Биореактивы

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду. Описание: РНК зависимая ДНК полимераза. Катализирует матричный синтез ДНК используя в качестве матрицы РНК или одноцепочечную ДНК. Необходим праймер. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для включения 1 нмоля dТTP в кислотонерастворимую фракцию, образуемую на матрице поли (rA) с олиго (dT)-праймера за 10 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Обратная транскриптаза M-MuLV Условия хранения: 10 mM Калия фосфат (pH 7.5); 0,1 mM EDTA; 200 mM NaCl; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Высокая концентрация фермента может привести к ингибированию ОТ-ПЦР. В этом случае следует разбавить препарат фермента в 5, 10 или 20 раз буфером для разбавления M-MuLV ревертазы (прилагается).

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. Допускается хранение буфера при 4-10°C в течение 3 месяцев. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер

sulfo-Cyanine5 диметил — нефункционализированный водорастворимый цианиновый краситель с яркой дальнекрасной флуоресценцией. Краситель можно использовать в качестве нереактивного флуорофора для контрольных экспериментов, калибровки и других технических применений.

ДМФ (диметилформамид, ДМФА) - рекомендуемый растворитель для реакций мечения с использованием активированных эфиров. При хранении на воздухе ДМФ медленно портится по причине образования в нем диметиламина и поглощения воды из воздуха (этот растворитель гигроскопичен). Влага и в особенности диметиламин плохо сказываются на эффективности мечения - в растворителе низкого качества реакция может не пройти. Сушка и подготовка диметилформамида требует специального оборудования, которое не всегда доступно в биологических лабораториях. Мы предлагаем пользоваться для реакций мечения высококачественным сухим растворителем, упакованным в небольшие пробирки в инертной атмосфере.

Алкиновое производное биотина для конъюгации посредством клик-реакции. Это алкиновое производное реагирует с различными азидами при катализе соединениями Cu(I). Биотинилированные конъюгаты могут использоваться в различных методах, включающих аффинное связывание со стрептавидином.

Стрептавидин представляет собой тетрамерный биотин-связывающий белок, выделенный из бактерии Streptomyces avidinii. Стрептавидин способен с высокой аффинностью и селективностью связывать до четырех молекул биотина посредством множественных водородных связей и ван-дер-ваальсовых взаимодействий. Из-за отсутствия углеводных модификаций и близкого к нейтральному pI, стрептавидин демонстрирует меньшее неспецифическое связывание, в сравнении с другим биотин-связывающим белком — авидином. Стрептавидин обладает высокой термостабильностью и устойчивостью к экстремальным значениям pH, денатурирующим агентам и ферментативной деградации, что позволяет использовать его в широком спектре экспериментальных условий. Флуоресцентные конъюгаты стрептавидина обычно используют в качестве реагента второй ступени для специфического обнаружения различных биотин-меченых биомолекул, таких как белки (антитела и др.), нуклеиновые кислоты, липиды в протоколах непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания, вестерн-блоттинге, проточной цитометрии, микропланшетном анализе и других методах детекции. Данный стрептавидин представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 594 — ярким, фотостабильным красным флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с Texas Red (максимум поглощения — 586 нм, максимум эмиссии — 613 нм). Рекомендуемый диапазон концентраций для использования составляет 0,5-10 мкг/мл. Избегайте использования растворов, содержащих биотин (некоторые сыворотки, RPMI 1640 и т. д.) в качестве разбавителей.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACNGT ACN↑GT TGNCA TG↓NCA Источник: Bacillus stearothermophilus 4C Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента ~50% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y

H2DCFDA (2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетат) — широко используемый реагент для изучения продукции активных форм кислорода в живых клетках. H2DCFDA представляет собой нефлуоресцирующее производное флуоресцеина — его восстановленную ацетилированную форму. Реагент начинает флуоресцировать только после отщепления ацетильных групп и окисления внутри клетки, превращаясь в 2′,7′-дихлорофлуоресцеин. Он характеризуется яркой флуоресценцией в зеленой области спектра (максимум поглощения при 511 нм, максимум флуоресценции при 533 нм). Данный реагент подходит для исследования живых клеток и не совместим с фиксацией образцов. Ацетильные группы в структуре H2DCFDA повышают его липофильность и улучшают проникающую способность реагента через клеточную мембрану. Попадая внутрь клетки, он деацетилируется клеточными эстеразами, из-за чего приобретает заряд и лучше удерживается внутри клетки. Окисление активными формами кислорода приводит к образованию флуоресцирующего продукта — 2′,7′-дихлорофлуоресцеина и может быть детектировано различными способами, например с помощью проточного цитометра, планшетного ридера или флуоресцентного микроскопа.

Сайт узнавания: G(5mC)NGC Источник: из штамма E.coli, содержащего клонированный ген ДНК метилтрансферазы Fsp4H из Flavobacterium species 4H. Описание: Модифицирует внутренний остаток цитозина (C5) в последовательности узнавания 5’-GCNGC- 3’. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимают количество фермента, необходимое для защиты 1 мкг λ DNA в течение 1 ч при 30ºC в 20 мкл реакционной смеси от гидролиза эндонуклеазой рестрикции Fsp4HI. Реакционный буфер: SE-буфер B + SAM Условия хранения: 10 mМ Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mМ EDTA, 10 mМ 2-меркаптоэтанол, 100 mМ NaCl и 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 80 μM.

SIMA (дихлородифенилфлуоресцеин) представляет собой ксантеновый краситель со спектральными свойствами, подобными HEX, но с более высоким квантовым выходом. SIMA азид используется для получения флуоресцентно-меченых праймеров и гибридизационных зондов для количественной ПЦР. Коньюгированные с SIMA олигонуклеотиды могут быть получены с помощью реакции азид-алкинового циклоприсоединения между SIMA азидом и олигонуклеотидами, содержащими алкиновый фрагмент.