LumiMount DAPI среда для флуоресцентных препаратов

LumiMount — готовая среда на водной основе для заключения клеток и тканей, окрашенных различными флуоресцентными красителями, под покровные стекла. LumiMount совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла. LumiMount обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.

Тирамидная амплификация (TSA) — самый универсальный и эффективный способ усиления интенсивности флуоресцентного сигнала, применяемый в иммуногистохимии (ИГХ, IHC), иммуноцитохимии (ICC) и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Метод TSA основан на способности пероксидазы хрена (HRP) в присутствии низких концентраций пероксида водорода превращать меченый тираминсодержащий субстрат в окисленный, высокореактивный свободный радикал, который ковалентно связывается с остатками тирозина белковых молекул, расположенных рядом с ним. По сравнению с обычными процедурами, метод TSA увеличивает чувствительность иммунофлуоресцентного обнаружения целевых молекул более чем в 100 раз, благодаря чему он особенно подходит для обнаружения мишеней с низкой концентрацией. В применениях, где не требуется повышение чувствительности обнаружения, TSA позволяет значительно снижать концентрации антител или зондов без потери интенсивности сигнала, и тем самым уменьшать фоновое окрашивание, возникающее из-за перекрестной реактивности или неспецифического связывания антител. Поскольку связывание тирамидной метки является ковалентным, тирамиды разных красителей можно использовать в нескольких последовательных раундах TSA-окрашивания, для обнаружения нескольких мишеней в одном и том же образце. Данный тирамид — конъюгат водорастворимого дальне-красного флуоресцентного красителя sulfo-Cyanine5.5. sulfo-Cyanine5.5 тирамид (также известный как Cy5.5® и Cyanine5.5 тирамид у других производителей) является компонентом многих наборов для тирамидной амплификации сигнала. Этот реагент можно использовать с любым антителом или другими молекулами (стрептавидин и др.), конъюгированными с HRP, для окрашивания клеток и тканей методами иммунофлуоресценции.

Тирамидная амплификация (TSA) — самый универсальный и эффективный способ усиления интенсивности флуоресцентного сигнала, применяемый в иммуногистохимии (ИГХ, IHC), иммуноцитохимии (ICC) и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Метод TSA основан на способности пероксидазы хрена (HRP) в присутствии низких концентраций пероксида водорода превращать меченый тираминсодержащий субстрат в окисленный, высокореактивный свободный радикал, который ковалентно связывается с остатками тирозина белковых молекул, расположенных рядом с ним. По сравнению с обычными процедурами, метод TSA увеличивает чувствительность иммунофлуоресцентного обнаружения целевых молекул более чем в 100 раз, благодаря чему он особенно подходит для обнаружения мишеней с низкой концентрацией. В применениях, где не требуется повышение чувствительности обнаружения, TSA позволяет значительно снижать концентрации антител или зондов без потери интенсивности сигнала, и тем самым уменьшать фоновое окрашивание, возникающее из-за перекрестной реактивности или неспецифического связывания антител. Поскольку связывание тирамидной метки является ковалентным, тирамиды разных красителей можно использовать в нескольких последовательных раундах TSA-окрашивания, для обнаружения нескольких мишеней в одном и том же образце. Данный тирамид — конъюгат водорастворимого красителя sulfo-Cyanine7 с флуоресценцией в ближней инфракрасной области спектра. sulfo-Cyanine7 тирамид (также известный как Cy7® и Cyanine7 тирамид у других производителей) является компонентом многих наборов для тирамидной амплификации сигнала. Этот реагент можно использовать с любым антителом или другими молекулами (стрептавидин и др.), конъюгированными с HRP, для окрашивания клеток и тканей методами иммунофлуоресценции.

Активированный эфир красителя AF 555 — яркого, фотостабильного и гидрофильного флуорофора для желтого канала. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 555 — гидрофильный флуорофор с высокими квантовым выходом флуоресценции и фотостабильностью, альтернатива тетраметилродамину (TAMRA, TMR) и Cyanine3. Он предназначен для различных применений, включая цитометрию и микроскопию.

(5,6)-FAM диацетат NHS-активированный эфир — это производное флуоресцеина (FAM), используемое для мечения биомолекул, содержащих первичные аминогруппы. Особенностью данного соединения является то, что оно не флуоресцирует до тех пор, пока не произойдет отщепления ацетатных групп. Под воздействием внутриклеточных эстераз, а также в щелочной среде, происходит образование яркого флуорофора c максимумами поглощения и испускания в зеленой области (при ~492 нм и ~517 нм, соответственно). Благодаря этому свойству данный продукт применяется для трекинга клеток в проточной цитометрии, а также может быть использован для изучения активности внутриклеточных эстераз.

TODi-1 (гомодимер Тиазолового Оранжевого, также известный как TOTO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. TODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. TODi-1 не цитотоксичен и может использоваться для долгосрочного мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре.

LumiTracker Mito Orange CMTMRos — катионный оранжевый флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. CMTMRos представляет собой гидрофобное соединение, которое пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них. Окрашивание LumiTracker Mito Orange CMTMRos сохраняется после фиксации альдегидами. Этот краситель обычно используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH800 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH800. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH800 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH800 испускает свет в ближней инфракрасной области спектра, с максимумом флуоресценции 797 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях, а также в задачах, требующих низкой фоновой флуоресценции образца. PKH800 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение нескольких дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

CM-DiI — оранжево-красный флуоресцентный карбоцианиновый краситель, содержащий тиол-реактивную хлорметильную (CM) функциональную группу. CM-DiI маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. CM-DiI используется для мечения клеток и оценки их пролиферации in vivo и in vitro, а также для трекинга клеток и мониторинга их подвижности. Краситель переносится в дочерние клетки и не просачивается в соседние клетки популяции. Окрашивание CM-DiI показывает яркую флуоресценцию в течение не менее 72 часов (около трех-шести поколений клеток). Внутри клетки CM-DiI не проявляет цитотоксичности и минимально воздействует на пролиферативную способность или биологию клетки. В отличие от других мембранных красителей, CM-DiI обладает повышенной растворимостью в воде и может фиксироваться традиционными альдегидными фиксаторами. CM-DiI также сохраняется в клетках после их пермеабилизации. Все это позволяет сочетать мечение с помощью CM-DiI с другими гистологическими методами, такими как иммунохимия, оптическое просветление и т.д.

(5,6)-FITC, или FAM (5,6)-изотиоцианат представляет собой реакционноспособное производное флуоресцеина, взаимодействующее с нуклеофильными заместителями биомолекул (в т.ч. с гидроксильными, тиольными и аминогруппами). Соединение часто используется для мечения антител и других зондов, применяемых в различных методах на основе флуоресценции, таких как микроскопия, проточная цитометрия и иммунофлуоресцентный анализ (иммунохимия, Вестерн-блоттинг, ИФА).3524

Тетраацетилированный N-азидоацетилглюкозамин (Ac4GlcNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.

Азидопроизводное красителя AMCA для конъюгации с терминальными алкинами посредством медь-катализируемой клик-реакции или с напряженными алкинами посредством безмедной клик-реакции. AMCA (ацетат аминометилкумарина) — один из самых ярких синих флуоресцентных красителей. Этот флуорофор имеет относительно большой стоксов сдвиг, высокую устойчивость к фотовыгоранию и рН-независимую флуоресценцию в диапазоне рН от 4 до 10. АМСА широко используется для многоцветного мечения из-за минимального перекрытия его флуоресценции с зелеными и более длинноволновыми флуоресцентными красителями.

YODi-1 (гомодимер Оксазолового Желтого, также известный как YOYO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. YODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. YODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для анализа единичных молекул ДНК.

L-Азидогомоаланин (AHA) представляет собой неканонический аминокислотный аналог метионина, который содержит азидную группу. Мечение с помощью AHA является быстрой, чувствительной, нетоксичной и нерадиоактивной альтернативой традиционному методу обнаружения синтеза белка de novo. AHA — проникающее в клетку соединение, включающееся случайным образом в синтезирующийся белок вместо метионина во время трансляции. Полученные таким образом меченые азидом полноразмерные белки могут быть обнаружены с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или биотинилированными алкинами, либо безмедной клик-реакции с циклоалкинами, и использованы для последующей визуализации или очистки.

Тетраацетилированный N-(4-пентиноил)глюкозамин (Ac4GlcNAl) — меченый алкином моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAl — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом алкинсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными азидами или биотин-азидом.

VdU (5-винил-2’-дезоксиуридин) — синтетический аналог тимидина, который можно использовать для изучения синтеза ДНК de novo и клеточной пролиферации. VdU может служить потенциальной заменой другим тимидиновым аналогам — BrdU (5-бром-2’-дезоксиуридину) и EdU (5-этинил-2’-дезоксиуридину). VdU способен встраиваться в реплицирующуюся ДНК вместо природного тимидина во время S-фазы клеточного цикла. Полученную таким образом винилсодержащую ДНК можно детектировать тетразинами, конъюгированными с биотином или флуоресцентными красителями, с помощью безмедной алкен-тетразиновой реакции (также известной как лигирование Дильса-Альдера, или IEDDA), и использовать в дальнейшем для пурификации ДНК или визуализации клеток методами микроскопии или цитометрии.