Vne I

Описание. Структурно эндонуклеаза Dreamnase® представляет собой гомодимер с массой субъединиц 30 кДа. Эндонуклеаза Dreamnase® гидролизует фосфодиэфирные связи, что приводит к образованию олигодезоксинуклеотидов с концевыми 5’-монофосфатами длиной 3-5 оснований. Происхождение фермента. Эндонуклеаза Dreamnase® продуцируется штаммом Escherichia coli BL21 (DE3). Преимущества: активность фермента сопоставима или выше, чем у импортных аналогов; по показателям чистоты и посторонних примесей фермент соответствует требованиям Государственной Фармакопеи; произведен без использования компонентов животного происхождения. Активность/единица активности: не менее 2000 Ед/мкл (3×10^6 Ед/мг). За единицу активности эндонуклеазы Dreamnase® принимается количество фермента, превращающего 1,0 ОП260 соницированной ДНК спермы лосося в нуклеотиды за 30 минут при температуре плюс 37 °C в реакционном буфере 50 мМ Трис-HСl, pH 8,0 и 1 мМ MgCl₂. Это соответствует полному расщеплению 50 мкг соницированной ДНК спермы лосося в олигонуклеотиды. Чистота: более 90% - по данным электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) с додецилсульфатом натрия (ДСН) в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях. Буфер для хранения: 50 мМ Трис-HCl, pH 8,0±0,2, 20 мМ NaCl, 2 мМ MgCl₂ и 50% глицерин (v/v). Условия хранения: при температуре не выше минус 20 °C.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCCGGG C↑CCGGG GGGCCC GGGCC↓C Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Xma I из Xanthomonas malvacearum Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК аденовируса-2 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК аденовируса-2 Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 100 50 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 3 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GACGTC GAC↑GTC CTGCAG CTG↓CAG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Zra I из Zoogloea ramigera11 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 25 25 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCTAGA T↑CTAGA AGATCT AGATC↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген XbaI из Xanthomonas badrii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-/ HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-/HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 100 50 75 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): TCTAGATC. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E141m, E141T и E142T). Для фасовок Turbo (E141T и E142T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCATGC GCATG↑C CGTACG C↓GTACG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sph I из Streptomyces phaeochromogenes Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 75 75 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E129T и E130T). Для фасовок Turbo (E129T и E130T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ATTTAAAT ATTT↑AAAT TAAATTTA TAAA↓TTTA Источник: Streptococcus milleri S Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 (SspI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 (SspI-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 100 75 25 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента > 95% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10 % ПЭГ Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер O+. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AATT ↑AATT TTAA TTAA↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sse9 I из Sporosarcina species 9 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pBR322 ДНК за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: pBR322 ДНК Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 50 50 75 75 Условия хранения: 10 mM Tis-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием: 5`-A(m6A)TT-3`/ 3`-TT(m6A)A-5`. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: При 37°С активность ~75% от максимальной. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AATATT AAT↑ATT TTATAA TTA↓TAA Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Ssp I из Sphaerotilus species Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер K Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 25 50 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются T4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием AmATATT. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер K, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTAG C↓TAG GATC GAT↑C Источник: Sporosarcina species M Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y при 55 С за 1 час. Активность при 37°С – 75% от исходной Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25-50 50-75 25-50 50-75 100 80 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 500 мкг/мл BSA, 0,01% Tритон Х-100, 7 мМ 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед. фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании CG-метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCGA T↑CGA AGCT AGC↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген TaqI из Thermus aquaticus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 75 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ATGCAT ATGCA↑T TACGTA T↓ACGTA Источник: Zoogloea species 2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 25 25 25 50 Условия хранения: 10 mM Tis-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ATTAAT AT↑TAAT TAATTA TAAT↓TA Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген VspI из Vibrio species 343 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 50 100 25 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием ATTAmAT. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGTACT AGT↑ACT TCATGA TCA↓TGA Источник: Zoogloea ramigera SCA Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GACNNNGTC GACN↑NNGTC CTGNNNCAG CTGNN↓NCAG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Tth111 I из Thermus Thermophilus 111 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 10 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 500 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента 10% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTAA T↑TAA AATT AAT↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Tru9I из Thermus ruber 9 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 25 25 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl-(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием TTAmA. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCATC(N)5 GCATC(N)5↑ CGTAG(N)9 CGTAG(N)9↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген SfaN I из Streptococcus faecalis N Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 75 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер O.