Набор для исследования пролиферации клеток с помощью EdU

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2].Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 647, и PI. AF 647 — яркий флуоресцентный краситель, излучающий в дальнем красном канале, с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Спектр AF 647 сильно отстоит от зелено-желтых длин волн, что делает этот флуорофор незаменимым для мечения клеток, обладающих высокой автофлуоресценцией. Максимум поглощения красителя — 655 нм. Максимум эмиссии — 680 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2]. Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 488, и PI. AF 488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом канале. Спектральные характеристики красителя сходны с FITC. Максимум поглощения — 495 нм. Максимум эмиссии — 519 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Липофильные карбоцианиновые трейсеры представляют собой цианиновые флуоресцентные красители, несущие длинные гидрофобные углеводородные хвосты. Данные красители обладают низкой флуоресценцией в водной среде, но демонстрируют ее значительное увеличение при включении в липидные бислои. Они эффективно и прочно маркируют цитоплазматические мембраны и внутриклеточные мембранные структуры различных типов клеток [1]. Карбоцианиновые красители используются в исследованиях, изучающих слияние клеток [2], клеточную адгезию [3] и миграцию [4], из-за их минимальной токсичности и отсутствию переносу красителя между клетками. Многоцветное окрашивание разных популяций клеток используют для последующей их идентификации после смешивания клеточных культур. Двойное мечение позволяет точно определить клетки, которые слились друг с другом, либо сформировали кластеры [5]. Кроме того, эти красители широко используются в качестве антероградных и ретроградных аксональных трейсеров в живых [1,6] и фиксированных [7,8] нервных тканях и клетках. Данный набор содержит образцы восьми карбоцианиновых красителей, обладающих различной скоростью мембранной диффузии, растворимостью и флуоресцентными свойствами: DiI (DiIC18(3); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндокарбоцианин) — яркий и фотостабильный оранжево-красный флуоресцентный липофильный краситель, широко используемый для мечения мембран, трассировки клеток и аксонов, а также для визуализации методом микроскопии сверхвысокого разрешения STORM [9]. DiO (DiOC18(3); 3,3’-диоктадецилоксакарбоцианин) — широко используемый зеленый флуоресцентный липофильный краситель с меньшей скоростью латеральной диффузии в мембранах, чем у DiI. DiO часто используется вместе с DiI для двухцветного мечения. DiA (4-Di-16-ASP; 4-(4-(дигексадециламино)стирил)-N-метилпиридиния йодид) — желто-зеленый флуоресцентный липофильный краситель, который диффундирует гораздо быстрее, чем DiO, в клеточных мембранах. Он часто используется вместе с DiI для двухцветного мечения. DiD (DiIC18(5); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндодикарбоцианин) — аналог DiI со смещенными в красную область спектрами возбуждения и испускания флуоресценции, что позволяет избегать автофлуоресценции и фототоксических эффектов при визуализации. Краситель широко используется для многоцветного мечения и визуализации методом микроскопии сверхвысокого разрешения STORM [9]. DiR (DiIC18(7); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндотрикарбоцианин) — флуоресцентный липофильный краситель ближнего инфракрасного диапазона (NIR). Инфракрасная область спектра оптически прозрачна для многих тканей, поэтому DiR можно использовать для визуализации мелких животных in vivo [10] и микроскопии сверхвысокого разрешения STORM [9]. Neuro-DiO — зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель. В отличие от DiO, Neuro-DiO обладает лучшей растворимостью в мембранах и менее склонен к образованию нефлуоресцентных агрегатов, снижающих скорость диффузии красителя. RAPID DiI (дилинолеил DiI; FAST DiI™; 1,1’-дилинолеил-3,3,3’,3’-тетраметилиндокарбоцинанин) — ненасыщенный аналог DiI с более высокой скоростью латеральной диффузии в клеточных мембранах, чем у исходного DiI. Данное свойство делает краситель особенно полезным для маркирования нейронов как в живых, так и в фиксированных тканях. RAPID DiO (дилинолеил DiO; FAST DiO™; 1,1’-дилинолеил-3,3’-оксакарбоцинанин) представляет собой ненасыщенный аналог DiO с более высокой скоростью латеральной диффузии в клеточных мембранах, чем у исходного DiO. Данное свойство делает краситель особенно полезным для маркирования нейронов как в живых, так и в фиксированных тканях.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH800 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH800. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH800 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH800 испускает свет в ближней инфракрасной области спектра, с максимумом флуоресценции 797 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях, а также в задачах, требующих низкой фоновой флуоресценции образца. PKH800 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение нескольких дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH2 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH2. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH2 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH2 испускает свет в зеленой области спектра, с максимумом флуоресценции 504 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH2 менее стабилен, чем PKH26, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 10-11 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач. LumiTrace PKH2, набор для мечения клеточных мембран, 14201.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH26 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH26. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH26 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH26 испускает свет в красной области спектра, с максимумом флуоресценции 567 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH26 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 100 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH26, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH26 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH26, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH26 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

LUCS 13 — проникающий в клетки ядерный краситель, имеющий яркую зеленую флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами. LUCS 13 является полным структурным аналогом SYTO®13. LUCS 13 используют для окрашивания РНК и ДНК как в живых, так и в мертвых эукариотических клетках, а также грамположительных и грамотрицательных бактерий. Краситель возбуждается при 488 нм, эмиссия регистрируется во флуоресцеиновом канале с пиком 509 нм после связывания с ДНК и 514 нм после связывания с РНК. Краситель может использоваться совместно с непроникающими в живые клетки ядерными маркерами, такими как YoDi-3, для оценки клеточной выживаемости методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

AF 430 — гидрофильный флуорофор. Он используется в проточной цитометрии и других флуоресцентных методах. Функциональная группа — активированный эфир — позволяет проводить эффективную конъюгацию флуорофора с первичными и вторичными аминами (в том числе белками и антителами) в среде водных буферов и безводных органических растворителях.

Ретикулоциты представляют собой незрелые красные клетки крови, образующиеся в костном мозге и поступающие в периферическую кровь, где они созревают в эритроциты. Увеличение или уменьшение количества ретикулоцитов может указывать на активность эритропоэза или его недостаточность, в частности, на нарушения, связанные с анемиями и дисфункцией костного мозга. У млекопитающих ретикулоциты, как и зрелые эритроциты, лишены клеточного ядра, но в них присутствуют остаточные органеллы (рибосомы и митохондрии) и содержащиеся в них РНК и ДНК. Этот признак отличает ретикулоциты от зрелых эритроцитов. Красители нуклеиновых кислот, такие как тиазоловый оранжевый, выявляют сетчатую структуру рибосомной РНК (рРНК) в ретикулоцитах, и позволяют визуально их отличать от зрелых эритроцитов. Также окрашивание тиазоловым оранжевым позволяет дифференцировать глазами стадию созревания ретикулоцитов — новые клетки содержат больше РНК, чем зрелые ретикулоциты, имеющие низкое содержание РНК. LumiCell Reticulocyte Stain (также известен как BD Retic-Count™ reagent, 349204) представляет собой готовый к использованию раствор тиазолового оранжевого для определения числа ретикулоцитов в периферической крови человека. Тиазоловый оранжевый связывается с рРНК и ДНК, образуя флуоресцентный комплекс с поглощением при 509 нм и испусканием при 532 нм. LumiCell Reticulocyte Stain подходит как для микроскопии, так и для проточной цитометрии.

JC-1 представляет собой катионный карбоцианиновый краситель, который накапливается в митохондриях живых клеток потенциал-зависимым образом. В низких концентрациях и на деполяризованных мембранах краситель существует в виде зеленого флуоресцентного мономера. При более высоких концентрациях (водные растворы выше 0,1 мкМ) и на гиперполяризованных мембранах краситель образует J-агрегаты, которые имеют эмиссию в оранжевом канале. Здоровые клетки имеют высокий митохондриальный мембранный потенциал, а снижение митохондриального мембранного потенциала является маркером ранней стадии апоптоза. Это позволяет использовать изменения соотношения оранжевой/зеленой флуоресценции JC-1 для различения здоровых и деполяризованных митохондрий. Соотношение красной/зеленой флуоресценции JC-1 зависит только от потенциала митохондриальной мембраны, но не от других факторов, таких как размер, форма и плотность митохондрий.

Окрашивание по Нисслю — широко используемый гистологический метод визуализации морфологии нервной ткани. Метод основан на взаимодействии основных красителей с нуклеиновыми кислотами клеток. Из-за интенсивного синтеза белка, перикарион нейронов имеет высокое содержание рибосомальной РНК в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме (т.н. «вещество Ниссля»), и в следствие этого, окрашивание нейронов основными красителями в цитоплазме более выражено, чем в ядрах. На этом основании окрашенные по Нисслю нейроны можно отличить от глиальных клеток, а данный метод считается специфичным для обнаружения нейронов. Deep-Red Fluorescent Nissl Stain — непроникающий в живые клетки краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с РНК и ДНК. Длинноволновая флуоресценция Deep-Red Fluorescent Nissl Stain сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

HMRhoNox-M (также известный как LysoRhoNox) — Fe2+-селективный флуоресцентный индикатор, основанный на контролируемой N-оксидом спироциклизации тетраметил-гидроксиметилродамина. В отсутствие Fe2+ HMRhoNox-M находится в нефлуоресцентной спироциклической форме, демонстрируя лишь незначительную флуоресценцию в водных буферах и при физиологическом значении рН. Добавление Fe2+ вызывает 60-кратное увеличение флуоресценции при 575 нм за счет дезоксигенации диалкиламиногруппы и перехода индикатора в открытую флуоресцентную форму. HMRhoNox-M реагирует на Fe2+ дозозависимым образом. Флуоресцентный ответ HMRhoNox-M высокоизбирателен к Fe2+и не возникает на ионы других переходных металлов, включая Fe3+, а также ионы щелочных и щелочноземельных металлов. HMRhoNox-M — проникающий в клетки и локализующийся в основном в лизосомах индикатор. Он подходит для мониторинга изменений содержания эндогенного лабильного железа в живых клетках, в том числе захвата и транспорта железа трансферрином.

LumiTracker Lyso Green — краситель, свободно проникающий через клеточные мембраны без использования дополнительных детергентов и концентрирующийся в органеллах с низким pH, например, лизосомах. В отличие от 2,4-динитрофенола (DNP), этот краситель не требует использования антител для визуализации органелл. В структуру молекулы LumiTracker Lyso Green входит бордипиррометен (BDP), что придает ей выраженные гидрофобные свойства и обеспечивает хорошую проникающую способность через мембрану клетки. Кроме этого, краситель содержит в своей структуре аминогруппу, которая выступает в роли слабого основания. В нейтральной среде она не полностью протонирована, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему проникновению через клеточную мембрану. Предположительно, попадая в лизосомы с кислой средой, краситель протонируется и таким образом удерживается в составе органеллы с низким pH. Мечение живых клеток проводится с использованием наномолярных концентраций LumiTracker Lyso Green, и окрашивание проходит в течение нескольких минут. LumiTracker Lyso Green может влиять на лизосомальный pH, так что более длительная инкубация может вызвать его повышение, поэтому окрашивание рекомендуется проводить в течение 3-7 минут при 37°C (в зависимости от клеточной линии и протокола окрашивания) перед визуализацией с использованием флуоресцентной микроскопии. LumiTracker Lyso Green имеет максимум поглощения при 504 нм и максимум флуоресценции при 511 нм. Для визуализации лизосом мы также предлагаем LumiTracker Lyso Red для красного канала (максимумы поглощения и флуоресценции при 577 нм и 590 нм, соответственно). LumiTracker Lyso Green поставляется в виде 1 mM раствора в ДМСО.

TODi-3 (гомодимер Тиазолового Красного, также известный как TOTO®-3) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в дальней красной части спектра. TODi-3 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TODi-3 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. TODi-3 не цитотоксичен и может использоваться для долгосрочного мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре. Длинноволновая флуоресценция TO-TAP-3 сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

BDP 505/515 - бордипиррометеновый флуорофор для визуализации липидных мембран. Он характеризуется очень высокой яркостью, а также стабильностью в условиях облучения светом возбуждения в конфокальной микроскопии.

TO-TAP-3 (мономер Тиазолового Красного также известный как TO-PRO®-3) — мономерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в дальней красной части спектра. TO-TAP-3 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TO-TAP-3 обладает ярким сигналом и низкой фоновой флуоресценцией. Он используется для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в микроскопии. TO-TAP-3 может использоваться для мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре. Длинноволновая флуоресценция TO-TAP-3 сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.