Каталог
Вернуться к результатам поиска
Термолабильная щелочная фосфатаза
Вернуться к результатам поиска
Термолабильная щелочная фосфатаза
от
990 ₽
Компания:
SibEnzyme
Особенности:
от
990 ₽
Термолабильная щелочная фосфатаза удаляет фосфаты с 5`- и 3`-концов ДНК, РНК и ДНТФ. Может быть использована вместо антарктической фосфатазы
Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген щелочной фосфатазы из Alteromonas undina P2
Описание: Термолабильная щелочная фосфатаза (англ. TAP) катализирует дефосфорилирование 5`- и 3`-концов ДНК и РНК. Также гидролизует рибо- и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты.
Определение единицы активности: За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфат (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 16°C. Реакционная смесь содержала 1Х SE-буфер W, 10 mM пара-нитрофенилфосфат.
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°:C); 0.1 mM ZnCl2; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Примечание: Термолабильную щелочную фосфатазу не рекомендуется разбавлять ввиду возможной потери активности.
Функциональный тест: В результате обработки 1 мкг ДНК плазмиды pUC19/HindIII в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1Х SE -буфер W и 1 мкл препарата фермента, в течение 30 мин при 16°C и последующей сшивки с помощью Т4 ДНК лигазы и трансформации клеток E.coli,получали >10-кратное уменьшение числа выросших колоний по сравнению с использованием необработанной ДНК pUC19/Hind III.
Протокол дефосфорилирования 5′-концов ДНК с помощью ТАР после гидролиза эндонуклеазой рестрикции (ЭР):
На 20 мкл реакционной смеси:
10Х SE буфер ЭР (или буфер “W”) – 2 мкл,
ДНК – 0,5-1мкг,
деионизованная вода – до 20 мкл.
Добавить 1 мкл эндонуклеазы рестрикции, перемешать пипетированием.
Инкубировать в течении 0,5-1 часа при оптимальной температуре.
Охладить реакционную смесь во льду в течение 1-2 мин!!!
Добавить 1 мкл (5 ед.) щелочной фосфатазы (Е365/Е366), перемешать пипетированием.
Инкубировать в течение 0,5-1 часа при 16°C(при 25°C активность фермента составляет 75-100%).
Прогреть реакционную смесь при 65°C в течение 20 мин.
Можно использовать обработанную ДНК для дальнейших экспериментов. Если требуется, очистить ДНК гель-фильтрацией, на спин-колонках или высадить 96%-ным этанолом.
Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген щелочной фосфатазы из Alteromonas undina P2
Описание: Термолабильная щелочная фосфатаза (англ. TAP) катализирует дефосфорилирование 5`- и 3`-концов ДНК и РНК. Также гидролизует рибо- и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты.
Определение единицы активности: За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфат (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 16°C. Реакционная смесь содержала 1Х SE-буфер W, 10 mM пара-нитрофенилфосфат.
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°:C); 0.1 mM ZnCl2; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Примечание: Термолабильную щелочную фосфатазу не рекомендуется разбавлять ввиду возможной потери активности.
Функциональный тест: В результате обработки 1 мкг ДНК плазмиды pUC19/HindIII в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1Х SE -буфер W и 1 мкл препарата фермента, в течение 30 мин при 16°C и последующей сшивки с помощью Т4 ДНК лигазы и трансформации клеток E.coli,получали >10-кратное уменьшение числа выросших колоний по сравнению с использованием необработанной ДНК pUC19/Hind III.
Протокол дефосфорилирования 5′-концов ДНК с помощью ТАР после гидролиза эндонуклеазой рестрикции (ЭР):
На 20 мкл реакционной смеси:
10Х SE буфер ЭР (или буфер “W”) – 2 мкл,
ДНК – 0,5-1мкг,
деионизованная вода – до 20 мкл.
Добавить 1 мкл эндонуклеазы рестрикции, перемешать пипетированием.
Инкубировать в течении 0,5-1 часа при оптимальной температуре.
Охладить реакционную смесь во льду в течение 1-2 мин!!!
Добавить 1 мкл (5 ед.) щелочной фосфатазы (Е365/Е366), перемешать пипетированием.
Инкубировать в течение 0,5-1 часа при 16°C(при 25°C активность фермента составляет 75-100%).
Прогреть реакционную смесь при 65°C в течение 20 мин.
Можно использовать обработанную ДНК для дальнейших экспериментов. Если требуется, очистить ДНК гель-фильтрацией, на спин-колонках или высадить 96%-ным этанолом.
TaqSE ДНК полимераза
от
800 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду.
Описание:
TaqSE ДНК полимераза является сложной смесью термостабильных ДНК-полимераз. Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК. Препарат TaqSE ДНК полимеразы обеспечивает более высокую точность копирования ДНК, уменьшает количество побочных продуктов. Может образовывать продукты с тупыми концами благодаря наличию 3`->5` экзонуклеазной активности. Выход продукта может быть выше по сравнению с Taq ДНК полимеразой.
Определение единицы активности: За одну единицу активности TaqSE ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Taq
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С
Примечание:
Не для рутинного использования, для специального применения!
Протокол для проведения ПЦР с TaqSE ДНК полимеразой отличается от протокола проведения ПЦР с Taq ДНК полимеразой.
TaqSE ДНК полимераза при использовании ферментативно синтезированных трифосфатов (Смесь dNTP(ферм.) для ПЦР 2.5mM каждого, кат.номер N026) тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов.
SibEnzyme
Новосибирск
Tli Неорганическая пирофосфатаза
от
990 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген Неорганической пирофосфатазы из Thermococcus litoralis.
Описание: Катализирует гидролиз неорганического пирофосфата с образованием ортофосфата.Фермент чрезвычайно термостабилен.
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для образования 40 нмолей фосфата за 1 мин из пирофосфата в стандартных условиях реакции (50 мМ Tris-HCl (pH 8.5); 1 mM MgCl2; 0.32 mM Ppi) при 75°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер Неорганическая пирофосфатаза
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 0.1 mM EDTA; 100 mM KCl, 0.2% Tween-20; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
SibEnzyme
Новосибирск
Полинуклеотидкиназа T4
от
2 500 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, содержащего клонированный ген полинуклеитидкиназы из бактериофага Т4
Описание: Катализирует перенос (и обмен) концевой фосфатной группы АТФ на 5`-гидроксильную группу ДНК (РНК).
Определение единицы активности: За одну единицу активности Т4 полинуклеотидкиназы принимали количество фермента, необходимое для включения 1 нмоля [32P] в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 37°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер полинуклеотидкиназа T4
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl;0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
SibEnzyme
Новосибирск
T7 РНК полимераза
от
4 070 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген I фага T7.
Описание:
Катализирует синтез РНК, используя в качестве матрицы ДНК, содержащую промотор фага Т7. T7 РНК полимераза используется для приготовления меченого РНК зонда и для проведения транскрипции in vitro.
Определение единицы активности: За одну единицу активности T7 РНК полимеразы принимали количество фермента необходимое для включения 1 нмоля NTP в кислотонерастворимую фракцию за 60 мин при 37°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер Т7 РНК полимераза
Условия хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 1 mM EDTA; 20 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
SibEnzyme
Новосибирск
Экзонуклеаза III
от
1 980 ₽
Источник: Из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген
Описание:
Экзонуклеаза III E.coli катализирует ступенчатое удаление мононуклеотидов с 3’-гидроксильного конца каждой из цепей двуцепочечной ДНК (работает в направлении 3’—>5’), если у этой ДНК «тупые» или 5’-выступающие концы. Экзонуклеаза III способна использовать в качестве субстрата и ДНК с 3’-выступающими концами, но только в случае, если длина такого выступающего конца менее 4-х нуклеотидов. Фермент также обладает эндонуклеазной активностью по отношению к апуринизированной ДНК, гидролизует РНК в РНК-ДНК-гибридах и обладает
3′-фосфатазной активностью.
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимого для образования 1 нмоля кислоторастворимых продуктов гидролиза за 30 мин при 37°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер Экзонуклеаза III
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.5 mM EDTA; 1 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
SibEnzyme
Новосибирск
Sma-эндонуклеаза
от
6 500 ₽
Расщепляет все формы ДНК и РНК (одноцепочечные, двуцепочечные, линейные и кольцевые) до олигонуклеотидов длиной 3-5 нуклеотидных остатка с 5`-фосфатом на конце. Фермент активен в диапазоне значений pH от 7,5 до 8,5 и диапазоне температур от 20 до 37°С.
Применение:
– расщепление природных или денатурированных нагреванием ДНК и РНК;
– уменьшение вязкости образцов при очистке белков;
– удаление нуклеиновых кислот из клеточных или бактериальных лизатов.
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген Sma-нуклеазы из Serratia marcescens.
Условия хранения:
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM NaCl,
5 mM MgCl2, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Определение активности:
Олигонуклеотидный дуплекс
5′-AGCAAATATTGCTCGATATC-3′
3′-TCGTTTATAACGAGCTATAG-5′
Единица активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 30 мин при 37°С в SE-буфере B в 20 мкл реакционной смеси.
Условия реакции и определения активности: 1 x SEBuffer B. Инкубировать при 37°C.
Чистота: >90% (SDS-PAGE)
Температурная инактивация: Фермент не инактивируется прогреванием при 65-80°С в течение 20 минут.
Состав прилагаемого буфера:
1 x SEBuffer B (pH 7.6 @ 25ºC)
10 mМ Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT
SibEnzyme
Новосибирск
ДНК полимераза I E.coli (Фрагмент Кленова)
от
1 650 ₽
Источник: Выделен из штамма E.coli, содержащего ген ДНК-полимеразы (Фрагмент Кленова)
Описание: Продукт протеолиза ДНК Полимеразы I (E.coli), у которого сохраняется полимеразная и экзонуклеазная активность в направлении 3`->5`, но отсутствует экзонуклеазная активность в направлении 5`->3`.
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для перевода 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 37°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер Фрагмент Кленова
Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.5); 50 mM KCl; 0.5 mM EDTA; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
SibEnzyme
Новосибирск
SP-Taq ДНК полимераза
от
880 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Taq-ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus..
Описание: SP-Taq ДНК полимераза представляет собой фракцию Taq ДНК полимеразы, подвергнутую специальной обработке и дополнительной очистке. Не содержит примесей ДНК, выявляемых ПЦР. Пригодна для различных работ в области ПЦР-диагностики.
Определение единицы активности: За одну единицу активности SP-Taq ДНК полимеразы принимали количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С.
Условия определения активности:60 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25° C), 25 mM KCl, 1.5 mM MgCl2 , 10 mM 2-меркаптоэтанол, 0.1 % Тритон Х-100, 200 mkM dATP, dCTP, dGTP, 50 mkM H-TTP, 12.5 mkg активированной ДНК тимуса теленка в 50 мкл реакционной смеси.
Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Taq
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С
SibEnzyme
Новосибирск
Hot Start Taq ДНК полимераза
от
4 675 ₽
Источник: Выделена из рекомбинантного штамма E.coli экспрессирующего ген ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus YT1
Описание: Hot Start Taq ДНК-полимераза является сложной смесью термостабильной Taq ДНК-полимеразы молекулярной массой 94 kDa и специфических моноклональных антител из мыши. Hot Start Taq неактивна в условиях приготовления реакции амплификации. Это позволяет исключать такие артефакты амплификации как образование димеров праймеров и ошибочное праймирование на протяжении стадии преамплификации и таким образом может улучшать специфичность по сравнению со стандартными ДНК полимеразами. Преимуществом Hot Start Taq является отсутствие дополнительного нагрева для активации полимеразы. Тепловая активация фермента происходит в течение первой денатурации. Неактивный комплекс Hot Start Taq диссоциирует автоматически при повышении температуры выше + 70 °C, приводя к активации ДНК-полимеразы.
Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3`конец ДНК.
Применение:
Высокоспецифичная PCR
Мультиплексная PCR (особенно рекомендуется)
Высокочувствительные применения
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента требуемое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 минут при 74 °C
Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Hot Start Taq
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0); 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50 % глицерин; 0.5 % Nonidet P-40, 0.5 % Tween-20. Хранить при -20°С.
С ферментом поставляется: 10 x SE-буфер Hot Start Taq ДНК полимераза, MgCl2
SibEnzyme
Новосибирск
T4 ДНК полимераза
от
5 050 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду.
Описание:
Катализирует синтез ДНК в 5` -> 3` направлении и требует присутствия матрицы и праймера. Имеет 3` -> 5` экзонуклеазную активность.
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 37°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза T4
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
SibEnzyme
Новосибирск
PfuSE ДНК полимераза
от
3 000 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду, содержащую модифицированный ген ДНК полимеразы Pyrococcus furiosus.
Описание: PfuSE ДНК полимераза является улучшенным (более стабильным) вариантом Pfu ДНК полимеразы. PfuSE ДНК полимераза обладает 3`-5` экзонуклеазной корректирующей активностью (proof-reading activity), что позволяет ферменту, в отличие от Taq ДНК полимеразы, вести точный синтез ДНК. PfuSE ДНК полимераза образует продукты ПЦР с тупыми концами.
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 72°C.
Оптимальный буфер: SE-буфер PfuSE ДНК полимераза
Условия хранения: 10 mM калий-фосфат (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 0.1 mM DTT, 0.1% Тритон Х-100, 0.5 % Tween-20, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Примечание: Не используйте dUTP в ПЦР.
SibEnzyme
Новосибирск
Эндонуклеаза I
от
2 970 ₽
Источник: Proteus vulgaris 84
Описание: Расщепляет нативную и денатурированную ДНК и РНК до олигонуклеотидов длиной 3-5 нуклеотидных остатков с 5`-фосфатом на конце
Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 мкг данного олигонуклеотидного дуплекса за 30 мин при 37°С в 20 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
Олигонуклеотидный дуплекс
5’-AGCAAATATTGCTCGATATC-3’
3’-TCGTTTATAACGAGCTATAG-5’
Оптимальный буфер: SE буфер Эндонуклеаза I
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 250 mM NaCl; 0,2 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
SibEnzyme
Новосибирск
Taq ДНК полимераза с буфером AS
от
440 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Taq-ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus..
Описание: Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК
Определение единицы активности: За одну единицу активности Taq ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер AS (Ammonium Sulfate)
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С
SibEnzyme
Новосибирск
Taq ДНК полимераза со стандартным буфером(без MgCl2)
от
440 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Taq-ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus..
Описание: Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК
Определение единицы активности: За одну единицу активности Taq ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Taq (без MgCl2)
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С
SibEnzyme
Новосибирск
T4 ДНК лигаза в/а (2000000 е.а./мл)
от
6 000 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, инфицированного фагом Т4.
Описание:
Применяется преимущественно для сшивки тупых концов.
Катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`-фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами ДНК (РНК).
Определение единицы активности: За одну единицу активности Т4 ДНК лигазы принимали количество фермента, необходимое для 50% сшивки HindIII-фрагментов ДНК фага лямбда за 30 мин при 16°С в 20 мкл реакционной смеси при концентрации ДНК 300 mkg/ml.
Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК лигаза T4
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Примечание:
В буфере для Т4 ДНК лигазы допускается выпадение осадка.
В этом случае необходимо перед использованием нагреть буфер до 37°С и встряхнуть его несколько раз до исчезновения осадка.Кроме того, стоит избегать многократного замораживания/оттаивания буфера.Поэтому после первой разморозки рекомендуется расфасовать буфер небольшими объемами в отдельные пробирки, хранить при -20°C,и не размораживать аликвоты более 2-3 раз. Допускается хранение размороженного буфера при +4°С в течение 7 дней.
SibEnzyme
Новосибирск
M-MuLV Обратная транскриптаза, RNaseH-
от
5 390 ₽
Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду.
Описание: РНК зависимая ДНК полимераза. Катализирует матричный синтез ДНК используя в качестве матрицы РНК или одноцепочечную ДНК. Необходим праймер.
Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для включения 1 нмоля dТTP в кислотонерастворимую фракцию, образуемую на матрице поли (rA) с олиго (dT)-праймера за 10 мин при 37°С.
Оптимальный буфер: SE-буфер Обратная транскриптаза M-MuLV
Условия хранения: 10 mM Калия фосфат (pH 7.5); 0,1 mM EDTA; 200 mM NaCl; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Примечание:
Высокая концентрация фермента может привести к ингибированию ОТ-ПЦР. В этом случае следует разбавить препарат фермента в 5, 10 или 20 раз буфером для разбавления M-MuLV ревертазы (прилагается).
SibEnzyme
Новосибирск