Hga I

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCANNNNNTGC GCANNNN↑NTGC CGTNNNNNACG CGTN↓NNNNACG Источник: Bacillus stearothermophilus AP Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 75 100 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W Примечание: Большой избыток фермента (более 5 ед на 1 мкг ДНК более 16 часов) приводит к появлению звездчатой активностиАктивность при 37°С 50% от максимальной.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGATC(N)4 GGATC(N)4↑ CCTAG(N)5 CCTAG(N)5↓ Источник: Acinetobacter calcoaceticus W2131 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 100 30 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются T4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC)GGATC, GATCC. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTAC GT↑AC CATG CA↓TG Источник: Rhodopseudomonas sphaeroides Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 50 75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTMKAC GT↑MKAC CAKMTG CAKM↓TG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Fbl I из Flavobacterium balustinum Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCATGG C↑CATGG GGTACC GGTAC↓C Источник: Bacillus species 19 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер 2W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 50 75 10 5 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Bsp19I гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт 5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTACC-5` и не гидролизует метилированные сайты 5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(5mC)-5` и 5`-(4mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(4mC)-5`. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2W, BSA (кроме E047T и E048T). Для фасовок Turbo (E047T и E048T) прикладывается буфер 2W+. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGCGCT AGC↑GCT TCGCGA TCG↓CGA Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Afe I из Alcaligenes faecalis T2774 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (BamHI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (BamHI-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 75 75 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 80% фрагментов ДНК pBR322 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCCAGC CCCAG↑C GGGTCG G↓GGTCG Источник: Geobacillus stearothermophilus Y Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 70°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 75 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 70°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности следует добавлять BSA в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTTAAA TTT↑AAA AAATTT AAA↓TTT Источник: Deinococcus radiophilus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 75 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCTCCN GCTCCN↑ CGAGGN CGAG↓GN Источник: Lysinibacillus manganicus An22 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 50 50 75 80 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GACGTC GACGT↑C CTGCAG C↓TGCAG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Aat II из Acetobacter aceti Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°C Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTAA T↑TAA AATT AAT↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Tru9I из Thermus ruber 9 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 25 25 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl-(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием TTAmA. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG CC↑WGG GGWCC GGW↓CC Источник: Bacillus stearothermophilus 2U Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 50 50 10 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента <5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACTAGT A↑CTAGT TGATCA TGATC↓A Источник: Alteromonas haloplanktis SP Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 25 25 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК фага T7 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37LС. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA (кроме E173T и E174T) Для фасовок Turbo (E173T и E174T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGCAG CTGCA↑G GACGTC G↓ACGTC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Pst I из Providencia stuartii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 25 25 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E109T и E110T). Для фасовок Turbo (E109T и E110T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGCGC G↑CGCGC CGCGCG CGCGC↓G Источник: Bacillus stearothermophilus P Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 100 75 50 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 50°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG ↑CCWGG GGWCC GGWCC↓ Источник: Pseudomonas species 6 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dcm-) за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dcm-) Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 10 25 75 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG) : CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Примечание: При 37°С активность очень низкая.