ДМФ (диметилформамид) для мечения

Готовые к работе лентивирусные частицы LVT-FusionRed-H2B, несущие ген химерного флуоресцентного белка FusionRed-H2B, предназначены для трансдукции клеток. Лентивирусный вектор эффективно встраивается в геном клеток-мишеней, вызывая стабильную экспрессию химерного флуоресцентного белка FusionRed-H2B через 48-72 часа после добавления к клеточной культуре.

LUCS 13 — проникающий в клетки ядерный краситель, имеющий яркую зеленую флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами. LUCS 13 является полным структурным аналогом SYTO®13. LUCS 13 используют для окрашивания РНК и ДНК как в живых, так и в мертвых эукариотических клетках, а также грамположительных и грамотрицательных бактерий. Краситель возбуждается при 488 нм, эмиссия регистрируется во флуоресцеиновом канале с пиком 509 нм после связывания с ДНК и 514 нм после связывания с РНК. Краситель может использоваться совместно с непроникающими в живые клетки ядерными маркерами, такими как YoDi-3, для оценки клеточной выживаемости методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

AF 430 — гидрофильный флуорофор. Он используется в проточной цитометрии и других флуоресцентных методах. Функциональная группа — активированный эфир — позволяет проводить эффективную конъюгацию флуорофора с первичными и вторичными аминами (в том числе белками и антителами) в среде водных буферов и безводных органических растворителях.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine7.5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine5.5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Тетраацетилированный N-(4-пентиноил)галактозамин (Ac4GalNAl) — меченый алкином моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GalNAl — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилгалактозамина (GalNAc). Образующиеся при этом алкинсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными азидами или биотин-азидом.

Cyanine7.5 - краситель для ближней ИК-области с большими длинами волн поглощения и эмиссии. Данный продукт - активированный эфир красителя Cyanine7.5, подходящий для мечения аминогрупп в белках, пептидах и других молекулах. Излучение ближнего ИК-диапазона легко проникает через биологические ткани благодаря наличию "инфракрасного окна" - области от 650 до 1350 нм, в которой отсутствует поглощение природных биомолекул. Поэтому инфракрасные флуорофоры позволяют проводить неинвазивную визуализацию распределения меченых белков и других молекул в живом организме. По спектральным свойствам Cyanine7.5 напоминает краситель ICG (индоцианин зеленый, indocyanine green), но имеет увеличенный квантовый выход флуоресценции благодаря особенностям химической структуры. Для мечения белков этим красителем мы рекомендуем воспользоваться нашим протоколом.

ROX (родамин X) - яркий родаминовый краситель для канала ROX. Карбоксиродамины доступны в виде двух изомеров. Этот продукт - производное 5-карбокси-ROX.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2].Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 647, и PI. AF 647 — яркий флуоресцентный краситель, излучающий в дальнем красном канале, с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Спектр AF 647 сильно отстоит от зелено-желтых длин волн, что делает этот флуорофор незаменимым для мечения клеток, обладающих высокой автофлуоресценцией. Максимум поглощения красителя — 655 нм. Максимум эмиссии — 680 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

L-Азидогомоаланин (AHA) представляет собой неканонический аминокислотный аналог метионина, который содержит азидную группу. Мечение с помощью AHA является быстрой, чувствительной, нетоксичной и нерадиоактивной альтернативой традиционному методу обнаружения синтеза белка de novo. AHA — проникающее в клетку соединение, включающееся случайным образом в синтезирующийся белок вместо метионина во время трансляции. Полученные таким образом меченые азидом полноразмерные белки могут быть обнаружены с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или биотинилированными алкинами, либо безмедной клик-реакции с циклоалкинами, и использованы для последующей визуализации или очистки.

LumiMount DAPI — заливочная среда на водной основе, содержащая DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол), для заключения под покровные стекла и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. DAPI — синий флуоресцентный краситель, который прочно связывается с участками ДНК, богатыми аденином и тимином, и используется для контрастирования клеточных ядер, а также для окрашивания хромосом. DAPI демонстрирует ~20-кратное усиление флуоресценции при связывании с двухцепочечной ДНК с максимумами поглощения при 358 нм и испускания при 461 нм. LumiMount DAPI совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла. LumiMount DAPI обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount DAPI растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.

sulfo-Cyanine7.5 - краситель для ближнего ИК-диапазона, предназначенный для визуализации in vivo. Его структура и спектры напоминают Индоцианиновый Зеленый (ICG или ICG активированный эфир), который в течение ряда лет разрешен для применения на людях. В отличие от ICG, sulfo-Cyanine7.5 содержит триметиленовый мостик, повышающий квантовый выход флуоресценции. У него также есть линкер для присоединения к белкам, пептидам и другим молекулам. Это производное - активированный эфир (NHS) для мечения аминогрупп.

Гидроксисукцинимидный активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 (флуоресцирующего в ближней ИК-области), усовершенствованный аналог Cy7®. Биологические ткани имеют «окно прозрачности» в ближней инфракрасной области спектра, поскольку никакие биомолекулы не поглощают электромагнитное излучение длиной от 650 до 1350 нм. Используя флуорофоры ближней ИК-области, можно получать изображения распределения меченых белков в организме in vivo, что весьма ценно для изучения фармакокинетики. Данный реагент применяется для мечения биомолекул красителем Cyanine7, в том числе для последующего использования в экспериментах in vivo. Предлагаемая нами структура Cyanine7 характеризуется повышенной жесткостью полиметиновой цепочки красителя, обеспеченной включением ее в состав циклогексенового кольца. Это усовершенствование, введенное нами в молекулу, позволяет увеличить квантовый выход и соответственно яркость флуоресценции на 20% по сравнению с красителем со стандартной структурой. При проведении реакций мечения в водной среде мы рекомендуем использовать данный реагент в виде раствора в DMF или DMSO в сооответствии с нашим рекомендуемым протоколом. Мы также предлагаем водорастворимый аналог - активированный эфир sulfo-Cyanine7 , который можно применять для мечения белков без органического растворителя.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель. Благодаря своей гидрофильности, он хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. Он предназначен для различных применений, включая микроскопию. AF 488 представляет собой сульфированный родаминовый краситель — родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-. Они обладают практически идентичными фотофизическими свойствами. Изомеры требуют разделения, использование смеси изомеров может вести к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах.

Азид Cyanine5 - реагент для Click Chemistry, поставляющийся в виде 10 мМ раствора в ДМСО и в твердой форме. Этот азид хорошо растворяется в органических растворителях (DMF, DMSO), и поэтому реакции конъюгации в водных растворах следует проводить в присутствии некоторого количества органического растворителя. Этот азид хорошо вступает в конъюгацию в водно-органических смесях. Раствор в ДМСО готов для использования в биоконъюгации в соответствии с нашим рекомендуемым протоколом. Доступна и водорастворимая версия данного реагента - sulfo-Cyanine5 азид. Cyanine5 - аналог Cy5®, один из наиболее широко используемых флуорофоров, совместимый с различными приборами для детекции флуоресценции. По спектральным свойствам он схож с DyLight 649.

Реакционноспособное производное красителя Cyanine5.5, активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир. Применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках и олигонуклеотидах. Cyanine5.5 излучает в дальней красной - ближней ИК области. Такая флуоресценция хорошо подходит для тех случаев, когда важно минимизировать влияние фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для неинвазивного имэджинга животных в ближнем ИК-излучении. Реагент может использоваться вместо NHS-производных Cy5.5®, DyLight 680.

Готовые к работе лентивирусные частицы LVT-TagGFP2, несущие ген флуоресцентного белка TagGFP2, предназначены для трансдукции клеток. Лентивирусный вектор эффективно встраивается в геном клеток-мишеней, вызывая стабильную экспрессию флуоресцентного белка TagGFP2 через 48-72 часа после добавления к клеточной культуре.