AspLE I

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CGCG CG↑CG GCGC GC↓GC Источник: Bacillus stearothermophilus FN Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 25 25 100 75 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM MgCl2; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTATCC(N)6 GTATCC(N)6↑ CATAGG(N)5 CATAGG(N)5↓ Источник: Bacillus sphaericus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 25 100 10 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 0.05% Triton X-100, 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 10% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCCGGG C↑CCGGG GGGCCC GGGCC↓C Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Xma I из Xanthomonas malvacearum Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК аденовируса-2 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК аденовируса-2 Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 100 50 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 3 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGCGC G↑CGCGC CGCGCG CGCGC↓G Источник: Bacillus stearothermophilus P Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 100 75 50 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 50°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACTGGN ACTGGN↑ TGACCN TGAC↓CN Источник: Bacillus stearothermophilus 1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 10 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 65°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG CC↑WGG GGWCC GGW↓CC Источник: Bacillus stearothermophilus 2U Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 50 50 10 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента <5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание. Структурно эндонуклеаза Dreamnase® представляет собой гомодимер с массой субъединиц 30 кДа. Эндонуклеаза Dreamnase® гидролизует фосфодиэфирные связи, что приводит к образованию олигодезоксинуклеотидов с концевыми 5’-монофосфатами длиной 3-5 оснований. Происхождение фермента. Эндонуклеаза Dreamnase® продуцируется штаммом Escherichia coli BL21 (DE3). Преимущества: активность фермента сопоставима или выше, чем у импортных аналогов; по показателям чистоты и посторонних примесей фермент соответствует требованиям Государственной Фармакопеи; произведен без использования компонентов животного происхождения. Активность/единица активности: не менее 2000 Ед/мкл (3×10^6 Ед/мг). За единицу активности эндонуклеазы Dreamnase® принимается количество фермента, превращающего 1,0 ОП260 соницированной ДНК спермы лосося в нуклеотиды за 30 минут при температуре плюс 37 °C в реакционном буфере 50 мМ Трис-HСl, pH 8,0 и 1 мМ MgCl₂. Это соответствует полному расщеплению 50 мкг соницированной ДНК спермы лосося в олигонуклеотиды. Чистота: более 90% - по данным электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) с додецилсульфатом натрия (ДСН) в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях. Буфер для хранения: 50 мМ Трис-HCl, pH 8,0±0,2, 20 мМ NaCl, 2 мМ MgCl₂ и 50% глицерин (v/v). Условия хранения: при температуре не выше минус 20 °C.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCTAGC G↑CTAGC CGATCG CGATC↓G Источник: Из Actinobacillus suis NH Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 0 – 10 0 – 10 100 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCCNNNNNGGC GCCNNNN↑NGGC CGGNNNNNCCG CGGN↓NNNNCCG Источник: Bacillus globigii Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер 2W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 75 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности Чувствительность к метилированию: Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): GCCWGGNNGGCС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCWGG ↑CCWGG GGWCC GGWCC↓ Источник: Acinetobacter johnsonii R2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 10 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Не блокируется dcm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): CCWGG в отличие от EcoRII С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y Примечание: При 37°С активность 10% от максимальной.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCNGC GC↑NGC CGNCG CGN↓CG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Fsp4H I из Flavobacterium species 4H Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 10 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 5% фрагментов ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием: 5`-G(5mC)NGC-3`/ 3`-CGN(5mC)G-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTCGAA TT↑CGAA AAGCTT AAGC↓TT Источник: Bacillus pumilus 14 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 100 25 25 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGAAG(N)16 CTGAAG(N)16↑ GACTTC(N)14 GACTTC(N)14↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Acu I из Acinetobacter calcoaceticus SRW4 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + SAM Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 50 75 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA, SAM Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл и SAM до концентрации 10мкМ. Допустимо использовать SAM в конечной концентрации 10-64 мкМ, т.е. 32 мМ штоковый раствор необходимо разбавлять в 3200-500 раз. Если объем реакционной смеси минимальный, например 10-20 мкл, то штоковый раствор SAM можно предварительно разбавить 5 мМ раствором H2SO4 или водой, хранить при -20°C. При длительной инкубации BSA использовать не рекомендуется. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGGAG(N)16 CTGGAG(N)16↑ GACCTC(N)14 GACCTC(N)14↓ Источник: Bacillus pumilus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA, 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG): 5′- C(5mC)TGGAG(N)16-3′ 3′- GGA(5mC)CTC(N)14-5′ С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTSAC ↑GTSAC CASTG CASTG↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген TseFI из Thermus species F35 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 25 50 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: RCCGGY R↑CCGGY YGGCCR YGGCC↓R Источник: Bacillus stearothermophilus 118 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лябда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 100 75 25 100 Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 65°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O

Сайт узнавания и позиция гидролиза: YGGCCR Y↑GGCCR RCCGGY RCCGG↓Y Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Acol из Acinetobacter calcoaceticusОпределение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 50 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG):CCTGGCCR С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y