Общий белок-ВИТАЛ

Описание: IPTG является высоко стабильным синтетическим аналогом лактозы. Он инактивирует lac-репрессор и запускает синтез β-галактозидазы – фермента, расщепляющего лактозу. IPTG используется для индукции экспрессии клонированных генов, находящихся под контролем lac-промотора. Он так же применяется совместно с X-Gal для определения lac-фенотипа при отборе белых/синих колоний E.coli. При использовании рекомендуется приготовить стоковый раствор IPTG в воде (0,5 М или 1 М). Конечная концентрация IPTG в среде LB может быть 0,1-0,2 мМ (для получения белых/синих колоний E.coli) или 0,3-1 мМ при индукции экспрессии клонированных генов (время индукции, как правило, 2-5 часов, иногда до 16 часов). Стоковый раствор можно хранить при +4-8 o C в течение 1 месяца или при -20 o C в течение 1 года (при размораживании раствор встряхнуть для перемешивания). Стоковый раствор IPTG добавлять в расплавленный LB-агар при его температуре 50-55 o C. Формула: C9H18O5S Молекулярный вес: 238,31 Температура плавления: 121-124°С Внешний вид: белый или слегка желтоватый порошок. Хроматографическая однородность: наличие одного пятна C RF =0.66-0.76. Чистота: 99.5%, для биохимии. ТСХ на силикагеле DC-ALUFOLIEN KIESELGEL 60Fв системе: н-бутанол/уксусная кислота/вода – 5/2/3. Условия хранения: при -20°С, в сухом темном месте. Перед вскрытием фасовку нагреть при комнатной температуре.

Описание: X-Gal используется совместно с IPTG для определения lac-фенотипа при отборе белых/синих колоний E.coli. X-Gal представляет собой инертный хромогенный субстрат для β-галактозидазы – фермента, расщепляющего лактозу. β-галактозидаза гидролизует X-Gal с образованием бесцветной галактозы и 4-хлор-3-бром-индиго, который имеет синюю окраску. Индукция гена lacZ путем добавления IPTG приводит к расщеплению X-Gal и появлению синих колоний E.coli. В случае нарушения структуры гена lacZ за счет встройки генетического материала (или делеции) цвет колоний будет белым. Стоковый раствор X-Gal следует готовить в необходимом количестве непосредственно перед его добавлением в расплавленный LB-агар при его температуре 50-55 o C. В качестве растворителя для X-Gal используется диметилсульфоксид (DMSO). Рекомендуется приготовить стоковый раствор X-Gal в DMSO с концентрацией 40-100 мг/мл. Конечная концентрация X-Gal в среде LB может быть 40-100 мкг/мл (для получения белых/синих колоний E.coli). Вариант применения: На 100 мл расплавленного LB-агара (50-55 o C) взять: 100 мкл стокового раствора X-Gal (10 мг сухого X-Gal растворить в 100 мкл DMSO в отдельной стерильной микропробирке); 40 мкл 0,5 М водного раствора IPTG; необходимое количество антибиотика (например, ампициллина до 50 мкг/мл). Все тщательно перемешать, разлить по чашкам Петри. Подсушить в стерильном боксе под УФ в течение 20-30 мин.

Использование в клинике: Ревматоидный фактор (РФ) представляет собой аутоантитела к собственным иммуноглобулинам класса G человека. Присутствие высоких концентраций РФ в сыворотке крови характерно для больных аутоиммунными заболеваниями, в том числе болезнью Лима, остеоартритом, моно- и полиартритом, ревматоидным артритом и др. Определение уровня РФ необходимо для повышения надежности диагностики ревматоидных заболеваний. Нормой для здорового донора является уровень РФ не более 25 МЕ/мл. Принцип метода: Метод основан на иммунологической реакции между иммобилизоваными на поверхности частиц латекса иммуноглобулинами класса G человека и ревматоидным фактором, присутствующим в образце. Образующийся в зоне эквивалентности иммунный комплекс вызывает видимую агглютинацию частиц латекса. Уровень РФ выше, чем 20 МЕ/мл выявляется появлением агглютинации латексных частиц в течение 2 минут. Для предотвращения ложно-положительной реакции для разведения проб используется входящий в состав набора буфер для разведения.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH800 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH800. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH800 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH800 испускает свет в ближней инфракрасной области спектра, с максимумом флуоресценции 797 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях, а также в задачах, требующих низкой фоновой флуоресценции образца. PKH800 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение нескольких дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.