Набор реактивов ОТ-M-MuLV-RH с праймерами

Набор реактивов ОТ M-MuLV–RH представляет собой полную систему для эффективного синтеза первой цепи кДНК с мРНК или суммарной РНК матриц. Набор содержит все необходимые компоненты для проведения обратной транскрипции: M-MuLV –RH ревертазу, два варианта 5× ОТ-буфера, смесь dNTP, раствор ДТТ, растворы олиго(dT)16 праймера и случайного гексапраймера, а также свободную от РНКаз воду.

M-MuLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от M-MuLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. M-MuLV –RH проявляет оптимальную активность при 42 °С (активна до 50 °С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 7 т.о. и включать модифицированные основания.

Набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH4)2SO4, оптимизированные для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК.

Олиго(dT)16 праймер и случайный гексапраймер позволяют более нацелено подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в суммарной РНК. Олиго(dT)16 праймер селективно отжигается на 3’-поли(А) концах РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК содержащих поли(А) конец. Также может быть использован генспецифичный праймер для синтеза определённой последовательности.