Набор реагентов «ALSENSE Erwinia amylovora ПЦР-РВ»

Набор реагентов «ALSENSE Phytoplasma mali/pyri ПЦР-РВ» разработан на основе рекомендаций Европейской и Средиземноморской организации по карантину и защите растений (EPPO) и позволяет детектировать ДНК патогенов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Мишенью для амплификации является участок гена 16S рибосомной РНК фитоплазм группы 16SrX. Внутренний контроль (ВКО) разработан на основе последовательностей генов 18S рибосомной РНК яблони и груши. Зонд TaqMan® к участку генома Candidatus Phytoplasma mali и Candidatus Phytoplasma pyri несет на 5’-конце метку-краситель FAM. ВКО-специфичный зонд мечен флуорофором HEX, что позволяет пользователю валидировать этап экстракции ДНК из растений.

Genta-RT kit представляет собой набор реагентов для проведения синтеза первой цепи кДНК на матрице РНК. Набор включает в себя: in silico модифицированный гомолог обратной транскриптазы вируса лейкемии мышей Молони (MMLV) – Genta REV M ревертазу; Олиго(dT)18 праймер; воду для ПЦР и 2 вида 5-кратного реакционного буфера (включающего в себя дНТФ и ДТТ): 5х ОТ-буфер R – наличие Random-праймеров в реакционном буфере позволяет проводить синтез тотальной кДНК. 5х ОТ-буфер – требуется добавление специфических праймеров для синтеза целевого фрагмента кДНК; или добавление Олиго(dT)18 праймера для полиаденилированной РНК.

Genta-ALP щелочная фосфатаза термолабильная катализирует отщепление 5’- и 3’-фосфатных групп от ДНК, РНК, олигонуклеотидов, нуклеозидтрифосфатов, а также дефосфорилирование белков. Активна в ПЦР-буфере. Выделена из штамма Escherichia coli, экспрессирующего ген щелочной фосфатазы из Gadus morua.

5Х Genta Single-tube RT-qPCR мастер-микс – готовая к использованию смесь для проведения реакции синтеза кДНК с последующей количественной и/или качественной ПЦР с возможностью детекции результатов в режиме реального времени (ОТ-ПЦР-РВ). 5Х Genta Single-tube RT-qPCR мастер-микс содержит все необходимые для проведения ОТ-ПЦР компоненты, включая обратную транскриптазу Genta REV М, ДНК-полимеразу Genta TaqF, дНТФ, Mg2+, краситель SYBR Green I и реакционный буфер. Для постановки реакции ОТ-ПЦР в реакционную смесь необходимо добавить только олигонуклеотиды, матрицу и воду. Химически инактивированная ДНК-полимераза Genta TaqF позволяет проводить подготовительные работы при комнатной температуре и обеспечивает высокоспецифичную амплификацию благодаря возможности проведения «горячего» старта. Ингибирование активности фермента снимается при его прогревании при 95°C в течение 15 минут.

Набор реагентов «ALSENSE Forensic Quantify» предназначен для определения, оценки количества геномной ДНК человека и половой принадлежности методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в биологическом материале человека. Набор реагентов предназначен для применения в криминалистике, а также ПЦР-исследованиях в биологии и медицине. В основе работы набора реагентов лежит метод полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» (ПЦР-РВ) с использованием специфичных TaqMan зондов. Амплификация многокопийных аутосомных фрагментов разного размера позволяет провести достоверную оценку количества ДНК в исследуемом образце, а амплификация многокопийного фрагмента Y хромосомы определить половую принадлежность.

Genta Bst ДНК-полимераза — большой фрагмент ДНК-полимеразы Bacillus stearothermophilus (полипептид размером 67 кДа). Фермент обладает 5’-3’ полимеразной активностью, но не имеет 5’-3’ и 3’-5’ экзонуклеазную активность. Genta Bst ДНК-полимераза обладает вытесняющей активностью и может использоваться для изотермической амплификации ДНК в формате LAMP/RT-LAMP. Оптимальная температура активности фермента — 60-65°C.

Genta-T4 ДНК-лигаза представляет собой рекомбинантный фермент, который катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`-фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами двухцепочечной ДНК. Выделена из штамма Escherichia coli, экспрессирующего ген ДНК-лигазы бактериофага Т4. ДНК-лигаза сшивает как липкие, так и тупые концы, может восстанавливать однонитевые разрывы в двойных цепях ДНК, РНК или гибридов ДНК/РНК.

ExoGen представляет собой готовую для использования смесь ферментов Genta-ExoI экзонуклеазы I и термолабильной щелочной фосфатазы Genta-ALP в реакционном буфере. Смесь ExoGen применяется для ферментативного гидролиза избыточного количества праймеров и нуклеотидов в продуктах ПЦР (ампликонах). Очищенные таким образом ПЦР-продукты пригодны для дальнейшего использования в различных биологических приложениях, таких как клонирование и ДНК-секвенирование.

Genta бензонуклеаза представляет собой нуклеазу, которая расщепляет все виды как ДНК, так и РНК (одноцепочечные, двухцепочечные, линейные и кольцевые) с образованием олигодезоксинуклеотидов с концевыми 5’-монофосфатами длиной 3-5 оснований. Эффективна в широком диапазоне рабочих условий. Не имеет протеолитической активности. Выделена из штамма Escherichia coli, экспрессирующего ген нуклеазы из микроорганизма Serratia marcescens. Условия проведения реакции: 20 - 37°С, оптимальный буфер: 50 мM Трис-HCl (рН 8,0 при 25°С); 100 -150 мM NaCl; 1 мМ MgCl2.

Genta RevM ревертаза (обратная транскриптаза) — генетически модифицированная обратная транскриптаза вируса мышиной лейкемии Молони (MMLV), предназначенная для синтеза комплементарной цепи ДНК (кДНК) на матрице одноцепочечной РНК. Genta RevM выделена из штамма Escherichia coli, экспрессирующего модифицированный ген обратной транскриптазы MMLV. По сравнению с обратной транскриптазой «дикого типа» Genta REV M ревертаза обладает повышенной термостабильностью: оптимальная температура для работы фермента — 50°С, фермент сохраняет активность при температуре до 65°С. Обратная транскриптаза Genta RevM ревертаза обеспечивает более высокий выход кДНК, позволяет синтезировать более длинные фрагменты, имеет улучшенную эффективность при использовании GC-богатых РНК-матриц, а также имеет более высокую продуктивность. Обратная транскриптаза Genta RevM ревертаза подходит для ОТ-ПЦР в формате «one-step».

Genta TaqF ДНК-полимераза — химически модифицированный рекомбинантный аналог ДНК-полимеразы из термофильной бактерии Thermus aquaticus. Фермент обладает 5’-3’ полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью, но не имеет 3’-5’ корректирующую экзонуклеазную активность. Рекомбинантный фермент Genta TaqF ДНК-полимераза подходит для использования в рутинных ПЦР, включая ПЦР в режиме реального времени. Genta TaqF ДНК-полимераза инактивирована с помощью химической модификации, что позволяет проводить приготовление реакционной смеси при комнатной температуре. Наличие «горячего старта» повышает специфичность и чувствительность амплификации. Активация полимеразы происходит при её прогревании до 95°C в течение 15 минут.

5-кратный реакционный буфер, не содержащий сульфат магния.

Набор реагентов «ALSENSE Casein A1/A2» предназначен для качественного определения аллельных вариантов гена b-казеина. Набор включает все необходимые компоненты для проведения проведения ПЦР в реальном времени: положительные, отрицательный и внутренний контроль, воду, буферы и ферменты. Материал для исследования: Геномная ДНК, выделенная из образцов тканей Bos taurus.

Смесь дНТФ представляет собой водный раствор четырех высокоочищенных ,2’-дезоксинуклеозид-5’-трифосфатов (дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ) в эквимолярной концентрации.

5х Genta ТЕ-буфер для разведения нуклеиновых кислот. Состав: 10 мМ Трис*НCl, 1 мМ ЭДТА, pH 8,0. Приготовлен на сверхчистой воде.

Флуоресцентные зонды представляет собой олигонуклеотид с флуоресцентной меткой и гасителем, который может связываться с цепью ДНК во процессе амплификации. Когда зонд находится в свободном состоянии, оба красителя расположены близко друг к другу, поэтому происходит гашение флуоресценции. В ходе ПЦР на этапе удлинения цепи гибридизовавшийся зонд расщепляется полимеразой, которая обладает 5’-экзонуклеазной активностью, красители разъединяются, и наблюдается флуоресцентный сигнал, пропорциональный количеству амплифицированного продукта. Интенсивность флуоресценции увеличивается в каждом цикле пропорционально скорости расщепления зонда. Использование зондов в ПЦР позволяет повысить точность и селективность реакции. Широкий спектр флуоресцентных красителей: FAM, R6G, VIC, HEX, JOE, TAMRA, ROX, Cy 5 и Cy5.5 Возможность мультиплексного анализа нескольких ДНК-мишеней в одной пробирке. Высокая эффективность ПЦР-РВ. Контроль качества зондов: очистка ВЭЖХ и проверка масс-спектрометрией

Набор реагентов «CleanCheck DNAse-RNAse Free» предназначен для выявления загрязнений нуклеазами. Набор позволяет обнаружить самые низкие количества РНКазы и ДНКазы, деградирующие как одноцепочечные, так и двуцепочечные ДНК. Применим для проведения контроля пластиковых изделий, а также для выявления загрязнений нуклеазами в ПЦР-лабораториях на любых видах поверхностях, в растворах, реагентах (не являющихся ингибиторами ПЦР), на пластиковых расходных материалах и т.д. Преимущества: - Возможность определения ДНКаз/РНКаз на различных поверхностях, одежде, оборудовании и реагентах. - Выявление локализации загрязнения нуклеазами. - Время проведения анализа: 1,5 часа. Простая пробоподготовка без этапа экстракции, время ручных манипуляций: 10 – 15 минут. - Нет необходимости в приобретении нового оборудования. - Чувствительность выявления следовых загрязнений: РНКаза A: 0.1 pg/μl; ДНКаза I: 1 x 10–5 units/μl.