ДМФ (диметилформамид) для мечения

Активированный эфир красителя AF 555 — яркого, фотостабильного и гидрофильного флуорофора для желтого канала. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 555 — гидрофильный флуорофор с высокими квантовым выходом флуоресценции и фотостабильностью, альтернатива тетраметилродамину (TAMRA, TMR) и Cyanine3. Он предназначен для различных применений, включая цитометрию и микроскопию.

sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир — водорастворимый бифункциональный кросс-линкер, содержащий ядро инфракрасного водорастворимого красителя sulfo-Cyanine7 и две реакционноспособные группы NHS для мечения аминов.

Перилен является полициклическим ароматическим углеводородом, содержащим пять конденсированных бензольных колец. Плоская структура перилена обусловливает его флуоресценцию и низкую растворимость его производных. Перилен характеризуется интенсивной зеленой флуоресценцией, прекрасной фотостабильностью и близким к 100% квантовым выходом. По этой причине перилен - это один из наиболее перспективных компонентов при создании новых молекулярных зондов, функциональных материалов и молекулярных устройств. 3-этинилперилен содержит алкиновую группу, способную вступать в реакцию Click Chemistry и реакцию сочетания по Соногашире.

BDP TMR - бордипиррометеновый краситель с длинами волн поглощения и эмиссии, соответствующими каналам TAMRA. Краситель характеризуется длительным временем жизни возбужденного состояния. Это азидопроизводное для мечения по реакции [3+2]-диполярного циклоприсоединения к алкинам (Click chemistry).

Готовые к работе лентивирусные частицы LVT-FusionRed-Mem, несущие ген флуоресцентного белка FusionRed, слитого с сигналом локализации на мембране, предназначены для трансдукции клеток. Лентивирусный вектор эффективно встраивается в геном клеток-мишеней, вызывая стабильную экспрессию флуоресцентного белка FusionRed-Mem через 48-72 часа после добавления к клеточной культуре.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine5.5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

(5,6)-FAM диацетат NHS-активированный эфир — это производное флуоресцеина (FAM), используемое для мечения биомолекул, содержащих первичные аминогруппы. Особенностью данного соединения является то, что оно не флуоресцирует до тех пор, пока не произойдет отщепления ацетатных групп. Под воздействием внутриклеточных эстераз, а также в щелочной среде, происходит образование яркого флуорофора c максимумами поглощения и испускания в зеленой области (при ~492 нм и ~517 нм, соответственно). Благодаря этому свойству данный продукт применяется для трекинга клеток в проточной цитометрии, а также может быть использован для изучения активности внутриклеточных эстераз.

TODi-1 (гомодимер Тиазолового Оранжевого, также известный как TOTO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. TODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. TODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. TODi-1 не цитотоксичен и может использоваться для долгосрочного мониторинга жизнеспособности клеток и обнаружения мертвых клеток в культуре.

LumiTracker Mito Orange CMTMRos — катионный оранжевый флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. CMTMRos представляет собой гидрофобное соединение, которое пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них. Окрашивание LumiTracker Mito Orange CMTMRos сохраняется после фиксации альдегидами. Этот краситель обычно используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH800 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH800. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH800 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH800 испускает свет в ближней инфракрасной области спектра, с максимумом флуоресценции 797 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях, а также в задачах, требующих низкой фоновой флуоресценции образца. PKH800 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение нескольких дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

Пирен - это один из простейших полиароматических углеводородов (ПАУ). Некоторые производные пирена известны способностью к интеркаляции с ДНК. Производные пирена флуоресцируют. Когда два остатка сирена сближены в пространстве, с помощью метода флуоресцентной спектроскопии можно наблюдать образование эксимеров - возбужденных димеров. Поэтому пирен можно использовать для получения информации о структуре биомолекул. Молекула этинилпирена содержит концевую тройную связь, способную вступать в реакцию Cu(I)-катализируемого диполярного циклоприсоединения, а также в Pd(0)-катализируемую реакцию Соногаширы.

Реакционноспособное производное красителя Cyanine5.5, активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир. Применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках и олигонуклеотидах. Cyanine5.5 излучает в дальней красной - ближней ИК области. Такая флуоресценция хорошо подходит для тех случаев, когда важно минимизировать влияние фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для неинвазивного имэджинга животных в ближнем ИК-излучении. Реагент может использоваться вместо NHS-производных Cy5.5®, DyLight 680.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель. Благодаря своей гидрофильности, он хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. Он предназначен для различных применений, включая микроскопию. AF 488 представляет собой сульфированный родаминовый краситель — родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-. Они обладают практически идентичными фотофизическими свойствами. Изомеры требуют разделения, использование смеси изомеров может вести к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах.

Гидроксисукцинимидный активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 (флуоресцирующего в ближней ИК-области), усовершенствованный аналог Cy7®. Биологические ткани имеют «окно прозрачности» в ближней инфракрасной области спектра, поскольку никакие биомолекулы не поглощают электромагнитное излучение длиной от 650 до 1350 нм. Используя флуорофоры ближней ИК-области, можно получать изображения распределения меченых белков в организме in vivo, что весьма ценно для изучения фармакокинетики. Данный реагент применяется для мечения биомолекул красителем Cyanine7, в том числе для последующего использования в экспериментах in vivo. Предлагаемая нами структура Cyanine7 характеризуется повышенной жесткостью полиметиновой цепочки красителя, обеспеченной включением ее в состав циклогексенового кольца. Это усовершенствование, введенное нами в молекулу, позволяет увеличить квантовый выход и соответственно яркость флуоресценции на 20% по сравнению с красителем со стандартной структурой. При проведении реакций мечения в водной среде мы рекомендуем использовать данный реагент в виде раствора в DMF или DMSO в сооответствии с нашим рекомендуемым протоколом. Мы также предлагаем водорастворимый аналог - активированный эфир sulfo-Cyanine7 , который можно применять для мечения белков без органического растворителя.

CM-DiI — оранжево-красный флуоресцентный карбоцианиновый краситель, содержащий тиол-реактивную хлорметильную (CM) функциональную группу. CM-DiI маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. CM-DiI используется для мечения клеток и оценки их пролиферации in vivo и in vitro, а также для трекинга клеток и мониторинга их подвижности. Краситель переносится в дочерние клетки и не просачивается в соседние клетки популяции. Окрашивание CM-DiI показывает яркую флуоресценцию в течение не менее 72 часов (около трех-шести поколений клеток). Внутри клетки CM-DiI не проявляет цитотоксичности и минимально воздействует на пролиферативную способность или биологию клетки. В отличие от других мембранных красителей, CM-DiI обладает повышенной растворимостью в воде и может фиксироваться традиционными альдегидными фиксаторами. CM-DiI также сохраняется в клетках после их пермеабилизации. Все это позволяет сочетать мечение с помощью CM-DiI с другими гистологическими методами, такими как иммунохимия, оптическое просветление и т.д.

(5,6)-FITC, или FAM (5,6)-изотиоцианат представляет собой реакционноспособное производное флуоресцеина, взаимодействующее с нуклеофильными заместителями биомолекул (в т.ч. с гидроксильными, тиольными и аминогруппами). Соединение часто используется для мечения антител и других зондов, применяемых в различных методах на основе флуоресценции, таких как микроскопия, проточная цитометрия и иммунофлуоресцентный анализ (иммунохимия, Вестерн-блоттинг, ИФА).3524

Тетраацетилированный N-азидоацетилглюкозамин (Ac4GlcNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.