мкл) – 110 мкл Смесь dNTP (0,5 mM каждого) – 600 мкл Буфер для реакции «SE-буфер AS» (10Х: 670 mM Tris-HCl (pH 8.8 при 25°C); 166 mM (NH4)2SO4; 0.1% Tween-20) – 1 мл Раствор MgCl2 (50 mM) – 500 мкл Стерильная вода – 5 мл Условия хранения: хранить при -20°C

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду. Описание: TaqSE ДНК полимераза является сложной смесью термостабильных ДНК-полимераз. Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК. Препарат TaqSE ДНК полимеразы обеспечивает более высокую точность копирования ДНК, уменьшает количество побочных продуктов. Может образовывать продукты с тупыми концами благодаря наличию 3`->5` экзонуклеазной активности. Выход продукта может быть выше по сравнению с Taq ДНК полимеразой. Определение единицы активности: За одну единицу активности TaqSE ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С. Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Taq Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С Примечание: Не для рутинного использования, для специального применения! Протокол для проведения ПЦР с TaqSE ДНК полимеразой отличается от протокола проведения ПЦР с Taq ДНК полимеразой. TaqSE ДНК полимераза при использовании ферментативно синтезированных трифосфатов (Смесь dNTP(ферм.) для ПЦР 2.5mM каждого, кат.номер N026) тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов.

Применение: Набор рассчитан на проведение 100 реакций в амплификаторах с нагреваемой крышкой и позволяет получать фрагменты ДНК длиной до 4000 и более пар оснований Состав: Taq ДНК-полимераза (1 е.а./мкл) – 110 мкл Смесь dNTP (0,5 mM каждого) – 600 мкл Буфер для реакции «SE-буфер ДНК полимераза Taq» (10Х: 600 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 15 mM MgCl2; 250 mM KCl; 100 mM 2-меркаптоэтанол; 1% Тритон X-100) – 1 мл Стерильная вода – 5 мл Условия хранения: хранить при -20°C.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CGATCG CGAT↑CG GCTAGC GC↓TAGC Источник: Pseudomonas lemoignei 19 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК Ad2 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг лямбда ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Не блокируется dam-метилированием при перекрывании (GmATC): CGATCGС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTMKAC GT↑MKAC CAKMTG CAKM↓TG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Fbl I из Flavobacterium balustinum Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GAATGCN GAATGCN↑ CTTACGN CTTAC↓GN Источник: Planococcus citreus SM Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 100 75 10 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента >90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O.