Каталог
Вернуться к результатам поиска
Mte I
MD ДНК эндонуклеаза Mte I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC) G(5mC)G(5mC)↑NG(5mC)G(5mC)
(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G (5mC)G(5mC)GN↓(5mC)G(5mC)G
Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Mte I из Microbacterium testaceum 17B
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pHspAI10/DriI дополнительно метилированной M.Fsp4HI за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси
Определение активности MteI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.
Субстрат для определения активности:
Субстрат pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI10, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI и метилированной ДНК-метилтрансферазой Fsp4HI. Плазмида pHspAI10 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HspAI, которая модифицирует сайт узнавания
5`-GCGC-3` с образованием
5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5`.
Кроме того, данная плазмида дополнительно метилирована ДНК-метилтрасферазой М.Fsp4HI, которая модифицирует сайт
5`-GCNGC-3` с образованием
5`-G(5mC)NGC-3`/3`-CGN(5mC)G-5`.
В результате в используемом субстрате имеется один канонический сайт узнавания МteI:
5`-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5`.
МteI может также расщеплять сайт узнавания, включающий шесть 5-метилцитозинов [1], однако активность фермента в этом случае меньше более чем на порядок.
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
25 75 75 100 50 100
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 40 ед фермента Mte I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, pHspAI10/DriI дополнительно метилированная M.Fsp4HI .
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC) G(5mC)G(5mC)↑NG(5mC)G(5mC)
(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G (5mC)G(5mC)GN↓(5mC)G(5mC)G
Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Mte I из Microbacterium testaceum 17B
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pHspAI10/DriI дополнительно метилированной M.Fsp4HI за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси
Определение активности MteI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.
Субстрат для определения активности:
Субстрат pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI10, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI и метилированной ДНК-метилтрансферазой Fsp4HI. Плазмида pHspAI10 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HspAI, которая модифицирует сайт узнавания
5`-GCGC-3` с образованием
5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5`.
Кроме того, данная плазмида дополнительно метилирована ДНК-метилтрасферазой М.Fsp4HI, которая модифицирует сайт
5`-GCNGC-3` с образованием
5`-G(5mC)NGC-3`/3`-CGN(5mC)G-5`.
В результате в используемом субстрате имеется один канонический сайт узнавания МteI:
5`-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5`.
МteI может также расщеплять сайт узнавания, включающий шесть 5-метилцитозинов [1], однако активность фермента в этом случае меньше более чем на порядок.
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
25 75 75 100 50 100
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 40 ед фермента Mte I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, pHspAI10/DriI дополнительно метилированная M.Fsp4HI .
Aox I
от
6 000 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Aox I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
RG(5mC)Y ↑RG(5mC)Y
RG(5mC)Y ↓RG(5mC)Y
Источник: Arthrobacter oxydans 25K
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза линейной формы 1 мкг плазмиды pMHaeIII/DriI за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHaeIII/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4).
Субстрат для определения активности:
Субстрат pMHaeIII/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHaeIII, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHaeIII содержит ген ДНК-метилтрансферазы M.HaeIII из Haemophilus aegyptuus, которая модифицирует сайт узнавания
5` GGCC 3` с образованием 5` GG(5mC)C 3`/3` C(5mC)GG 5`.
Оптимальный буфер: SE-буфер AoxI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
75 25 10 25 75 100
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Aox I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК .
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер AoxI.
SibEnzyme
Новосибирск
Pcs I
от
6 000 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Pcs I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
(5mC)GNNNNNNN(5mC)G (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G
G(5mC)NNNNNNNG(5mC) G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC)
Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K.
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК.
Субстрат для определения активности:
Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и
ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5′-A(5mC)GT-3′) и последовательность ДНК
5′-GACGTATAAAACGTT-3′
3′-CTGCATATTTTGCAA-5′
В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI:
5′-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3′
3′-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5′
Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
50-75 50-75 0 10-25 50-75 50
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.Лигирование:
Неспецифический гидролиз: Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер PcsI.
SibEnzyme
Новосибирск
Glu I
от
6 000 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Glu I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
G(5mC)NG(5mC) G(5mC)↑NG(5mC)
(5mC)GN(5mC)G (5mC)GN↓(5mC)G
Источник: Glacial ice bacterium GL24
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза единственного сайта
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5`
в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Появление дополнительных продуктов гидролиза (см. рисунок ниже, дор. 4-6) является результатом последующего расщепления ДНК по сайтам 5`-GCNGC-3`/3`-CGNCG-5`, имеющим три 5-метилцитозина.
Субстрат для определения активности:
Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и один канонический сайт:
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5` [2].
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
75 75 25 50 100 100
Условия хранения: 10 mM KH2PO4 (pH 7.45); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Glu I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только C5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
SibEnzyme
Новосибирск
Kro I
от
6 000 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Kro I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
GC(5mC)GGC G↑C(5mC)GGC
CGG(5mC)CG CGG(5mC)C↓G
Источник: Kocurea rosea 307
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое дляполного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pMHpaII1/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
Субстрат pMHpaII1/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHpaII1, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHpaII1 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HpaII, которая модифицирует сайт узнавания 5`-CCGG-3` с образованием
5`-C(5mC)GG-3`/3`-GG(5mC)C-5`,
и три сайта узнавания KroI
5`-GC(5mC)GGC-3`/3`-CGG(5mC)CG-5`.
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
50 100 25 50 75 100
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин, 200 мкг/мл BSA. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Kro I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК и ДНК, метилированную MspI ДНК-метилтрансферазой.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.
SibEnzyme
Новосибирск
Mal I
от
2 750 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Mal I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
G(mA)TC G(mA)↑TC
CT(mA)G CT↓(mA)G
Источник: Из штамма E.Coli, несущего клонированный ген Mal из Marinococus albus I.
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК pBR322 (dam-метилированной) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
pBR322 ДНК (dam-methylated)
Оптимальный буфер: SE-буфер MalI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
25 25 50 75 50 50
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер MalI.
SibEnzyme
Новосибирск
Bls I
от
6 000 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Bls I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
G(5mC)NGC G(5mC)N↑GC
(5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G
Источник: Bacillus simplex 23
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза, как минимум, одного сайта
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`
в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4).
Субстрат для определения активности:
Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три канонических сайта:
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2, 3].
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
10 10 50 100 75 50
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 5 ед фермента Bls I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.
SibEnzyme
Новосибирск
Pkr I
от
6 000 ₽
MD ДНК эндонуклеаза Pkr I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
G(5mC)NG(5mC) G(5mC)N↑G(5mC)
(5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G
Источник: Planomicrobium koreense 78k
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4).
Субстрат для определения активности:
Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта:
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2].
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
50 75 10 25 100 100
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
SibEnzyme
Новосибирск