Набор PreciseGreen для определения количества дцДНК

Набор содержит концентрированный раствор флуоресцентного красителя QuDye HS reagent, буфер для разведения и стандарты концентрации ДНК (0 и 10 нг/мкл). При смешивании с образцом, краситель селективно связывается с двухцепочечной ДНК, но не с РНК, обеспечивая точное измерение концентрации от 10 пг/мкл до 100 нг/мкл (начальная концентрация образца). Анализ выполняется при комнатной температуре, уровень флуоресценции остается стабильным в течение 3 часов. На измерение концентрации не оказывают влияния примеси (белки, отдельные нуклеотиды, соли, детергенты и др.) Флуориметр позволяет проводить измерения в 200 мкл (при объеме исходного образца 1-20 мкл). Кроме того, краситель QuDye HS reagent обладает очень широким линейным диапазоном зависимости уровня сигнала от концентрации dsDNA. Эти два фактора делают данный набор быстрым и удобным средством количественного определения двухцепочечной ДНК.

 Преимущества набора: • ДНК из любых реакционных смесей, фрагменты длины от 70 до 20000 п. о. • Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,0 • Выделенный ПЦР-продукт пригоден для проведения лигирования, рестрикции, трансформации, секвенирования, ПЦР.

В наборе используется технология сорбции ДНК на магнитных частицах. Весь процесс выделения ДНК сочетает в себе этапы лизиса образца, последующее селективное связывание высвобожденной ДНК с магнитными частицами, а затем, после серии промывок, элюцию с возможностью концентрирования ДНК в низкосолевом буфере. Преимущества набора: • Высокий выход геномной ДНК из клеток E.coli и эукариот: 4-5 мкг ДНК из 0.5-1*109 бактериальных клеток и 0,25-1* 106 эукариотических клеток. • Высокий выход геномной ДНК при выделении из различных мышиных тканей и органов. • Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,1 • Проверено, что очищенная ДНК не содержит белков, нуклеаз или других примесей и может быть использована в широком спектре методов молекулярной биологии, таких как ПЦР, ПЦР-РВ или других реакций с участием ферментов. • Высокая производительность при выделении ДНК из большого количества образцов.

Краситель QuDye dsDNA BR высокоселективен в отношении двухцепочечной ДНК (дцДНК), что позволяет определять количественно двухцепочечную ДНК в широком диапазоне концентраций, и присутствие одноцепочечной ДНК, РНК, белков или свободных нуклеотидов не оказывает влияния на результаты измерений. Концентрированный раствор 200× также является компонентом набора QuDye dsDNA BR для измерения количества двухцепочечной ДНК, который может использоваться с самыми распространенными моделями ридеров.

10 мМ Трис-HCl, 0.1 мМ ЭДТА, pH 8.0. Для приготовления использована деионизованная вода для ПЦР. Применение: Буфер используется для разведения ДНК перед постановкой ПЦР (или иных ферментативных реакций). Может использоваться для элюции ДНК с колонок и магнитных частиц. Растворенная в буфере ДНК может длительно храниться в замороженном виде. При добавлении буфера в реакционную смесь при постановке ПЦР практически не изменяется рН раствора и концентрация ионов магния, поэтому эффективность амплификации не снижается. При использовании для разведения ДНК стандартного ТЕ-буфера относительно высокая концентрация ЭДТА в растворе ДНК (1 мМ ЭДТА) может быть причиной снижения эффективности ПЦР вследствие хелатирования ионов магния. Не содержит нуклеаз.

Буферы и 5X Tersus Red предназначен для работы со смесью полимераз Tersus. Концентрация ионов магния в в 5X Tersus Red буфере — 12,5 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 2,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 5Х Tersus Red буфер содержит красный и желтый красители, не влияющие на работу полимеразы, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель. Буфер удобно использовать для постановки реакций, продукты которых впоследствии анализируются с помощью гель-электрофореза. Продукт ПЦР сразу наносится в гель без добавления буфера для нанесения проб. В 1% агарозном геле с 1X ТАЕ буфером электрофоретическая подвижность красного красителя соответствует фрагменту ДНК размером 1000 п.о., желтый краситель мигрирует с фронтом на уровне фрагментов 20–30 п.о.

«4X Gel Loading Dye, Blue» предназначен для нанесения образцов ДНК на агарозный гель. Перед нанесением на гель анализируемые образцы смешиваются с буфером для нанесения в объемном соотношении 3:1. Присутствие красителей в буфере облегчает нанесение образцов и позволяет в процессе электрофореза следить за миграцией ДНК. В 1% агарозном геле с 1X TAE буфером электрофоретическая подвижность голубого красителя (ксиленцианол) соответствует фрагментам ДНК размером ~3 000 п.о., синий краситель (бромфеноловый синий) мигрирует с фронтом на уровне фрагментов ~300 п.о. В 2% агарозном геле красители мигрируют на уровне ~1 000 п.о. и ~50 п.о. соответственно.

ТРИС-гидрохлорид трис(гидроксиметил)аминометана гидрохлорид Для молекулярной биологии в качестве буферного раствора. Данный продукт предназначен для исследовательских целей. Хранить при комнатной температуре. Фасовка: 5 кг

10X Taq Turbo буфер для Taq и HS Taq ДНК полимераз (кат. ## PK113S/L/H, PK114, PK017S/L/H, PK018) подходит для использования в большинстве приложений ПЦР, включая ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующими красителями SYBR Green I или Eva Green, а также ПЦР с любыми флуоресцентными зондами. Благодаря усовершенствованному составу 10X Taq Turbo буфер обеспечивает значительно более высокую эффективность ПЦР, чем большинство стандартных буферов для Taq ДНК полимераз. Буфер без магния предназначен для постановки реакций, требующих индивидуального побдора концентрации Mg2+. При 25 °C буфер имеет pH=8.6.

10Х TBE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 10Х TBE рекомендовано для: – разделения коротких фрагментов нуклеиновых кислот (менее 1500 п.о.), – продолжительных электрофорезов. В состав буфера входит: 890 мМ Трис-(гидроксиметил) аминометан, 890 мМ борная кислота, 20мМ ЭДТА, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

DTT (дитиотреитол) предназначен для стабилизации и сохранения активности белков, имеющих сульфгидрильные (тиоловые) группы. Раствор DTT используется в буферах для хранения белков и ферментативных реакциях, например, в ПЦР или реакции синтеза первой цепи кДНК.

5X буфер для синтеза первой цепи кДНК предназначен для использования с ревертазами MMLV, Mint и Magnus.

Буферы 10X Encyclo (без Mg2+) предназначен для работы со смесью полимераз Encyclo. Концентрация ионов магния в 10X Encyclo буфере составляет 35 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 3,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 10X Encyclo буфер (без Mg2+) предназначен для постановки реакций, требующих индивидуального подбора концентрации Mg.

Буферы 2X Encyclo GC предназначен для работы со смесью полимераз Encyclo. Концентрация ионов магния в 2X Encyclo GC буфере составляет 7 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 3,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 2Х Encyclo GC буфер рекомендуется для работы со сложными для амплификации фрагментами, например, с фрагментами, богатыми GC участками (>65% GC). При замораживании в 2X Encyclo GC буфере может образовываться осадок. В этом случае перед применением буфер следует прогреть на 50°C до полного растворения осадка и перемешать на вортексе. При использовании Encyclo GC буфера следует внести следующие изменения в стандартную программу ПЦР: • увеличить продолжительность предварительной денатурации до 2 мин; • уменьшить температуру отжига праймера Tm на 2- 5°C относительно расчетной величины; • число циклов увеличить на 2–3 цикла ПЦР относительно ожидаемого, при отсутствии ПЦРпродукта следует добавить как минимум 10 циклов, после чего проанализировать продукт на геле.

50Х TAE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 50Х TAE рекомендовано для: – разделения длинных фрагментов нуклеиновых кислот (более 2 000 п.о.), – электрофореза с последующим выделением ДНК из геля. В состав буфера входит: 2М Трис-(гидроксиметил) аминометан, 50мМ ЭДТА, 1М уксусная кислота, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

Буферы 10X Tersus Plus предназначен для работы со смесью полимераз Tersus. Концентрация ионов магния в 10X Tersus Plus буфере составляет 25 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 2,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 10Х Tersus Plus буфер подходит для большинства приложений, может быть использован для проведения ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующим красителем SYBR Green I, Eva Green. Рекомендуется для работы со сложными для амплификации фрагментами, например, с фрагментами, богатыми GC участками (>65 % GC). При этом следует внести следующие изменения в стандартную программу ПЦР: • увеличить продолжительность предварительной денатурации до 2 мин; • увеличить количество циклов ПЦР на 2–7.