sulfo-Cyanine5.5 dUTP

В основе протокола лежит модифицированный метод щелочного лизиса бактериальной культуры без предварительного осаждения бактерий с последующим селективным связыванием ДНК из осветленного лизата на силиконизированной мембране колонки. Технология позволяет ускорить процесс выделения за счет быстрого лизиса напрямую из биомассы с обработкой РНКазой А лизата и дальнейшего центрифугирования. Преимущества набора: Выход до 10 мкг из 0,6 мл бактериальной культуры Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,1 Проверено, что плазмидная ДНК пригодна для реакции рестрикции, трансформации, секвенирования, ПЦР

Genta TaqF ДНК-полимераза — химически модифицированный рекомбинантный аналог ДНК-полимеразы из термофильной бактерии Thermus aquaticus. Фермент обладает 5’-3’ полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью, но не имеет 3’-5’ корректирующую экзонуклеазную активность. Рекомбинантный фермент Genta TaqF ДНК-полимераза подходит для использования в рутинных ПЦР, включая ПЦР в режиме реального времени. Genta TaqF ДНК-полимераза инактивирована с помощью химической модификации, что позволяет проводить приготовление реакционной смеси при комнатной температуре. Наличие «горячего старта» повышает специфичность и чувствительность амплификации. Активация полимеразы происходит при её прогревании до 95°C в течение 15 минут.

Genta-RT kit представляет собой набор реагентов для проведения синтеза первой цепи кДНК на матрице РНК. Набор включает в себя: in silico модифицированный гомолог обратной транскриптазы вируса лейкемии мышей Молони (MMLV) – Genta REV M ревертазу; Олиго(dT)18 праймер; воду для ПЦР и 2 вида 5-кратного реакционного буфера (включающего в себя дНТФ и ДТТ): 5х ОТ-буфер R – наличие Random-праймеров в реакционном буфере позволяет проводить синтез тотальной кДНК. 5х ОТ-буфер – требуется добавление специфических праймеров для синтеза целевого фрагмента кДНК; или добавление Олиго(dT)18 праймера для полиаденилированной РНК.

Набор предназначен для выделения плазмидной ДНК из бактерий. Принцип работы набора основан на щелочном лизисе обработанного РНКазой биоматериала с последующим селективным связыванием ДНК из осветленного лизата на силиконизированной мембране колонки. Окрашенные растворы в наборе позволяют контролировать правильный порядок добавления компонентов, полноту лизиса и нейтрализации. Преимущества набора: • Выход до до 25 мкг из 2 мл бактериальной культуры и до 60* мкг из 6-10 мл бактериальной культуры • Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,1 • Проверено, что плазмидная ДНК пригодна для реакции рестрикции, трансформации, секвенирования, ПЦР, трансфекции. *выход продукта зависит от копийности плазмиды, объема культуры и условий культивирования

dsGold (также известен как Oxazole Gold) является асимметричным цианиновым красителем, используемым для окрашивания дцДНК, оцДНК и РНК в электрофоретических гелях. dsGold демонстрирует более чем 1000-кратное увеличение флуоресценции при связывании с нуклеиновыми кислотами и имеет самый высокий квантовый выход (0,6-0,7) по сравнению с другими красителями, такими как бромистый этидий (EtBr), dsGreen и ssGreen. Комплексы красителя с нуклеиновыми кислотами имеют два максимума возбуждения флуоресценции — при 300 нм и 495 нм, и один максимум излучения при 546 нм. Таким образом, гели, окрашенные с помощью dsGold, могут быть визуализированы с использованием как ультрафиолетовых, так и синих транслиминаторов с соответствующими светофильтрами. Чувствительность dsGold позволяет обнаруживать всего 25 пг ДНК в денатурирующих гелях с мочевиной, глиоксалом и формальдегидом. Краситель способен быстро проникать в толстые и высокопроцентные агарозные гели. Из-за низкой флуоресценции несвязанного красителя, гели с формальдегидом не требуют процедуры удаления красителя. Присутствие dsGold в окрашенных гелях в стандартных рабочих концентрациях не мешает Т4 ДНК-лигазе, Taq-полимеразе, эндонуклеазам рестрикции или нозерн- или Саузерн-блоттингу. Краситель можно легко удалить из нуклеиновых кислот путем осаждения этанолом, оставляя чистые матрицы доступными для последующих манипуляций или анализа. Мы предлагаем dsGold в виде 10 000-кратного концентрата в ДМСО. Для окрашивания геля разведите концентрат в буфере TE, TBE или TAE и инкубируйте гель в 1× окрашивающем растворе в течение 10-40 мин.

6-Флуоресцеиновое (FAM) производное дезоксицитидинтрифосфата (dCTP). 6-изомер FAM — широко используемый для мечения биомолекул флуорофор, обладающий высоким квантовым выходом и яркой эмиссией в зеленой области спектра. FAM-11-dCTP может применяться для ферментативного мечения ДНК посредством Nick-трансляции, 3’-концевого мечения, в методе случайных праймеров, в процессе ПЦР или синтеза кДНК. FAM-11-dCTP встраивается в растущую цепь ДНК Taq-полизмеразой, ДНК-полимеразой I, Phi 29 полимеразой, фрагментом Кленова, обратной транскриптазой или терминальной трансферазой. Длина линкера из 11 атомов углерода оптимальна для эффективного включения флуоресцентно-меченого dCTP в растущую цепь ДНК. Меченная таким образом ДНК подходит для FISH-экспериментов или определения профиля экспрессии генов с помощью микрочипов, а также для использования в Саузерн-блоте и Нозерн-блоте.

Олигонуклеотид с 10 полностью вырожденными нуклеотидами, может быть использован как универсальный праймер для синтеза кДНК методом обратной транскрипции и ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Случайный декануклеотидный праймер является одним из популярных стоковых олигонуклеотидов.

Магнитный сорбент ExtraGen® представляет собой водную суспензию твердофазных магнитных частиц на основе оксида железа и оксида кремния. Он предназначен для выделения нуклеиновых кислот из клинических и биологических образцов. Суспензия магнитного сорбента обладает «промежуточной» седиментационной устойчивостью, что особенно важно при использовании материала в автоматических системах выделения ДНК. Частицы ExtraGen® устойчивы к нагреву, сильным окислителям и интенсивным механическим воздей­ствиям (центрифугирование, дисперги­рование и т.п.). Использование фирменного буферного раствора позволяет хранить частицы при комнатной температуре в течение года без ухудшения их сорбционных свойств. Как показали испытания, сорбент ExtraGen® проявляет высокую эффективность при выделении нуклеиновых кислот как в ручном режиме, так и с использованием автоматических станций.

6-FAM-11-2’-дезоксиуридин-5’-трифосфат, трилитиевая соль, является широко используемым соединением для нерадиоактивного мечения ДНК. FAM — флуоресцеин, популярный краситель с эмиссией в зеленой области спектра, с максимумом флуоресценции при 513 нм. Данное производное представляет собой чистый 6-изомер FAM. 6-FAM-11-dUTP — модифицированный трифосфат, способный встраиваться в ДНК вместо dTTP различными ферментами, в том числе фрагментом Кленова, Taq-полизмеразой, ДНК-полимеразой I, Phi 29 полимеразой, обратной транскриптазой или терминальной трансферазой. В отличие от трифосфатов с красителем, напрямую связанным с аминоаллил-dUTP, этот трифосфат содержит линкер из 11 атомов между флуорофором и азотистым основанием. Такая длина линкера предотвращает возможное статическое тушение FAM-метки, а также повышает эффективность инкорпорирования нуклеотида во время синтеза цепи ДНК. FAM-11-dUTP можно использовать для получения меченого продукта во время ПЦР и синтеза кДНК, получения меченых ДНК-зондов методом случайных праймеров или Nick-трансляции. Полученные флуоресцентно-меченные ДНК-зонды могут быть использованы для идентификации исследуемых последовательностей с помощью Саузерн-блота, Нозерн-блота, гибридизации in situ или при анализе с использованием микрочипов.

Амино-11-dUTP - трифосфат с аминогруппой, обеспечивающий более высокую эффективность мечения ДНК в сравнении с традиционным аминоаллил-dUTP. Удлиненный линкер этого трифосфата обеспечивает как более эффективное ферментативное включение трифосфата, так и более высокую степень мечения амино-модифицированной ДНК активированными эфирами. Амино-11-dUTP совместим с ПЦР, обратной транскрипцией и ник-трансляцией. Нуклеотид эффективно включается Taq-полимеразой, фрагментом Кленова и обратными транскриптазами. Последующая реакция амино-ДНК с активированными эфирами позволяет получать меченые ДНК.

Олигонуклеотиды – короткие фрагменты нуклеиновых кислот, которые широко используются в различных областях ДНК-диагностики (медицинская диагностика, криминалистический анализ, ветеринария, контроль качества продуктов питания и др.). В последнее время широкое распространение олигонуклеотиды получили в качестве лекарственных средств против различных генетических и других заболеваний. Компания ГенТерра производит ДНК- и РНК-олигонуклеотидов в масштабах от нескольких миллиграмм до граммовых количеств, в том числе и модифицированные олигонулеоитды, флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды и зонды для ПЦР в реальном времени.

Набор для тестирования наличия ДНКаз Genta DNAseAlarm содержит оптимизированные реагенты для быстрого и высокочувствительного анализа присутствия ДНКаз в растворе или смывах с поверхностей. Набор позволяет обнаруживать до 0.001 U ДНКазы I. Набор основан на флуоресцентном зонде с FAM, обладающим минимальной фоновой флуоресценцией, но демонстрирующем сильное увеличение флуоресценции в присутствии ДНКаз, детектируемое как на флуориметре, так и в ПЦР-амплификаторе.

Меченые нуклеозидтрифосфаты (dNTP) позволяют легко метить молекулы ДНК ферментативным путем. Таким способом получают ДНК-микрочипы, ПЦР-ампликоны и обратные транскрипты. sulfo-Cyanine3 - краситель, обладающий эмиссией в желтой части спектра. Наряду с sulfo-Cyanine5, это один из стандартных флуорофоров для проведения экспериментов на ДНК-чипах. sulfo-Cyanine3 dUTP - трифосфат, обеспечивающий высокую эффективность реакций мечения даже при использовании простых ферментов, таких как Taq-полимераза. Качество каждой партии контролируется с помощью ВЭЖХ-МС и тестирования в ферментативной реакции.

5-кратный реакционный буфер, подходящий для использования в реакции изотермической амплификации нуклеиновых кислот в форматах LAMP и ОТ-LAMP. Стандартный 5х Genta LAMP-буфер содержит 25 мМ MgSO4, что соответствует 5 мМ MgSO4 в реакционной смеси.

Genta Bst ДНК-полимераза — большой фрагмент ДНК-полимеразы Bacillus stearothermophilus (полипептид размером 67 кДа). Фермент обладает 5’-3’ полимеразной активностью, но не имеет 5’-3’ и 3’-5’ экзонуклеазную активность. Genta Bst ДНК-полимераза обладает вытесняющей активностью и может использоваться для изотермической амплификации ДНК в формате LAMP/RT-LAMP. Оптимальная температура активности фермента — 60-65°C.

sulfo-Cyanine5 dUTP - модифицированный трифосфат для ферментативного мечения ДНК, аналог Cy5-dUTP. В отличие от трифосфатов, содержащих краситель, напрямую связанный с аминоаллил-dUTP, этот трифосфат содержит линкер, повышающий эффективность его встраивания обычными полимеразами типа Taq-полимеразы. sulfo-Cyanine5 - яркий краситель для дальней красной области (канал Cy5). Трифосфат поставляется в виде лиофилизированной литиевой соли.