PspL I

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGTACC G↑GTACC CCATGG CCATG↓G Источник: Acinetobacter calcoaceticus 65 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dcm-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dcm-) Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 75 100 10 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (СmCWGG): GGTACCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo (E003T и E004T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCCGC(N)4 CCCGC(N)4↑ GGGCG(N)6 GGGCG(N)6↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Fau I из Flavobacterium aquatili Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 25 50 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 55°С Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCTAGC GCTAG↑C CGATCG C↓GATCG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Bmt I из Bacillus megaterium S2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (Hind III-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 50 50 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACTGGG(N)5 ACTGGG(N)5↑ TGACCC(N)4 TGACCC(N)4↓ Источник: Bacillus megaterium S87 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 10 100 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 75% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 0,5 ед фермента в течение 4 часов при 37°С.Длительная инкубация не рекомендуется. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Примечание: Фермент активен в присутствии ЭДТА. Длительная инкубация не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCCNNNNNGGC GCCNNNN↑NGGC CGGNNNNNCCG CGGN↓NNNNCCG Источник: Bacillus globigii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер 2W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 75 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности Чувствительность к метилированию: Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): GCCWGGNNGGCС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCANNNNNTGG CCANNNN↑NTGG GGTNNNNNACC GGTN↓NNNNACC Источник: Acinetobacter calcoaceticus B7 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dcm-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dcm-) Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 100 25 50 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm- метилированием (CmCWGG): CCANNNCCTGG или CCAGGNNNTGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCGCGCC GG↑CGCGCC CCGCGCGG CCGCGC↓GG Источник: Из штамма E. coli, несущего клонированный ген PalA I из Pseudomanas alcaligenes BS17Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 10 -10 -10 100 40 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг λ-ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCATGC GCATG↑C CGTACG C↓GTACG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sph I из Streptomyces phaeochromogenes Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 75 75 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E129T и E130T). Для фасовок Turbo (E129T и E130T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTCGAGG CC↑TCGAGG GGAGCTCC GGAGCT↓CC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Abs Iиз Arthrobacter species 7М06. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК pUC19SE/DriI в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере AbsI при 37°С за 1 час Субстрат для определения активности: pUC19SE/DriI Оптимальный буфер: SE-буфер AbsI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10-25 10-25 0-10 25-50 10-25 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 0.05% Triton X-100, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер AbsI Примечание: Длительная инкубация может привести к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTATCC(N)6 GTATCC(N)6↑ CATAGG(N)5 CATAGG(N)5↓ Источник: Bacillus sphaericus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 25 100 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 0.05% Triton X-100, 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 10% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GAATTC G↑AATTC CTTAAG CTTAA↓G Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген EcoR I из Escherichia coli Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер EcoRI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 75 75 50 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 40-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер EcoRI, BSA (кроме E057T и E058T). Для фасовок Turbo (E057T и E058T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: При большом избытке фермента, при использовании неоптимального буфера возможно появление звездчатой активности. Длительная инкубация c BSA не рекомендуется из-за появления звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GAANNNNTTC GAANN↑NNTTC CTTNNNNAAG CTTNN↓NNAAG Источник: Micrococcus roseus X Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 50 100 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 50% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGC GCG↑C CGCG C↓GCG Источник: Arthrobacter species LE3860 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 75 100 50 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Фермент чувствителен к CpG метилированию Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием 5`- G(5mC)GC – 3`/3`- CG(5mC)G – 5` Не блокируется при метилировании 5`- GCG(5mC) – 3`/3`- (5mC)GCG – 5` и 5`- GCG(5mC) – 3`/3`- CGCG – 5`. Гидролизует полуметилированный по внутреннему цитозину сайт: 5`-G(5mC)GC-3`/3`-СGCG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGGCCT AGG↑CCT TCCGGA TCC↓GGA Источник: Planococcus citreus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 50 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 50°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo (E105T и E106T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: При температуре 37°С активность 50% от максимальной.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCGC C↑CGC GGCG GGC↓G Источник: Bacillus species AC Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 75 10 100 Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.2); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 50% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACTGGN ACTGGN↑ TGACCN TGAC↓CN Источник: Bacillus stearothermophilus 1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 10 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 65°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTATAA TTA↑TAA AATATT AAT↓ATT Источник: Pseudomonas species SE-G49 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 25 10 25 75 40 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.