Биореактивы

Описание: X-Gal используется совместно с IPTG для определения lac-фенотипа при отборе белых/синих колоний E.coli. X-Gal представляет собой инертный хромогенный субстрат для β-галактозидазы – фермента, расщепляющего лактозу. β-галактозидаза гидролизует X-Gal с образованием бесцветной галактозы и 4-хлор-3-бром-индиго, который имеет синюю окраску. Индукция гена lacZ путем добавления IPTG приводит к расщеплению X-Gal и появлению синих колоний E.coli. В случае нарушения структуры гена lacZ за счет встройки генетического материала (или делеции) цвет колоний будет белым. Стоковый раствор X-Gal следует готовить в необходимом количестве непосредственно перед его добавлением в расплавленный LB-агар при его температуре 50-55 o C. В качестве растворителя для X-Gal используется диметилсульфоксид (DMSO). Рекомендуется приготовить стоковый раствор X-Gal в DMSO с концентрацией 40-100 мг/мл. Конечная концентрация X-Gal в среде LB может быть 40-100 мкг/мл (для получения белых/синих колоний E.coli). Вариант применения: На 100 мл расплавленного LB-агара (50-55 o C) взять: 100 мкл стокового раствора X-Gal (10 мг сухого X-Gal растворить в 100 мкл DMSO в отдельной стерильной микропробирке); 40 мкл 0,5 М водного раствора IPTG; необходимое количество антибиотика (например, ампициллина до 50 мкг/мл). Все тщательно перемешать, разлить по чашкам Петри. Подсушить в стерильном боксе под УФ в течение 20-30 мин.

Во время ферроптоза и митохондриальной стадии апоптоза специфический для митохондрий фосфолипид, кардиолипин, подвергается перекисному окислению. MitoCLox является флуоресцентным зондом, позволяющим отслеживать этот процесс в митохондриях in vivo. MitoCLox состоит из флуорофора BDP 581/591, несущего диенсодержащий мотив (C11), связанного с остатком трифенилфосфония (TPP) через длинный гибкий линкер с двумя амидными связями. MitoCLox похож по структуре на MitoPerOx, но в отличие от него имеет более длинный линкер и содержит две (а не одну, как в MitoPerOx) пептидные связи. Гибкий линкер MitoCLox имитирует пептид SS-20 (Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2), что делает данный индикатор специфичным для кардиолипина. Линкер также увеличивает клеточную проницаемость MitoCLox благодаря дополнительным положительным зарядам на нем. Окисление диена в MitoCLox приводит к значительному увеличению флуоресценции BDP 581/591 при 520 нм и снижению его исходной флуоресценции при 590 нм. Таким образом, окисление MitoCLox может быть измерено либо как снижение поглощения при 588 нм, либо как увеличение эмиссии флуоресценции в ратиометрическом режиме при 520/590 нм [1]. MitoCLox накапливается в митохондриях живых клеток. Максимальное его содержание в клетках достигается через 45-60 мин после добавления индикатора в среду. После удаления MitoCLox из среды флуоресценция клеток медленно снижается и достигает 50% от максимума примерно через 1 ч. Рекомендуемая рабочая концентрация MitoCLox составляет 100-200 нМ [2].

LumiTracker ER Red (также известен как ER-Tracker™ Red) — проникающий в клетки высокоселективный краситель эндоплазматического ретикулума (ER) для визуализации живых клеток. LumiTracker ER Red представляет собой производное красного флуоресцентного красителя BDP TR, соединенного с глибенкламидом (глибуридом). Глибенкламид связывается с рецепторами сульфонилмочевины (SUR) АТФ-зависимых калиевых каналов (KATP), которые активно представлены в эндоплазматическом ретикулуме. Окрашивание в клетках частично сохраняется после их фиксации формальдегидом. LumiTracker ER Red не подходит для окрашивания клеток после фиксации. Фармакологическая активность глибенкламида потенциально может влиять на функцию эндоплазматического ретикулума. Вариабельная экспрессия рецепторов сульфонилмочевины в некоторых специализированных типах клеток может приводить к появлению неспецифического мечения.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CGGWCCG CG↑GWCCG GCCWGGC GCCWG↓GC Источник: Rhodobacter sphaeroides I2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 10 100 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК cшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Антитела овцы к иммуноглобулинам человека идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgG человека 100 % IgA человека 90 % IgM человека 85 %.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 5 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCTAGA T↑CTAGA AGATCT AGATC↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген XbaI из Xanthomonas badrii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-/ HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-/HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 100 50 75 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): TCTAGATC. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E141m, E141T и E142T). Для фасовок Turbo (E141T и E142T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

HS Taq ДНК-полимераза предназначена для рутинных аналитических исследований. Фермент получен из штамма E.coli, экспрессирующего ген polA термостабильной бактерии Thermus aquaticus YT1. HS Taq ДНК-полимераза представляет собой смесь рекомбинантного фермента Таq ДНК-полимеразы и специфических моноклональных антител к полимеразе. HS Taq ДНК-полимераза неактивна в условиях приготовления реакционной смеси. Активация фермента происходит в течение первой денатурации. При температуре более 70 °C комплекс ДНК-полимеразы с антителом диссоциирует. Наличие "горячего старта" существенно повышает чувствительность и специфичность реакции. Область применения • Амплификация ДНК. • ПЦР-РВ с TaqMan-зондами. • ПЦР-РВ с интеркалирующими красителями. • ПЦР-скрининг • Мультиплексная ПЦР.

HS Taq ДНК-полимераза предназначена для рутинных аналитических исследований. Фермент получен из штамма E.coli, экспрессирующего ген polA термостабильной бактерии Thermus aquaticus YT1. HS Taq ДНК-полимераза представляет собой смесь рекомбинантного фермента Таq ДНК-полимеразы и специфических моноклональных антител к полимеразе. HS Taq ДНК-полимераза неактивна в условиях приготовления реакционной смеси. Активация фермента происходит в течение первой денатурации. При температуре более 70 °C комплекс ДНК-полимеразы с антителом диссоциирует. Наличие "горячего старта" существенно повышает чувствительность и специфичность реакции. Область применения • Амплификация ДНК. • ПЦР-РВ с TaqMan-зондами. • ПЦР-РВ с интеркалирующими красителями. • ПЦР-скрининг • Мультиплексная ПЦР.

Стрептавидин представляет собой тетрамерный биотин-связывающий белок, выделенный из бактерии Streptomyces avidinii. Стрептавидин способен с высокой аффинностью и селективностью связывать до четырех молекул биотина посредством множественных водородных связей и ван-дер-ваальсовых взаимодействий. Из-за отсутствия углеводных модификаций и близкого к нейтральному pI, стрептавидин демонстрирует меньшее неспецифическое связывание, в сравнении с другим биотин-связывающим белком — авидином. Стрептавидин обладает высокой термостабильностью и устойчивостью к экстремальным значениям pH, денатурирующим агентам и ферментативной деградации, что позволяет использовать его в широком спектре экспериментальных условий. Флуоресцентные конъюгаты стрептавидина обычно используют в качестве реагента второй ступени для специфического обнаружения различных биотин-меченых биомолекул, таких как белки (антитела и др.), нуклеиновые кислоты, липиды в протоколах непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания, вестерн-блоттинге, проточной цитометрии, микропланшетном анализе и других методах детекции. Данный стрептавидин представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 594 — ярким, фотостабильным красным флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с Texas Red (максимум поглощения — 586 нм, максимум эмиссии — 613 нм). Рекомендуемый диапазон концентраций для использования составляет 0,5-10 мкг/мл. Избегайте использования растворов, содержащих биотин (некоторые сыворотки, RPMI 1640 и т. д.) в качестве разбавителей.