DiD, липофильный трейсер

LUCS 13 — проникающий в клетки ядерный краситель, имеющий яркую зеленую флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами. LUCS 13 является полным структурным аналогом SYTO®13. LUCS 13 используют для окрашивания РНК и ДНК как в живых, так и в мертвых эукариотических клетках, а также грамположительных и грамотрицательных бактерий. Краситель возбуждается при 488 нм, эмиссия регистрируется во флуоресцеиновом канале с пиком 509 нм после связывания с ДНК и 514 нм после связывания с РНК. Краситель может использоваться совместно с непроникающими в живые клетки ядерными маркерами, такими как YoDi-3, для оценки клеточной выживаемости методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

AF 430 — гидрофильный флуорофор. Он используется в проточной цитометрии и других флуоресцентных методах. Функциональная группа — активированный эфир — позволяет проводить эффективную конъюгацию флуорофора с первичными и вторичными аминами (в том числе белками и антителами) в среде водных буферов и безводных органических растворителях.

Cyanine7.5 - краситель для ближней ИК-области с большими длинами волн поглощения и эмиссии. Данный продукт - активированный эфир красителя Cyanine7.5, подходящий для мечения аминогрупп в белках, пептидах и других молекулах. Излучение ближнего ИК-диапазона легко проникает через биологические ткани благодаря наличию "инфракрасного окна" - области от 650 до 1350 нм, в которой отсутствует поглощение природных биомолекул. Поэтому инфракрасные флуорофоры позволяют проводить неинвазивную визуализацию распределения меченых белков и других молекул в живом организме. По спектральным свойствам Cyanine7.5 напоминает краситель ICG (индоцианин зеленый, indocyanine green), но имеет увеличенный квантовый выход флуоресценции благодаря особенностям химической структуры. Для мечения белков этим красителем мы рекомендуем воспользоваться нашим протоколом.

ROX (родамин X) - яркий родаминовый краситель для канала ROX. Карбоксиродамины доступны в виде двух изомеров. Этот продукт - производное 5-карбокси-ROX.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2].Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 647, и PI. AF 647 — яркий флуоресцентный краситель, излучающий в дальнем красном канале, с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Спектр AF 647 сильно отстоит от зелено-желтых длин волн, что делает этот флуорофор незаменимым для мечения клеток, обладающих высокой автофлуоресценцией. Максимум поглощения красителя — 655 нм. Максимум эмиссии — 680 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Гидроксисукцинимидный активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 (флуоресцирующего в ближней ИК-области), усовершенствованный аналог Cy7®. Биологические ткани имеют «окно прозрачности» в ближней инфракрасной области спектра, поскольку никакие биомолекулы не поглощают электромагнитное излучение длиной от 650 до 1350 нм. Используя флуорофоры ближней ИК-области, можно получать изображения распределения меченых белков в организме in vivo, что весьма ценно для изучения фармакокинетики. Данный реагент применяется для мечения биомолекул красителем Cyanine7, в том числе для последующего использования в экспериментах in vivo. Предлагаемая нами структура Cyanine7 характеризуется повышенной жесткостью полиметиновой цепочки красителя, обеспеченной включением ее в состав циклогексенового кольца. Это усовершенствование, введенное нами в молекулу, позволяет увеличить квантовый выход и соответственно яркость флуоресценции на 20% по сравнению с красителем со стандартной структурой. При проведении реакций мечения в водной среде мы рекомендуем использовать данный реагент в виде раствора в DMF или DMSO в сооответствии с нашим рекомендуемым протоколом. Мы также предлагаем водорастворимый аналог - активированный эфир sulfo-Cyanine7 , который можно применять для мечения белков без органического растворителя.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель. Благодаря своей гидрофильности, он хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. Он предназначен для различных применений, включая микроскопию. AF 488 представляет собой сульфированный родаминовый краситель — родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-. Они обладают практически идентичными фотофизическими свойствами. Изомеры требуют разделения, использование смеси изомеров может вести к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах.

Реакционноспособное производное красителя Cyanine5.5, активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир. Применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках и олигонуклеотидах. Cyanine5.5 излучает в дальней красной - ближней ИК области. Такая флуоресценция хорошо подходит для тех случаев, когда важно минимизировать влияние фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для неинвазивного имэджинга животных в ближнем ИК-излучении. Реагент может использоваться вместо NHS-производных Cy5.5®, DyLight 680.

DusQ 3 NHS активированный эфир представляет собой производное тушителя флуоресценции DusQ 3 для конъюгации с аминогруппами белков, олигонуклеотидов. Демонстрирует наиболее эффективное ковалентное связывание в диапазоне значений pH 7-9. DusQ 3 используется в качестве акцептора для флуорогенных зондов с двойной меткой, зондов для количественной ПЦР, секвенирования и других областей применения комбинации репортер-гаситель. Для DusQ 3 характерным является диапазон поглощения 620-730 нм, благодаря чему в методах, основанных на резонансном переносе флуоресцентной энергии (FRET), он служит акцептором в сочетании с флуорофорами с эмиссией в диапазоне от дальнего красного до ближнего-ИК таких, как Cyanine5, Cyanine5.5, AF 647.

TODi-3 (гомодимер Тиазолового Красного, также известный как TOTO®-3) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в дальней красной части спектра. TODi-3 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TODi-3 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. TODi-3 не цитотоксичен и может использоваться для долгосрочного мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре. Длинноволновая флуоресценция TO-TAP-3 сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

TO-TAP-3 (мономер Тиазолового Красного также известный как TO-PRO®-3) — мономерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в дальней красной части спектра. TO-TAP-3 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TO-TAP-3 обладает ярким сигналом и низкой фоновой флуоресценцией. Он используется для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в микроскопии. TO-TAP-3 может использоваться для мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре. Длинноволновая флуоресценция TO-TAP-3 сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

CM-DiI — оранжево-красный флуоресцентный карбоцианиновый краситель, содержащий тиол-реактивную хлорметильную (CM) функциональную группу. CM-DiI маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. CM-DiI используется для мечения клеток и оценки их пролиферации in vivo и in vitro, а также для трекинга клеток и мониторинга их подвижности. Краситель переносится в дочерние клетки и не просачивается в соседние клетки популяции. Окрашивание CM-DiI показывает яркую флуоресценцию в течение не менее 72 часов (около трех-шести поколений клеток). Внутри клетки CM-DiI не проявляет цитотоксичности и минимально воздействует на пролиферативную способность или биологию клетки. В отличие от других мембранных красителей, CM-DiI обладает повышенной растворимостью в воде и может фиксироваться традиционными альдегидными фиксаторами. CM-DiI также сохраняется в клетках после их пермеабилизации. Все это позволяет сочетать мечение с помощью CM-DiI с другими гистологическими методами, такими как иммунохимия, оптическое просветление и т.д.

BDP 630/650 - это флуоресцентный краситель, в основе которого сопряженная система бордипиррометена. Характеризуется высокими коэффициентом экстинкции и квантовым выходом, а также достаточно долгим временем жизни в возбужденном состоянии. Благодаря этим свойствам, флуорофор применим в поляризационных экспериментах, с помощью которых исследуют образование межмолекулярных связей. Данный краситель содержит в своем составе сукцинимидную группу (NHS), соединенную с основой из бордипиррометена через аминогексаноильный линкер.

Азидопроизводное красителя ATT 550 для конъюгации с терминальными алкинами посредством медь-катализируемой клик-реакции или с напряженными алкинами посредством безмедной безмедной клик-реакции. ATT 550 — желтый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. ATT 550 является структурным аналогом ATTO® 550. ATT 550 — катионный краситель. После связывания с субстратом краситель несет суммарный электрический заряд +1.

ATT 565 представляет собой оранжевый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. Краситель хорошо подходит для использования в микроскопии высокого разрешения и для обнаружения одиночных молекул. Данный продукт является полным аналогом ATTO®565. ATT 565 азид — флуоресцентно меченый азид, реагирующий с алкинильными производными биомолекул (терминальными алкинами и циклооктинами) посредством клик-реакций с образованием стабильных аддуктов.

Реакционноспособное производное (активированный N-гидроксисукцимидный эфир) красителя Cyanine3 (аналог Cy3®). Cyanine3 NHS идеален для мечения водорастворимых белков, пептидов, олигонуклеотидов и ДНК. Для более сложных случаев (легко денатурируемые белки) рекомендуется использовать водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine3 , не требующий добавления органических сорастворителей при проведении реакции. Реагент успешно заменяет аналоги – активированные эфиры Cy3® and DyLight 549.

Активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир красителя AF 532. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 532 — яркий, фотостабильный, гидрофильный флуорофор, излучающий в желтом канале, альтернатива HEX, JOE и SIMA. Краситель активно используется в микроскопии сверхвысокого разрешения, в частности в методе STORM, в качестве активатора в nSTORM и репортера в dSTORM.