Буфер для синтеза первой цепи кДНК

10X SNPdetect буфер не содержит ионы магния. Для оптимизации концентрации ионов магния в реакционной смеси используйте 50 мМ раствор MgCl2. При концентрации 2.5 мМ, как правило, достигается наиболее эффективная дискриминация аллелей. Поскольку магний является кофактором полимеразы, увеличение концентрации ионов Mg2+ увеличивает выход реакции. Однако, одновременно снижается её специфичность и растет неспецифическая (фоновая) амплификация. В связи с тем, что ионы магния являются кофактором полимеразы, увеличение концентрации ионов Mg2+ увеличивает выход реакции, одновременно понижая ее специфичность и повышая фоновую амплификацию.

50Х TAE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 50Х TAE рекомендовано для: – разделения длинных фрагментов нуклеиновых кислот (более 2 000 п.о.), – электрофореза с последующим выделением ДНК из геля. В состав буфера входит: 2М Трис-(гидроксиметил) аминометан, 50мМ ЭДТА, 1М уксусная кислота, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

10X Taq Turbo буфер для Taq и HS Taq ДНК полимераз (кат. ## PK113S/L/H, PK114, PK017S/L/H, PK018) подходит для использования в большинстве приложений ПЦР, включая ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующими красителями SYBR Green I или Eva Green, а также ПЦР с любыми флуоресцентными зондами. Благодаря усовершенствованному составу 10X Taq Turbo буфер обеспечивает значительно более высокую эффективность ПЦР, чем большинство стандартных буферов для Taq ДНК полимераз. Концентрация Mg2+ в 10X буфере — 25 мМ. При 25 °C буфер имеет pH=8.3.

Буфер используется для разведения и хранения MMLV ревертазы в тех случаях, когда на реакцию требуется менее 100 ед. фермента. Для повышения точности замешивания реакции мы рекомендуем подбирать разведение так, чтобы конечный объем фермента, добавляемого в реакционную смесь, был не менее 1 мкл.

10 мМ Трис-HCl, 0.1 мМ ЭДТА, pH 8.0. Для приготовления использована деионизованная вода для ПЦР. Применение: Буфер используется для разведения ДНК перед постановкой ПЦР (или иных ферментативных реакций). Может использоваться для элюции ДНК с колонок и магнитных частиц. Растворенная в буфере ДНК может длительно храниться в замороженном виде. При добавлении буфера в реакционную смесь при постановке ПЦР практически не изменяется рН раствора и концентрация ионов магния, поэтому эффективность амплификации не снижается. При использовании для разведения ДНК стандартного ТЕ-буфера относительно высокая концентрация ЭДТА в растворе ДНК (1 мМ ЭДТА) может быть причиной снижения эффективности ПЦР вследствие хелатирования ионов магния. Не содержит нуклеаз.

DTT (дитиотреитол) предназначен для стабилизации и сохранения активности белков, имеющих сульфгидрильные (тиоловые) группы. Раствор DTT используется в буферах для хранения белков и ферментативных реакциях, например, в ПЦР или реакции синтеза первой цепи кДНК.

10 мМ Трис-НCl, 1 мМ EDTA (pH 8.0). Для приготовления используется сверхчистая деионизованная вода. Не содержит нуклеаз и примесей нуклеиновых кислот. Применение: Буфер TE готов к использованию. Применяется в молекулярной биологии: • для элюции с колонок и магнитных частиц, приготовления препаратов нуклеиновых кислот (ДНК, РНК, кДНК); • для приготовления растворов. Буфер ТЕ способствует длительному хранению нуклеиновых кислот в замороженном виде.

10X Overnight ligation buffer применяется для стандартного лигирования (14–16 часов при 14 °C). Буферы оптимизированы для использования с Quick-TA и T4 ДНК лигазами. В состав обоих буферов входят АТФ и ДТТ, которые плохо сохраняются в водных растворах, поэтому буфер не следует оставлять при комнатной температуре после окончания работы.

5X Quick ligation buffer предназначен для быстрого лигирования (5–15 минут при комнатной температуре). Буферы оптимизированы для использования с Quick-TA и T4 ДНК лигазами. В состав обоих буферов входят АТФ и ДТТ, которые плохо сохраняются в водных растворах, поэтому буфер не следует оставлять при комнатной температуре после окончания работы.

Набор содержит концентрированный раствор флуоресцентного красителя QuDye HS reagent, буфер для разведения и стандарты концентрации ДНК (0 и 10 нг/мкл). При смешивании с образцом, краситель селективно связывается с двухцепочечной ДНК, но не с РНК, обеспечивая точное измерение концентрации от 10 пг/мкл до 100 нг/мкл (начальная концентрация образца). Анализ выполняется при комнатной температуре, уровень флуоресценции остается стабильным в течение 3 часов. На измерение концентрации не оказывают влияния примеси (белки, отдельные нуклеотиды, соли, детергенты и др.) Флуориметр позволяет проводить измерения в 200 мкл (при объеме исходного образца 1-20 мкл). Кроме того, краситель QuDye HS reagent обладает очень широким линейным диапазоном зависимости уровня сигнала от концентрации dsDNA. Эти два фактора делают данный набор быстрым и удобным средством количественного определения двухцепочечной ДНК.

Буферы и 5X Tersus Red предназначен для работы со смесью полимераз Tersus. Концентрация ионов магния в в 5X Tersus Red буфере — 12,5 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 2,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 5Х Tersus Red буфер содержит красный и желтый красители, не влияющие на работу полимеразы, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель. Буфер удобно использовать для постановки реакций, продукты которых впоследствии анализируются с помощью гель-электрофореза. Продукт ПЦР сразу наносится в гель без добавления буфера для нанесения проб. В 1% агарозном геле с 1X ТАЕ буфером электрофоретическая подвижность красного красителя соответствует фрагменту ДНК размером 1000 п.о., желтый краситель мигрирует с фронтом на уровне фрагментов 20–30 п.о.

50Х TAE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 50Х TAE рекомендовано для: – разделения длинных фрагментов нуклеиновых кислот (более 2 000 п.о.), – электрофореза с последующим выделением ДНК из геля. В состав буфера входит: 2М Трис-(гидроксиметил) аминометан, 50мМ ЭДТА, 1М уксусная кислота, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

10Х TBE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 10Х TBE рекомендовано для: – разделения коротких фрагментов нуклеиновых кислот (менее 1500 п.о.), – продолжительных электрофорезов. В состав буфера входит: 890 мМ Трис-(гидроксиметил) аминометан, 890 мМ борная кислота, 20мМ ЭДТА, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

Набор позволяет количественно определять содержание ДНК в образце в присутствии РНК, белков и других посторонних компонентов. В набор входит краситель PreciseGreen в виде 200x раствора в ДМСО, буфер и ДНК-стандарт для количественных измерений. Этот набор совместим с флуориметрами, планшетными и кюветными флуориметрами, микрофлуориметрами.

Буферы 2X Encyclo GC предназначен для работы со смесью полимераз Encyclo. Концентрация ионов магния в 2X Encyclo GC буфере составляет 7 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 3,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 2Х Encyclo GC буфер рекомендуется для работы со сложными для амплификации фрагментами, например, с фрагментами, богатыми GC участками (>65% GC). При замораживании в 2X Encyclo GC буфере может образовываться осадок. В этом случае перед применением буфер следует прогреть на 50°C до полного растворения осадка и перемешать на вортексе. При использовании Encyclo GC буфера следует внести следующие изменения в стандартную программу ПЦР: • увеличить продолжительность предварительной денатурации до 2 мин; • уменьшить температуру отжига праймера Tm на 2- 5°C относительно расчетной величины; • число циклов увеличить на 2–3 цикла ПЦР относительно ожидаемого, при отсутствии ПЦРпродукта следует добавить как минимум 10 циклов, после чего проанализировать продукт на геле.

«4X Gel Loading Dye, Blue» предназначен для нанесения образцов ДНК на агарозный гель. Перед нанесением на гель анализируемые образцы смешиваются с буфером для нанесения в объемном соотношении 3:1. Присутствие красителей в буфере облегчает нанесение образцов и позволяет в процессе электрофореза следить за миграцией ДНК. В 1% агарозном геле с 1X TAE буфером электрофоретическая подвижность голубого красителя (ксиленцианол) соответствует фрагментам ДНК размером ~3 000 п.о., синий краситель (бромфеноловый синий) мигрирует с фронтом на уровне фрагментов ~300 п.о. В 2% агарозном геле красители мигрируют на уровне ~1 000 п.о. и ~50 п.о. соответственно.