Краситель QuDye для определения количества белка / QuDye Protein Quantification Reagent, 200×

Набор для двумерного разностного электрофореза 3Dye предназначен для точного сравнения экспрессии белков в двух или трех образцах лизатов. Благодаря отличному совпадению подвижности меченых белков на гель-электрофорезе и яркой флуоресценции красителей набор обеспечивают высокую эффективность детекции минорных белков и высокое разрешение. Гель 2D DIGE, содержащий белки, меченые Cyanine2, Cyanine3, и Cyanine5 Набор совместим со всеми сканерами, поддерживающими детекцию красителей Cy2®, Cy3® и Cy5®. После проведения сканирования гели могут быть также исследованы масс-спектрометрически. Каждый набор содержит реакционноспособные красители Cyanine2, Cyanine3 и Cyanine5, а также диметилформамид. Cyanine2 может быть использован в качестве внутреннего стандарта для мечения смеси образцов. Реакционноспособные красители поставляются в лиофилизированном виде, что позволяет увеличить срок хранения набора. Каждая пробирка с красителем содержит одинаковое количество реагента (различие в количестве в пределах 10%). Разбавление красителя диметилформамидом из набора перед использованием гарантирует одинаковую эффективность мечения каждым из красителей на протяжении всего срока использования продукта.

Набор ProteOrange на основе флуоресцентного красителя позволяет измерять концентрацию белка с большей чувствительностью по сравнению со спектрофотометрическим и другими классическими методами количественного анализа белков (Lowry, Bradford, BCA). Краситель ProteOrange, главный компонент данного набора, в свободном виде не обладает выраженной флуоресценцией. В растворе краситель формирует комплексы с молекулами белка, при образовании которых он начинает флуоресцировать. Максимум возбуждения красителя ProteOrange в комплексе с белком находится при ~485 нм, максимум испускания флуоресценции при ~590 нм. Набор можно использовать на любом типе флуориметра с соответствующим источником возбуждения и каналом детекции. В общем случае, рабочий диапазон измеряемых концентраций белка ограничивается чувствительностью прибора. При использовании кюветного флуориметра рекомендуемый измеряемый диапазон концентрации белка от 10 нг/мл до 10 мкг/мл, для планшетного флуориметра — от 100 нг/мл до 10 мкг/мл. В состав набора входит флуоресцентный краситель ProteOrange, буфер для приготовления рабочего раствора красителя и стандарт концентрации белка (БСА, 2 мг/мл). Для измерения концентрации исследуемого белка необходимо приготовить рабочий раствор красителя и развести в нем экспериментальные образцы и образцы с известной концентрацией белка для построения калибровочной кривой. Для приготовления стандартов концентрации белка используется или бычий сывороточный альбумин, входящий в состав набора, или (при наличии) белок, который находится в экспериментальных образцах. Готовые образцы инкубируют 10 минут при 95 °С для денатурации белков, и после остывания до комнатной температуры проводится измерение интенсивности флуоресценции. В зависимости от объема образца количество измерений варьирует от 200 (для объем образца 2,5 мл и объема для измерения 2 мл для стандартной флуориметрической кюветы) до 2000 (для объема образца 250 мкл и объема для измерения 200 мкл для 96-луночного планшета).

ProteOrange — чувствительный к белкам флуоресцентный краситель, который практически не флуоресцирует в свободной форме, но начинает светиться при связывании с белками. Максимум возбуждения ProteOrange в комплексе с белком находится при ~485 нм, максимум эмиссии — при ~590 нм. Уникальная структура реагента ProteOrange позволяет точно обнаруживать белки в растворах с концентрацией от 10 нг/мл до 10 мкг/мл. Этот уровень чувствительности значительно лучше, чем тот, который достигается с помощью метода BCA, анализа Брэдфорда, анализа Лоури или измерений поглощения при 280 нм. Краситель демонстрирует минимальную вариабельность для разных белков. Краситель ProteOrange имеет низкую толерантность к неионным детергентам, поэтому его использование не рекомендуется для клеточных лизатов, содержащих Тритон Х-100 и дезоксихолат натрия, однако допускается содержание до 0,01% SDS (в конечной концентрации). Данный реагент представляет собой 500-кратный концентрат красителя ProteOrange. Данный продукт входит в состав готового Набора ProteOrange для определения количества белка.

Белок А: сефароза предназначен для аффинной очистки иммуноглобулинов класса IgG, Fc-фрагментов, поликлональных и моноклональных антител млекопитающих; для удаления иммуноглобулинов класса IgG из биологических жидкостей; для количественной оценки содержания поли- и моноклональных антител в иммунных сыворотках, асцитных и культуральных жидкостях.

Белок G: сефароза предназначен для аффинной очистки иммуноглобулинов и их фрагментов; для удаления иммуноглобулинов из биологических жидкостей; для количественной оценки содержания иммуноглобулинов в иммунных сыворотках, асцитных и культуральных жидкостях.

Система из 2 реагентов на основе бицинхониновой кислоты (БХК) и кристаллогидрата сульфата меди, которая используется для количественного колориметрического определения количества белка в образце.

Набор содержит концентрированный раствор флуоресцентного красителя, буфер для разведения и стандарты концентрации белка (0, 200, 400 нг/мкл). При смешивании с образцом, краситель селективно связывается с белком, обеспечивая точное измерение концентрации исследуемого образца. Набор QuDye Protein оптимизирован для измерения концентрации белка в диапазоне от 12,5 мкг/мл до 5 мг/мл для исходного образца (диапазон количества белка для измерения на флуориметре: 0,25–5 мкг белка в 200 мкл образца для измерения). Анализ выполняется при комнатной температуре и уровень флуоресценции остается стабильным в течение 3 часов. На измерение концентрации не оказывают влияния примеси (отдельные нуклеотиды и аминокислоты, восстанавливающие агенты, соли, ДНК), кроме детергентов.